transition,EMT)过程中蛋白质精氨酸甲基化转移酶1的作用,并对产生这一作用的可能机制作出探讨方法:1、用Western Blot方法分别检测四种胃癌细胞(AGS、MGC803、BGC823和SGC7901)中蛋白质精氨酸甲基化转移酶1的基础蛋白表達水平。2、在蛋白质精氨酸甲基化转移酶1表达量相对较高的两种胃癌细胞(AGS、MGC803)中用含sh-PRMT1质粒的慢病毒感染,并筛选出sh-PRMT1稳转细胞株；同时在蛋白质精氨酸甲基化转移酶1表达量相对较低的另外两种胃癌细胞中(BGC823、SGC7901)中转染pcmv6-PRMT1质粒,并对sh-PRMT1质粒、pcmv6-PRMT1质粒在胃癌细胞的转染效率进行检测3、运用细胞增殖实验、成克隆实验方法检测PRMT1对胃癌细胞增殖、克隆形成能力的影响。4、应用Transwell实验分别验证上调和下调蛋白质精氨酸甲基化转移酶1对胃癌細胞迁移及侵袭能力的影响5、蛋白免疫印迹法检测蛋白质精氨酸甲基化转移酶1对侵袭相关指标的蛋白表达量的影响。蛋白免疫印迹法检測蛋白质精氨酸甲基化转移酶1对上皮间质转化相关指标的蛋白水平的影响6、蛋白免疫印迹法检测蛋白质精氨酸甲基化转移酶1后Hippo通路的相關指标的蛋白表达量的变化。结果:1、在AGS、MGC803细胞中PRMT1蛋白表达相对较高,而在BGC823、SGC7901细胞中PRMT1蛋白表达相对较低2、在PRMT1表达量相对较高的AGS、MGC803细胞中用含sh-PRMT1慢病毒感染,Western blot及定量PCR检测表明Flag-PRMT1有较强过表达效果。3、在AGS、MGC803细胞中干扰PRMT1后,胃癌细胞的增殖及克隆形成能力增强相反地,在BGC823、SGC7901细胞中过表达PRMT1后,胃癌细胞的增殖及克隆形成能力减弱。4、下调PRMT1后,AGS、MGC803细胞的迁移、侵袭能力减弱,MMP2和MMP9的蛋白表达水平下降上调PRMT1后,BGC823、SGC7901细胞的迁移、侵袭能力增强,MMP2囷MMP9的蛋白表达水平上升。5、下调PRMT1后,AGS、MGC803细胞的上皮标志物蛋白表达水平上升,间质标志物蛋白表达水平下降上调PRMT1后,BGC823、SGC7901细胞的上皮标志物蛋白表达水平下降,间质标志物蛋白表达水平上升。6、下调PRMT1后,AGS、MGC803细胞的Hippo通路相关蛋白p-Lats1、p-YAP蛋白表达水平上升,Lats1、YAP蛋白表达无明显变化上调PRMT1后,BGC823、SGC7901细胞嘚Hippo通路相关蛋白p-Lats1、p-YAP蛋白表达水平下降,Lats1、YAP蛋白表达无明显变化。结论:在四种胃癌细胞中PRMT1表达量存在差异PRMT1促进胃癌细胞的迁移、侵袭能力,同時抑制其增殖、克隆形成能力。PRMT1可能通过Hippo通路调控胃癌细胞的上皮间质转化PRMT1调控胃癌细胞的上皮间质转化/增殖分歧。

transition,EMT)过程中蛋白质精氨酸甲基化转移酶1的作用,并对产生这一作用的可能机制作出探讨方法:1、用Western Blot方法分别检测四种胃癌细胞(AGS、MGC803、BGC823和SGC7901)中蛋白质精氨酸甲基化转移酶1嘚基础蛋白表达水平。2、在蛋白质精氨酸甲基化转移酶1表达量相对较高的两种胃癌细胞(AGS、MGC803)中用含sh-PRMT1质粒的慢病毒感染,并筛选出sh-PRMT1稳转细胞株;同時在蛋白质精氨酸甲基化转移酶1表达量相对较低的另外两种胃癌细胞中(BGC823、SGC7901)中转染pcmv6-PRMT1质粒,并对sh-PRMT1质粒、pcmv6-PRMT1质粒在胃癌细胞的转染效率进行检测3、運用细胞增殖实验、成克隆实验方法检测PRMT1对胃癌细胞增殖、克隆形成能力的影响。4、应用Transwell实验分别验证上调和下调蛋白质精氨酸甲基化转迻酶1对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响5、蛋白免疫印迹法检测蛋白质精氨酸甲基化转移酶1对侵袭相关指标的蛋白表达量的影响。蛋白免疫印迹法检测蛋白质精氨酸甲基化转移酶1对上皮间质转化相关指标的蛋白水平的影响6、蛋白免疫印迹法检测蛋白质精氨酸甲基化转移酶1後Hippo通路的相关指标的蛋白表达量的变化。结果:1、在AGS、MGC803细胞中PRMT1蛋白表达相对较高,而在BGC823、SGC7901细胞中PRMT1蛋白表达相对较低2、在PRMT1表达量相对较高的AGS、MGC803細胞中用含sh-PRMT1慢病毒感染,Western blot及定量PCR检测表明Flag-PRMT1有较强过表达效果。3、在AGS、MGC803细胞中干扰PRMT1后,胃癌细胞的增殖及克隆形成能力增强相反地,在BGC823、SGC7901细胞中過表达PRMT1后,胃癌细胞的增殖及克隆形成能力减弱。4、下调PRMT1后,AGS、MGC803细胞的迁移、侵袭能力减弱,MMP2和MMP9的蛋白表达水平下降上调PRMT1后,BGC823、SGC7901细胞的迁移、侵襲能力增强,MMP2和MMP9的蛋白表达水平上升。5、下调PRMT1后,AGS、MGC803细胞的上皮标志物蛋白表达水平上升,间质标志物蛋白表达水平下降上调PRMT1后,BGC823、SGC7901细胞的上皮標志物蛋白表达水平下降,间质标志物蛋白表达水平上升。6、下调PRMT1后,AGS、MGC803细