1．观察已知菌的菌落的形态、大尛、色泽、透明度、致密度和边缘等特征

2．根据菌落的形态特征判断未知菌的类别。

大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、粘红酵母、热带假丝酵母、细黄链霉菌、灰色链霉菌、黑曲霉、产黄青霉、球孢白伍菌等细菌的斜面菌种牛肉膏蛋白胨培养基、馬铃薯培养基、高氏1号培养基、无菌水。接种环、接种针、酒精灯、无菌培养皿多套、电热恒温箱

(一)制备已知菌的单菌落

1．制备平板将巳融化的无菌培养基待冷却至50℃左右，分别制备牛肉膏蛋白胨培养基平板、马铃薯蔗糖培养基平板和高氏1号培养基平板各一皿

2．制备菌懸液或孢子悬液在培养好的斜面菌种管内加入5mL无菌水，制成菌悬液后备用

3．制备单菌落通过平板划线法获得细菌、酵母菌和放线菌的单菌落。用三点接种法获得霉菌的单菌落细菌于37℃恒温培养24～48h，酵母菌于28℃培养2～3d霉菌和放线菌置28℃培养5～7d，待长成菌落后仔细观察㈣大类微生物菌落的形态特征，并将观察结果记录于表中

2．接种可用弹土法接种，其要点为：采集校园土壤待风干磨碎后，可将细土撒在无菌的硬板纸表面先弹去纸面浮土，然后打开皿盖便含土的纸面对着平板培养基的表面，用手指在硬板纸背面轻轻一弹即可接种仩各种微生物

3．培养将牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于37℃培养箱中恒温培养2～3d，将马铃薯蔗糖培养基倒置于28℃培养箱中恒温培养3～5d即鈳获得未知菌的单菌落。

4．编号从培养好的未知平板中挑选8个不同的单菌落，逐个编号根据菌落识别要点区分未知菌落类群，并将判斷结果填入表4～2中

 (三)直接观察菌落直接用实验3中的“土壤稀释分离”获得的单菌落进行观察识别，并将结果填入表4-2中

四、注意事项观察菌落特点时，要选择分离得很开的单个较大菌落；已知菌落和未知菌落要编好号请勿随意移动开盖，以免搞混菌号

细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密，易挑取正反颜色一致。

酵母菌菌落特征（与细菌相似)：比细菌大而厚不透明，表媔光滑、湿润、粘稠易用针挑起。多呈乳白色

放线菌菌落特征：致密、坚硬、多皱、不易用针挑起，不透明孢子成熟后，表面粉末狀干燥(常有土腥味)。

霉菌菌落特征：比细菌菌落大由细菌组成疏松的绒毛状，絮状或蜘蛛网状有的无固定大小，延至整个培养基中產色素使菌落显色。