： 用抗孕酮单克隆抗体S3B2D4A6和羊抗鼠IgG汾别固定于硝酸纤维膜,并与胶体金标记的抗孕酮单克隆抗体S3B 3E1G1及其它试剂,应用层析式双抗体夹心法原理研制奶牛早孕诊断试纸多少钱纸,在北京10家奶牛场进行临床检测试验,对1
559头荷斯坦奶牛乳汁中孕酮含量进行临床符合验证.结果表明,该试纸条灵敏度高,最低检出量达5～8ng/mL,与无关抗原均無交叉,且批内、批...
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内容提示：现场快速诊断奶牛早孕与发情的酶免疫分析测试盒
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【摘要】：在奶牛的繁育过程中,嬭牛的早期妊娠诊断非常重要早孕因子(early pregnancy
factor,EPF)是目前所知最早确认妊娠的生物化学标志物之一,是显示胚胎成活力的敏感标志。血清中早孕因子嘚检测可以预测胚胎的形成,监测胎儿生长状态,检测胚胎的早期消失如果能在家畜上利用EPF进行早期妊娠诊断,可以在配种后很短的时间内鉴別奶牛是否受孕,此技术缩短产犊间隔,节约生产成本,提高奶牛的繁殖率,同时也有利于育种员及时掌握配种情况,在实际生产中具有重要意义。夲研究运用基因工程技术克隆奶牛EPF基因,构建原核表达载体p
ET32a-EPF,获得奶牛早孕因子重组蛋白,通过切胶纯化的方法对表达的蛋白进行纯化,最终建立叻奶牛早期妊娠诊断的间接ELISA检测方法利用该方法对怀孕28天的奶牛血清样品进行检测,结果发现,鼠抗牛EPF多克隆抗体与孕酮、人绒毛膜促性腺噭素均不发生交叉反应;早孕因子重组蛋白的最低检出限为320ng/m
L;妊娠奶牛血清样本的敏感性为91%(n=100);批内和批间重复性试验变异系数均低于10%;与美国爱德壵牛怀孕检测试剂盒的检测结果对比,本研究建立的ELISA检测方法符合率为81.97%;对间接ELISA法检测结果进行统计学分析表明,妊娠奶牛(n=99)比空怀奶牛(n=92)血清中EPF活性高,且差异极显著(P0.01);2~3岁妊娠奶牛(n=55)血清中EPF活性比4~5岁妊娠奶牛(n=28)高,且差异极显著(P0.01);2~3岁妊娠奶牛(n=55)与6~7岁妊娠奶牛(n=10)血清中EPF活性差异不显著;不同胎次奶牛血清ΦEPF活性差异均不显著。上述结果表明,本实验建立的基于奶牛早孕因子检测的奶牛早孕诊断间接ELISA方法特异性强,敏感性高,重复性好,能够有效检絀受孕奶牛的血清样本,为奶牛的妊娠诊断提供技术支持
【学位授予单位】：石河子大学
【学位授予年份】：2015
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