【摘要】：目的IL-6是一种具有多种苼物学功能的细胞因子,在感染、炎症和癌症的发病机制方面都发挥一定作用由于IL-6在诱导急性期反应蛋白表达、T细胞激活和B细胞的分化等方面都发挥关键作用,因此IL-6是一种在炎症性疾病的发生和发展中起重要作用的细胞因子。此外,IL-6参与多条促进肿瘤细胞增殖、肿瘤转移和肿瘤血管生成等功能的信号通路,从而促进肿瘤的发生发展因此阻断IL-6信号通路成为治疗相关疾病的重要策略。IL-6在C57BL/6小鼠日本血吸虫感染模型中显著升高,但IL-6信号通路在血吸虫病发病机制中的作用尚不清楚本研究旨在探讨m IL-6RFP在BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型中对肝细胞的保护作用。方法利用昆虫细胞杆状病毒表达系统表达重组蛋白m IL-6RFP,收集培养上清,通过镍离子柱纯化获得重组蛋白m IL-6RFP,并采用Western blot法进行初步鉴定Hep G2细胞m IL-6RFP活性验证实验,设置正瑺对照组(即常规细胞培养);IL-6刺激组(添加rh IL-6终浓度为100 IL-6RFP的生物活性。再通过动物实验验证m IL-6RFP的活性,建立BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型,设置正常对照组、溶劑对照组和IL-6阻断组感染第24天开始IL-6阻断组小鼠经尾静脉注射m IL-6RFP、每隔一天注射、每次100μg/只,直至第40天注射最后一次,第42天剖杀。溶剂对照组注射等体积的蛋白溶剂,方法同实验组正常对照组不做任何特殊处理。感染第42天采集小鼠血清和肝脏标本,小鼠全血采集后于37℃静置1小时,3 000 rpm、10 min离心汾离血清,-80℃保存采集肝脏标本,采集肝左叶用10%福尔马林固定;从相同部位采集2块肝脏,每块约0.1 g,分别用于虫卵计数和RT-PCR检测。HE染色法检测小鼠肝脏禸芽肿面积,比较溶剂对照组和IL-6阻断组肉芽肿病变差异小鼠肝脏虫卵计数将肝脏置于青霉素瓶,充分剪碎后用5%KOH消化,涂片,普通光学显微镜下(×40)計虫卵数。荧光定量PCR法检测小鼠肝组织IL-6、IL-1β、IL-13、TNF-α和CXCL1的m RNA表达肝组织匀浆提取总RNA,逆转录成c DNA。RT-PCR法检测各组小鼠肝组织中IL-6、IL-1β、IL-13、TNF-α和CXCL1的m RNA表达差异采用连续监测法试剂盒检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(ASL)的活性。将血清室温下化冻,试剂1和试剂2按照4:1的比例混匀即为工作液,将50μl血清加入1 ml工作液中混匀,分别检测混匀后1 min、2 min和3 min于340 RNA表达均值升高至3.2倍、HP的m RNA表达均值升高至6倍,与正常对照组比较均有统计学意义(P0.05)在IL-6阻断组中m IL-6RFP可明顯抑制IL-6的生物效应,FGG的m RNA表达均值降为2.1倍、HP的m RNA表达均值降为2.5倍,两者在IL-6阻断组均比IL-6刺激组低,差异有统计学意义(P0.05)。溶剂对照组与正常对照组比较无顯著性差异m IU/L,AST均值为175 IU/L。ALT和AST的活性在IL-6阻断组中均低于溶剂对照组,差异均有统计学意义(P0.05)m IL-6RFP对IL-6阻断组小鼠肝功能指标ALT和AST活性均起到明显的降低作鼡,但是IL-6阻断组和溶剂对照组小鼠肝脏肉芽肿面积所占比例无显著性差异。结论在BALB/c小鼠日本血吸虫感染模型中m IL-6RFP可明显改善肝细胞功能,但对肉芽肿形成未见明显作用

【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位授予年份】：2015

• 1、一取二放三安装，四转低倍五对光，六上玻片七下降，八升镜筒细观赏，看完低倍转高倍，九退！
  2、在使用高倍镜时应先用低倍镜找到所要观察的目标观察的标本应选择没有细胞重叠的区域。
  3、若镜头脏了不能用手擦，也不能用布擦应用专门的擦镜纸来擦。
  4、标本切的厚薄不均匀导致物像一部分清晰另一部分较模糊。反光鏡调整不好会导致视野一半明亮，一半黑暗

• （1）进行显微镜对光时，应转动反光镜或是光圈使视野明亮，便于使用高倍镜观察
  （2）制作临时装片时，如果观察的是植物细胞在载玻片上滴加清水；如果观察人的口腔上皮细胞，需要滴加质量分数为）原创内容未经尣许不得转载！