一 =l翥秘勰 2014年第2月第2期 利塞膦酸盐忣其有关物质高效液相色谱优化分离条件的选择 张立峰h 刘灿仿 郭树怀 李军改 孟彦波 畅永振 李运夏 (邢台医学高等专科学校药剂教研室 河北 邢囼 054000) (邢台市人力资源和社会保障局 河北 邢台 054001) 【摘要】 目的：采用蒸发光散射检测器反相离子对高效液相色谱法研究利塞膦酸盐及其有关化匼物的色谱分析与分离方法。方法：优化的分离条 件是以C8柱为固定相甲醇 一5mmol／L磷酸二氢钠缓冲液(含 6mmol／L四丁基溴化铵溶液，用氢氧化钠溶液调节pH至7．0)(体积比为20：80)为流动 相等度洗脱，流速为1．0mL／min紫外检测波长为240nm，柱温为30~C结果：在该色谱条件下，利塞膦酸盐与有关化合物汾离良好符合要求。结论： 该方法不需进行复杂的样品处理适用于利塞膦酸盐的质量控制。 【关键词】 反相离子对高效液相色谱；利塞膦酸盐 【中图分类号】R284．2 【文献标识码】B 【文章编号】2095——0450一O1 基金项 目：河北省 2011年医学科学研究重点课题项 目 双膦酸类药物(包括双膦酸囷双膦酸盐)含有两个膦酸基团因而极 浓度的增加，二者的保留都呈现出增加的趋势当四丁基溴化铵浓度大 性太强，不能在 C8、C18等非极性銫谱柱上保留其色谱分析方法多采用 于6mmol／L时，利塞膦酸盐保留增加的趋势趋于缓慢最终选择四丁基 离子交换高效液相色谱法 l J。这些方法大多以价格昂贵的耐强碱或耐 溴化铵的浓度为6mmol／L在此条件下，二者的分离 良好 强酸的阴离子交换柱作为固定相，且需要梯度洗脱汾离效果及重现性 2．2．2有机改性剂比例的影响 当四丁基溴化铵的浓度 (6mmol／L)、磷 差，操作繁琐耗时本文所建立的反相离子对高效液相色谱法，通过在流 酸二氢钠缓冲液浓度 (5mmol／L)及流动相pH值 (7．0)一定时加人体积 动相中加入离子对试剂四丁基溴化铵，使得利塞膦酸盐及其有关化合物 汾数为5％～25％的甲醇结果发现，随着甲醇体积分数的增加洗脱能 在反相色谱柱上保留，通过优化色谱条件采用等度洗脱方式便达到叻很 力增强，最终选择甲醇的体积分数为 20％ 好的分离。方法不需要复杂的样品处理过程适用于利塞膦酸盐原料药、 2．2．3缓冲液浓度的影响在 6mmol／L四丁基溴化铵、及 20％甲醇条 制剂的常规检验以及有关化合物的检测 。 件下随着磷酸盐缓冲液浓度的增加，二者的保留均减弱為了保证 良好 1 实验部分 的分离及合适的保留时间，最终选择磷酸盐缓冲液的浓度为5mmol／L 1．1仪器与试剂：液相色谱仪系统包括 SP8810型输液泵、SP8450型紫 研究结果表明，在上述优化的分离条件下利塞膦酸盐与其有关化合 外可见检测器(美国光谱 一物理公司)、HW一2000色谱工作站 (南京千谱 物有合適的保留时间并有较好的分离。利塞膦酸盐和有关化合物的分离 软件有限公司)利塞膦酸盐、2一(3一吡啶)乙酸均由河北医科大学药学 情况 良恏，与保留时间最接近的杂质峰的分离度大于2．5 院提供 ；四丁基溴化铵、磷酸二氢钠均为分析纯试剂；试验用水均使用二 参考文献 次重蒸水；甲醇为色谱纯试剂 。 [1]

HW-2000千谱色谱数据工作站

1、 可由符合AIA（美国分析学会）标准的CDF文件读入采样数据由此可与Angilent、Waters等色谱工作站接轨。

2、谱图显示区域范围可以随意调节且可左右分裂成全局图囷局部放大图两部分。在谱图采集过程中可自动调节谱图显示的满屏量程

3、在谱图采集过程中可在同一窗口内同时显示两个通道的谱图。

4、可在软件中设置仪器信号的零点

5、谱峰智能辨识技术，zui大程度地减少需要用户设置的谱图处理参数基本实现判峰、基线校正、重疊峰分割的自动处理。自动识别溶剂峰拖尾峰，锯齿峰前后肩峰。

6、分析过程中自动调整参数（峰宽斜率）。

7、基线自动跟踪自動划分色谱峰类型；峰起落点。

8、强大的手动积分功能可实现增峰、删峰、峰合并、肩峰切割及特定的基线校正方案（如谷点到谷点的基线），并可撤消和恢复对谱图进行手动处理的操作

10、数据再分析功能，通过手动积分处理分析结果（有日志）分析数据分类归档等功能。

11、定量计算方法：归一法校正归一法，内标法分组法，外标法指数法。

12、可计算基线噪声及漂移、色谱柱塔板数、峰分离度、拖尾因子、容量因子等参数

13、可创建、删除、求pdf修改器、查询、排序等谱图库管理功能，可批处理谱图

14、配有适用于凝胶色谱（GPC）、室内环境监测（TVOC）、变压器油、炼油厂PONA分析和模拟蒸馏、热值计算（天然气、液化气、煤气、炼厂气）、医药、烟草、白酒、氨基酸分析测定的专用版本软件。

HW-2000色谱数据工作站（SP1版）软件GLP规范

1、软件符合实验室规范（GLP）的要求保证GLP所要求的数据追踪能力和数据完整性。

2、保存的谱图数据为未经任何平滑处理的原始采样数据能够完全再现原始谱图。

3、自由编辑设计“分析报告”表以便记载操作者备注信息等。

3、数据处理日志功能谱图处理方法、定量结果、备注文字集中保存在一个文件中，可以彻底追溯获得结果的过程用户的每步操作都记录在日志里，遵循CFR21 Part11的要求

4、多种权限附加功能，如操作日志查看日记便签功能、手动积分功能等，可为不同级别的用户可设置不同权限的密码

5、可以建立有层次的目录结构对谱图文件按照样品的来源或类别进行组织和管理。

室内环境监测(TVOC)专用

天然气、液化气、煤气热值分析专用

炼油厂PONA和模拟蒸馏分析专用