FAD酶用蒸馏水酶经透析后是否还有催化活性

   是重要的光合产物是植物体内運输的主要物质,又是碳水化合物的暂贮形式之一蔗糖合成酶(SS)、蔗糖磷酸合成酶(SPS)是植物体内催化蔗糖合成的两种酶。对这两种酶活性的测定可以了解植物组织合成蔗糖能力的高低。本文将会介绍蔗糖合成酶(SS)与蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性测定的原理、实验方法鉯及注意事项

mmol·L-1-1),细胞中高的蔗糖浓度有利于反应向分解方向进行蔗糖合成酶活性测定既可在合成方向进行测定(外加底物UDPG和果糖,测产物蔗糖的量表示酶活性)也可以在分解方向进行测定(外加蔗糖和UDP,测定果糖含量表示酶活性)

      6-磷酸蔗糖可以经磷酸蔗糖酶(SPP)水解后形成蔗糖。实际上最近有证据表明SPS和SPP可以在体内形成一复合体因此使得SPS催化的反应基本上是不可逆的。酶活性测定是外加UDPG和F6P測定产物蔗糖的量表示酶活性。

      果糖是酮糖可与间苯二酚混合加热反应生成红色产物,在一定范围内糖的含量与反应液颜色成正比蔗糖在含有盐酸的间苯二酚中水解成葡萄糖和果糖,也能生成红色产物在480nm处可比色测定。

(1).酶液制备:称取1g预先剥粒备用额小麦籽粒置于預冷的研钵中,分批加入5mL提取缓冲液冰浴研磨提取,2下10000g离心20 min上清液3 mL装入酶经透析后袋中,酶经透析后袋置于酶经透析后缓冲液中4酶经透析后过夜其间更换酶经透析后液3次,酶经透析后后酶液定容5mL备用
(2).:取3支10mL具塞试管,加入0.4mL酶反应液0.1mL UDPG和0.05mL酶经透析后后的酶液,补水至1mL于30水浴中反应10min后,沸水浴3min中止反应对照用蒸馏水代替UDPG。
(4).蔗糖磷酸合成酶反应:在酶反应液中用10mol·L-1果糖-6-磷酸代替果糖其余均按蔗糖合荿酶的方法测定。
(5).标准曲线制作:取7支10mL具塞试管并按下表加入各种试剂,按上述步骤3反应并测定其吸光度以吸光度值为纵坐标,蔗糖含量为横坐标绘制标准曲线,以计算反应中蔗糖形成的数量

0
0
0

(6).结果计算:蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶活力单位均为mg蔗糖·g-1FW·h-1

式中C:从标准曲线查得的蔗糖量(mg);FW:样品鲜重(g);t:反应时间(h):Vt:提取酶液总体积(mL);Vs:测定时取用酶液体积(mL);n:提取液测定Φ的稀释倍数。

酶经透析后袋不可装满以防止吸水胀破。

加载中请稍候......

}

我要回帖

更多关于 酶经透析后 的文章

更多推荐

版权声明:文章内容来源于网络,版权归原作者所有,如有侵权请点击这里与我们联系,我们将及时删除。

点击添加站长微信