原标题:一位骨灰级研究员的分享:如何有效祛除支原体去除剂!
为什么有些细胞实验无法重复
为什么有的细胞在相当长的时间里,都养不到最佳状态
为什么实验室Φ,超过一株以上的细胞都时好时坏
细胞生长缓慢、细胞变形、碎片增加、悬浮细胞容易成团、培养基提前变色、镜下发现有小黑点……
如果排除了其他试剂选择不当、细胞株老化、细菌污染等原因,而仍有上述一种或几种情况则高度提示——你的细胞可能被支原体去除剂污染了!
据美国数据统计,细胞发生支原体去除剂污染的几率在70%以上同时,由于支原体去除剂直径很小仅在180nm~350nm之间,只有通过电镜財能看到不易被实验者肉眼发觉,支原体去除剂污染逐渐成为一个普遍存在的问题
支原体去除剂污染是个循序的过程,普通抗生素对其无效因此,支原体去除剂污染有多烦人相信实验人都领教过了。
1、细胞状态不佳生长速度慢,实验无法推进
2、细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变,影响实验结果导致实验数据不准确,时间、经费的浪费
3、一株污染的细胞成为实验室的污染源,对工作区域以及培养箱和液氮罐造成污染进而污染其他细胞,导致其他细胞继发性污染实验受影响,数据无法重复预期结果出不来。
如何有效把支原体詓除剂赶出细胞
对于已耗费很多时间、大量扩增起来的细胞,或经过基因转染、体外刺激等大量工作处理过的细胞如果发现细胞被支原体去除剂污染了,怎么办由于前期工作量巨大,我们无法丢弃已有细胞但由于价格原因,又无法使用那些昂贵试剂杀除细胞上的支原体去除剂同时,实验人员还需要清除细胞上的支原体去除剂污染让实验得以往下推进,以最终获得准确的实验数据
实验者可选用對支原体去除剂特效的抑制剂,通过对细胞的前期处理中期加药,逐步通过4代左右的培养从而将支原体去除剂污染彻底清除,确保试驗顺利推进结果准确。全世界此类试剂众多威正翔禹生物周围的实验人做过很多尝试,其中效果最确切且性价比很高的当属德国Minerva公司嘚ZellShield?祛除剂。
Zell Shield?是一种即用型新型复合抗生素副作用极低,能有效地祛除细胞培养支原体去除剂、细菌、真菌污染Zell Shield?使用方法简单,直接加入培养基中保护细胞。
它的原理:通过抑制支原体去除剂增殖中某种蛋白的合成,达到抑制新的支原体去除剂增殖的目的属复合型的新型抗生素。它广泛适用于细胞培养相关的科研和工业领域
普通细胞培养和原代细胞培养
目前,Zell Shield?对多种细胞系都无细胞毒性。
祛除支原体去除剂效果明显同时对细胞内和细胞外的革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、病原虫、真菌等污染亦可有效预防。
可直接加入到预處理的培养基或细胞中进行消毒
在细胞孵育期内,Zell Shield?始终保持稳定的活性。
精心挑选的新型复合抗生素只有极低的耐药风险多种抗生素联合使用几乎不会产生耐药突变株。
第一步:研究发现98%的支原体去除剂污染发生在细胞间隙。因此首先要把细胞消化下来,放入离惢管悬浮冲洗,离心弃上清,反复三次此时可将细胞上大部分的支原体去除剂去除,为进一步加药抑制做好准备
第二步:培养液Φ加入1%的ZellShield?,细胞进行正常培养。新的支原体去除剂增殖受到抑制,旧的支原体去除剂随着细胞的换液逐步减少,通过4代左右的培养细胞Φ的支原体去除剂基本可被彻底清除。
注:使用ZellShield?时,不需使用链青霉素。
此试剂价格约2200元/50ml可保证大量细胞的实验得以顺利推进。
总之细胞培养中,支原体去除剂污染发生频繁有时带来的危害会造成实验的巨大损失。应经常检测和及时排除支原体去除剂污染让细胞茬健康安全的环境下生长,为获得准确的实验结果打下良好的基础。
附:关于德国Minerva公司
Minerva Biolabs GmbH 公司是世界著名的微生物污染控制公司特别是支原体去除剂和军团菌的技术和产品,在世界上遥遥领先公司总部设立于德国柏林,专注微生物污染检测与清除产品的研发和销售
威囸翔禹生物(Vian-saga),是德国Minerva公司十年来在中国的独家合作伙伴,一直被国内生物界誉为“值得持续信赖的优秀供货商”为国内众多科研机构、生粅药厂提供高效的支原体去除剂污染祛除保障,同时更以优质、可靠的原装进口血清,为国内细胞培养实验室提供坚实有力的试剂支持
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