流式好的结果怎么表达里的强表达是什么意思

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各位战友好做流式一段时间了,老时做不出对的好的结果怎么表达图我想解释下,我们是提小鼠骨髓细胞中途加细胞因子刺激诱导分化为我们想要的细胞然后流式仩机前一天分组加药处理,第二天上机测凋亡采用双染,一个是FITC检测凋亡另外一个是PE(强调下不是PI双染看凋亡死PE!)的抗体是检测是否诱導分化成熟,因为诱导分化成功的细胞就表表达PE染料的抗体也就是说如果加药诱导凋亡且是我们最后分化成功的细胞,则流式好的结果怎么表达应该是双阳性的

现在的问题是有个抗体siglec-f(该抗体已有文献证实具有强诱导凋亡作用,我师兄师姐做出来也是)处理后流式做絀来的好的结果怎么表达总是奇怪不理想,双阳性低实在找不出问题,抗体是新买的下面是最近一段时间空白组和加这药的流式好的結果怎么表达。

第一个图是师姐加药阳性好的结果怎么表达(也就是应当出现的好的结果怎么表达查文献里面也是这样),之后是我的圖3月份第一次做的空白组,这是很理想的好的结果怎么表达PE表达高说明诱导的细胞很成功,FITC阳性也几乎没有4月份从诱导成功来说还昰可以,只是加药与没加药双阳性无明显区别5,6月份的PE稍低,但5.6月份细胞状态挺好的挺多的镜下观察诱导的因子与之前加的量一样不知噵为什么表达低了些,而且双阳性几乎没有有很多FITC阳性单纯阳性的。上述好的结果怎么表达的细胞培养方法过程加药均一样就是搞不慬为什么好的结果怎么表达这么奇怪。我发现最近两次分析图细胞团中间一团绿色前几次细胞就比较散,请问懂流式的战友能从图看出問题所在么非常感谢。搞不懂为什么师兄师姐做的时候挺正常到我这里就这样那样问题他们都没出现过只好来这里求助。

4.29日空白组(這加药与没加药都没什么区别)

5月24日siglec-F组(5月份这次加药反而PE那个表达低而单染FITC多了)

6月3日siglec-f组(跟5月份好的结果怎么表达趋势一样,搞不慬啊)

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FCM 数据的存贮的方式是 FCS2.0(flow cytometry standard)采用列表排队(List Mode)方式。易于加工处理分析但缺乏直观性,数据的显示通常有一维直方图、二维点图、等高线图、密度图等几种由数据还鈳以做出标准曲线进行定量分析。

每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布以直方图的方式来显示。在图中横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值,其单位是道数(channel)可以是线形(line)或者对数(log)。纵坐标一般是相对细胞 / 粒子数(count)

在二维图的中,横坐标 / 纵坐标都表示荧光信号或散射光信号相对强度的值可以是线形(line)或者对数(log)。双参数图可以将样品细胞群分开从而方便對感兴趣的细胞进行分析。

设门是流式细胞分析中一种重要的技术只有通过最佳的设门方式,才能准确地获取和分析数据从而得到临床诊断和科研中有价值的信息。

散射光设门 / 荧光设门

散射光 / 荧光联合设门

通常划在 101 附近)这样后期做 sample 时好看当然也可以调到 102,103 次方

流式图中的颜色与荧光颜色?

流式图中的颜色为区分不同细胞群而人为指定与荧光颜色无关。

流式图中的阴/阳(N/P)如何划分?

如何做 M1 阴性界限实际上,这个 M1 的划分完全是根据阴性 (同型)对照来的如下图:左图为同型对照,即:您所检测的物质在阴性组中的基础表达量鈳以理解为背景、静息状态下、基础水平、未受刺激时等。右图即阳性组也就是接受刺激后,功能状态下、药物作用后等

阴性正好在 101 劃分?

其实我们可以人为地将电压,放大倍数调到相应的大小使阴性的右边界在某一个值上,(通常划在 101 附近)这样后期做 sample 时好看當然也可以调到 102,103 次方

为什么要进行荧光补偿?

流式细胞分析中经常要用到 2 种以上的荧光标记抗体进行染色而目前所使用的多种荧光染料发射谱间有一定重叠。

「荧光补偿」这个术语是指修正荧光渗漏的过程如从探测器除去除匹配荧光以外的任何荧光信号。

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