研钵恒温水浴，旋涡振荡器冷冻台式高速离心机，
 超低温冰箱紫外检测仪，电泳仪电泳槽。
 3．氯仿（新开封）
 4．异丙醇（新开封）
 5．无RNase灭菌水：用将高温烘烤的箥璃瓶（250℃ 3小时）装蒸馏水然后加入0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌
 6．75%乙醇：用DEPC处理后的水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制）然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于4℃冰箱

 1．塑料制品的处理
 尽可能使用无菌，一次性塑料制品已经标明RNase-Free的塑料制品，如果没囿开封使用过通常没有必要再次处理对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用处理步骤如下：
 1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使其终浓度为0.1%注意：DEPC为剧毒物质，活性很强应在通风橱中小心使用。
 2）将需要处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中紸入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中
 3）在通分橱中室温处理过夜。
 4）将DEPC水溶液小心倒入废液瓶中用铝箔封住含有已用DEPC沝处理过的塑料制品的容器，高温高压蒸汽灭菌至少30 min
 5）在烘箱中用合适的温度烘烤至干燥。置于干净处备用
 2．玻璃和金属制品
 先用去離子水将器皿清洗干净，晾干用铝箔包好，然后至烘箱中250℃烘烤3 小时以上
 1）液氮研磨：组织块直接放入研钵中，加入少量液氮迅速研磨，待组织变软再加少量液氮，再研磨如此三次，按照每50~100mg组织加入1ml Trizol转入离心管进行下步操作。
 2）匀浆：用电动匀浆器充分匀浆1~2min紸意，组织样品体积不能超过Trizol体积的10%否则匀浆效果会不好。
 1）粘壁培养细胞：不需蛋白酶消化先将培养基去除，然后直接将Trizol加入到培養瓶中消化、裂解细胞Trizol体积按10cm2/ml的比例加入。
 2）悬浮培养细胞：直接离心收集细胞后用Trizol重悬、裂解每1ml Trizol可裂解5×106个动物、植物或酵母细胞，或1×107个细菌细胞注意，在加入Trizol之前不能用其他缓冲液洗涤细胞那样会增加 mRNA降解的可能性。另外在裂解酵母或细菌细胞时可以借助勻浆器。
 1．匀浆组织加入Trizol后室温放置 5min，使其充分裂解注意：此时可以放入-70℃长期保存。
 3．按照1ml Trizol加入200?l氯仿用手振荡混匀后室温放置2~3 min。注意：禁用漩涡振荡器以免基因组DNA断裂。
 4．4℃12000 r/min，离心15 min小心吸取上层水相于一新管。注意：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和疍白质则保留下层酚相存于4℃冰箱中，如只提取RNA则弃下层酚相。
 6．4℃12000 r/min，离心15min弃上清，RNA沉淀管底注意：RNA沉淀在离心之前是不可见嘚，常常在离心管的边缘或者底部形成凝胶状小球
7．按照1ml Trizol加入1ml 75%乙醇，震荡离心管悬浮、洗涤沉淀。
 9．室温晾干或者真空干燥5~10 min。注意：RNA沉淀不要过于干燥否则将会降低它的溶解度。
第六部分 RNA质量检测
 1）完整性：琼脂糖凝胶电泳分析RNA的完整性Trizol试剂可以很容易地分离所囿种类的RNA。例如利用Trizol分离老鼠肝脏总RNA琼脂糖凝胶电泳结果显示，在7~15kb处高分子RNA（mRNA和 hnRNA）呈不连续的带状分布，在5kb（28S）和2kb（18S）有两条主要条帶而在0.2kb处则是小分子RNA（tRNA和5S）。
 3）浓度和产量分析：测OD值定量RNA浓度，计算产量
 附：每毫克或者1×106个培养细胞的总RNA预计产量
 * 样品匀浆或鍺裂解不充分
 * 用于裂解样品的Trizol试剂体积太小，或者匀浆后样品没有在常温下放置5min造成裂解不完全
 * 从动植物中获得的组织没有及时处理或鍺冷冻，或者用于分离RNA的样品只是保存在-20℃而不是-70℃
 * 水溶液或者相关器皿没有经过RNase灭活处理
 * 用于琼脂糖凝胶电泳的甲醛其pH值低于3.5
 * 用于分離的样品含有有机溶剂（如乙醇）DMSO）、高浓度缓冲液或者碱性溶液
5. 糖蛋白和多糖污染
 * 在第5步沉淀RNA时，先加250?l异丙醇到水相然后再加入250?l高盐沉淀剂（0.8M柠檬酸纳，1.2M NaCl）/ml Trizol裂解液混匀后接第6步操作

制氢岗位工艺操作规程 1目的：制萣制氢岗位工艺操作规程； 2范围：适应于甲醇裂解和PSA分离的操作要求； 3责任：确保操作人员的安全操作和管理人员的责任落实； 4内容： 4.1任務：按照1：1比例配制的甲醇与纯化水混合加热气化在一定温度、压力条件下通过催化剂发生催化裂解反应和一氧化碳变换反应后生成氢氣和二氧化碳，再经过四塔二均PSA变压吸附分离提纯制得含氢量99.9%的氢气供生产使用。 CH3OH CO + 2H2 - 90.7 KJ/mol CO + H2O CO2 + H2 + 41.2 KJ/mol 4.2工艺流程 导热油 导热油 甲醇液 热交换器 蒸发器 反应器 純净水 冷却水 板式换热器 冷凝器 吸附塔ABCD 氢气 去中压储罐 冷却水 4.3主要工艺指标： 醇水混合液比重 920+10 混合气 H2≥75% CO2≤25% 催化剂温度 250+5℃ 系统压力 0.8-1.0 Mpa 氢气含量 99.99% 吸附时间 420—480秒 4.4主要设备 序号 设备名称 规格型号 数量 1 计量泵 25HJ 气相色谱仪 SC1609系列/17纯平彩显 1 (另外催化剂铜系AF104 400Kg磁性填料（瓷球）100Kg，吸附剂 YL—1 球状 480 KgYL—2条状 960 Kg，YL—3 球状 950 Kg) 4.5 制氢的操作要点： 1）开车前必须清扫、试压、试漏、置换电器、仪表必须齐全正常，然后进行催化剂还原升温升温速率每小时15℃。 2）导热油升温必须缓慢按照有体热油炉厂家的要求进行，温度不能猛升猛降以保证制氢催化剂的还原需要。 3）计量泵开啟后流量的调节逐步增大，按照甲醇：纯化水 1：1的方式先把水调大一些，逐步使混合液的比重符合生产要求 4)催化剂还原结束后，温喥达到反应要求时按照催化剂的要求初期、中期、后期三个阶段的方式，控制好合适的温度指标计量泵的流量逐步提高至最大设计值。 5）当分析原料气合格后打开入提氢系统的进口阀，关闭放空阀进行提氢系统的置换、冲洗、提压。 6)提氢系统开车可用手动操作各塔输流置换、全部置换合格，分析H2含量>99.9% CO﹤100ppm时即可关闭放空阀，向中压罐冲压 7）提氢系统投入四塔二均自动控制阶段后，注意各塔压力變化和各气动阀的运行状况 8）混合液（原料液）每班分析测试醇比不的少于2次，原始开车可适当增加次数混合气两小时一次，成品氢兩小时一次；（气相分析）或按厂家要求进行 9）计量泵、热油泵、甲醇泵（化工泵）操作按照说明书厂家要求进行。加油、盘车、试方姠（正面观察顺时针方向）正常后方可开车 10)重要防爆区域做好安全防范措施，精心操作杜绝违章。 4.6开停车操作： 4.6.1 原始开车 1）安装结束准备生产时必须吹扫，吹扫时可用空气进行（催化剂转化器进出口关付线打开进行）为了防止管内焊渣，可用木棒和皮锤摔打拆开法兰逐步清除。 2）吹扫结束后接好各处拆开法兰，仍用空气进行试压、试漏检查各处法兰、焊缝是否有泄露，一般用肥皂水进行 3）試压、试漏结束，无有泄露系统压力稳定一段时间泄露率一般少于3‰以下为宜。 4）计量泵、热油泵试运行时必须加油检查调整方向，保持电器仪表齐全完整正常 5）置换，一般用液氮也可用氮气进行系统置换，置换时逐步进行分段或系统整体。按照置换方案进行切不可盲目。 6）置换结束后甲醇裂解工段、提氢分离工段分步进行，首先甲醇催化剂升温还原 7)升温还原必须通知有体热油炉，供应高溫导热油准备一定的瓶装氢气，按照厂家制定的升温还原操作票进行一般升温速率15℃/时。 8）升温还原结束后转为投料生产时，备好甲醇液、脱盐水要求原料液中甲醇液中甲醇含量大于99%，脱盐水电导率小于5% 4.6.2正常开车 1）正常开车时检查仪表、电器、PSA系统、气相色谱系統完好、正常。 2）首先启动脱盐水计量