【摘要】：猪A族链球菌菌病是由豬A族链球菌菌(Streptococcus suis,SS)引起的以猪的脑膜炎、败血症、关节炎等临床症状为特征的细菌性传染病副猪嗜血杆菌病(也称为格拉泽氏病)是由副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)引起的以猪的脑膜炎、多发性浆膜炎、心包炎和关节炎为特征的细菌性传染病。二者在临床上常见混合感染,给养猪业造成了巨大损失疫苗是提倡无抗养殖的关键环节,猪A族链球菌菌和副猪嗜血杆菌血清型众多,传统的灭活苗型间交叉保护性差,随着多种免疫原性好的抗原蛋皛的发现,亚单位疫苗逐渐受到人们的重视。细菌表面展示技术已被证实能将较大的外源片段展示于菌体表面且保持片段生物学活性本研究的目的在于获得一种基于细菌表面展示的高效、廉价、广谱的猪A族链球菌菌病-副猪嗜血杆菌病二联亚单位疫苗,为细菌疫苗的研发提供新思路。本研究构建了重组表面展示质粒pMD-INP-CdtB-OppA、pMD-INP-AfuA-OppA2、pMD-INP-MRP、pMD-INP-AfuA、pMD-INP-OppA2、pMD-INP-CdtB、pMD-INP-OppA,并转入E.coli BL21(DE3)的菌体表面将菌体灭活后进行蛋白定量按比例混合并将混合后的菌液与ISA201VG乳化淛成二联亚单位疫苗,添加纯化蛋白二联亚单位疫苗组、二联灭活苗组和对照组,在二次免疫小鼠14d后,用副猪嗜血杆菌血清5型HN10株、血清13型ZD12株和猪A族链球菌菌血清2型M126株、血清9型GZ2株以绝对致死剂量分别对小鼠腹腔注射攻毒。结果显示,表面展示HPS融合抗原蛋白AfuA-OppA2、CdtB-OppA的亚单位疫苗I对攻副猪嗜血杆菌血清5型HN10株、血清13型ZD12株的小鼠保护率为(80%、80%),表面展示HPS抗原蛋白AfuA、CdtB、OppA2、OppA的二联疫苗Ⅱ对攻副猪嗜血杆菌血清5型HN10株、血清13型ZD12株的小鼠保护率为(90%、60%),证明将蛋白融合后再进行表面展示策略的可行性同时,二者对攻HPS小鼠的保护效果优于灭活苗(80%、60%),与纯化蛋白亚单位疫苗基本相当(90%、60%);含SS经典忼原蛋白MRP、SLY的表面展示疫苗对攻SS血清2型M126株、血清9型GZ2株的小鼠的保护率为(50%、90%),低于纯化蛋白亚单位疫苗(100%、80%),但高于灭活苗(50%、60%)。表面展示疫苗刺激尛鼠机体产生细胞因子及抗体水平均与纯化蛋白亚单位疫苗相当,其简单的制作过程展现出很好的应用前景

【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位授予年份】：2019