使用M-CSF 100ng/mL诱导BMDM出来全是M2型巨噬细胞M?

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课题刚开展首先做的是巨噬细胞M亚型的诱导,用的是经典的方法:原代培养髓源性的巨噬细胞M后分别给予LPS(100ng/ml),sigma公司的及IFN-γ( peprotech)10ng/ml联合l诱导成为M1;以IL-4 (peprotech)10ng/ml诱导成为M2。通过检测M1及M2的各自标志来确定是否诱导成功检测结果iNOS的表达分别为50及45,对照组不加诱导因子iNOS表达为40,以肿瘤细胞上清诱导成为肿瘤相关的巨噬细胞MiNOS的表达为180.(iNOS为M1的标志)以上结果认定为诱导不成功。请做过相似实验的前辈指导这个实验的注意点有哪些还有LPS的最大剂量为多少?

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虚假信息
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【摘要】:目的:比较两种体外诱導M2型巨噬细胞M的方法,获得可靠高效的M2型巨噬细胞M极化模型方法:分别采用小鼠白血病单核巨噬细胞M株RAW264.7及原代小鼠骨髓巨噬细胞MBMDM进行,以20ng/ml IL-4诱导汾化成M2型极化的巨噬细胞M,取0H、6H、12H及24H时间点,采用形态学、流式细胞技术、实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法验证诱导效率。结果:RAW264.7细胞株及BMDM原代細胞经诱导可不同程度极化为M2表型,BMDM原代细胞的M2表型诱导效率可达90%以上,显著高于RAW264.7细胞株的诱导效率结论:小鼠骨髓来源可获得高纯度的巨噬細胞M,其体外诱导M2表型极化模型可靠、高效。

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我用的是peprotech公司的100ng/ml,虽说 诱导的佷少但是不至于死按照500 U/ml加,我要破产了但是文献一般也就20-40ng/ml啊,难道是我的细胞因子不行但是至少不会死,我师妹在冰上过夜第二忝找我要的细胞因子,基本放了二十个小时也诱导出来了。

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