一般的有关物质对照四个合格溶液的浓度根据样品的最低检出限来定

检出限浓度的100倍为对照四个合格溶液的浓度，对照四个合格溶液浓度的100倍为样品溶液的浓度

但在實际操作中应该根据具体的液相条件来确定，参照基线噪音峰行等因素确定，一般对照四个合格溶液浓度比检出限浓度都大于100倍

还有┅个说法是将样品溶液的浓度定到作出的峰是平头的，再定对照四个合格溶液浓度但我个人认为不太可行，那样浓度太大了

浅谈化学对照四个合格品的标化與使用 浙江省食品药品检验研究院 2013年11月27～29日 主要内容 一、药品标准物质的介绍 二、化学对照四个合格品的技术标定要点 三、药品标准物质使用的注意事项 四、我院化学工作对照四个合格品标定的简介 五、我院对注册及日常检验对照四个合格品使用的相关规定 六、CDE审评对照四個合格品要求 一、药品标准物质的介绍 1、定义 标准物质 reference material 具有一种或多种足够均匀和很好确定了的特性用以校准测量装置、评价测量方法戓给材料赋值的一种材料或物质。 药品标准物质 Pharmaceuticals Reference Standards 是指供国家法定药品标准中物理和化学测试及生物方法试验用具有确定特性量值，用于校准设备、评价测量方法或者给供试药品赋值的物质包括标准品、对照四个合格品、对照四个合格药材、参考品。 化学药品标准物质（囮学对照四个合格品） ◆是一级标准物质由WHO指定专门的协作研究中心负责制备，经WHO的专家委员会讨论通过后由WHO的总干事颁布。 ◆国际囮学对照四个合格品是各国承认的或至少是成员国承认的。 ◆建立国际化学对照四个合格品的范围包括： ⅰ.国际药典中规定作为含量测萣及其他检验用的许多化学对照四个合格品； ⅱ过去作为国际生物标准物质而现在完全可用化学法代替检验的化学对照四个合格品； ⅲ其怹要求作为研究工作用的化学对照四个合格品 ② 国家化学对照四个合格品 ◆通常是由某一国家根据需要在其国内自行建立的，如各国国镓药典中收载的标准物质它们都是法定的。 ◆我国国家化学对照四个合格物质则根据国家药品标准（包括中国药典和和国家食品药品监督管理局颁布的药品标准)的需要由中国药品生物制品检定所负责统筹建立。 ◆当化学原料药或其制剂标准中采用了某种方法该方法需偠对照四个合格物质进行对照四个合格时，就需要建立化学对照四个合格品 ◆中国药品生物制品检定所发放的对照四个合格品仅供相应嘚国家药品标准使用，其用途在对照四个合格品包装标签和使用说明书中有明确说明 ③ 工作化学对照四个合格品 ◆是指在一定范围内使鼡而建立的化学对照四个合格物质，根据工作的需要．与国际化学对照四个合格品或国家化学对照四个合格品进行对比 ◆它涉及范围小於前二者，且往往是在依据前两种化学对照四个合格品之一来建立的其可靠性由有关工作部门负责。 如：省所标化的工作对照四个合格品 ⑷ 根据用途不同分类 ◆鉴别用化学对照四个合格品：红外光谱、紫外光谱、薄层色谱、液相色谱 ◆纯度或杂质检查用化学对照四个合格品：系统适用性试验用杂质对照四个合格物质或混合对照四个合格物质、有关物质、溶出度等 ◆含量测定用对照四个合格品：有效成分 ◆校准仪器用对照四个合格品：熔点、溶出度 熔点标准品：为一系列具有不同熔点的标准物质用于熔点温度计的校正。 溶出度校正片：用於溶出度仪的校正及实验操作技术的校正 ⑷ 根据用途不同分类 ⑶ 协作标定实验室的选择 ⑴ 稳定性 ⑵ 均匀性 ⑶ 准确性 1、标准的检索与确定 2、化学对照四个合格品的原料来源 ⑵ 鉴别 换批 理化性质、比旋度、折光系数、关键官能团的 专属性鉴别、UV、IR、TLC、HPL

怎样知道我们的分析方法是还可荇还须有验证方法下面介绍一下美国FDA分析方法验证的一些知识，以帮助我们更好的把握方向：
美国FDA分析方法验证指南：
本指南旨在为申請者提供建议以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持原料药和制剂的认定剂量，质量纯度和效力方面的文件。
本指喃旨在帮助申请者收集资料递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适用于NDAANDA，BLAPLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。
这些原則同样适用于二类DMF所涉及的原料药和制剂如果使用了其它方法，鼓励申请者事先和FDA药品评审中心的官员进行讨论以免出现这种情况，那就是花了人力物力所准备起来的递交资料后来发现是不可用的
本指南中所述的分析方法验证的原则适用于各种类型的分析方法。但是本指南中特定的建议可能不适用于有些产品所用的特殊分析方法，如生物药生物技术药，植物药或放射性药物等
比如说，许多生物汾析是建立在动物挑战模式免疫原性评估或其它有着独特特性的免疫分析基础上的，在递交分析方法和分析方法验证资料时需考虑这些獨特的性质
而且，许多原料药和制剂的界定和质量控制所需的生物和免疫化学检测并不在本指南的范围之内
尽管本指南并不专门叙述原料，中间体赋形剂，包装材料及原料药和制剂生产中所用的其它物料的分析方法及分析方法验证资料的递交但是应该应用验证过的汾析方法来分析检测这些物质。
对于本指南中未提及的关于分析方法验证和资料提交方面的问题请向FDA相关的化学评审人员咨询。
本指南一旦定稿，将取代FDA于1987年2月份发布的工业指南：分析方法验证所需提交的样品和分析资料
每个NDA和ANDA都必需包括必要的分析方法以确保原料藥和制剂的认定，剂量质量，纯度和效力还包括制剂的生物利用度(21 CFR 314.50(d)(1) 和314.94(a)(9)(i))。
FDA验证文件现场备查可以不与DMF一起交。
必须要有资料来论证所鼡的分析方法是符合一定的准确度和可靠性标准的
分析方法验证是论证某一分析方法适用于其用途的过程。分析方法的验证过程是从申請者有计划地系统性收集验证资料以支持分析方法开始的
审评化学家会对NDA或ANDA中的分析方法和验证资料进行评审。
一旦FDA有要求则NDA或ANDA的申請者必须提交制剂，原料药非药典对照四个合格品和空白以使FDA实验室能对申请者所用分析方法进行评审(21 CFR 314.50(e) and 314.94(a)(10))。
FDA实验室的分析会论证该分析方法在实验室内是可以重现的审评化学家和实验室分析家会从法规的角度确定该分析方法的适用性。
每个BLA和PLA都必须要有详细的生产工艺描述包括分析方法，以说明所生产的产品是符合规定睥安全纯充和效力标准的(21 CFR 601.2(a) and 601.2(c)(1)(iv))。
必须要有资料证明所用的分析方法是符合一定的准确度囷可靠性要求的(21 CFR (a)(2))对于BLA，PLA及它们的补充在所提交的许可证申请中应当要有分析方法和方法验证这部分的资料，审评委员会会对这部分资料进行评审
需提供代表性样品及该样品所代表批号的检测结果总结(21 CFR 601.2(a) and 601.2(c)(1)(vi))。评审委员会主席会要求CBER实验室的分析人员进行分析实验对申请者的汾析方法进行评估并确认其分析结果。
从验证的角度来看所有的分析方法有着同样的重要性。一般来说应当要应用已验证过的分析方法，而不论其是被用于过程控制放行，合格或稳定性实验高等每个定量分析方法时都应当要减少其分析误差。
分析方法和验证资料應当摆在申请的分析方法和控制章节中提交本指南的第III到IX章和XI章给出了所需提供资料方面的建议。向FDA实验室提供样品和递交NDA和ANDA中的分析方法验证资料的信息见第X章
III　分析方法的类型
法定分析方法是被用来评估原料药或制剂的特定性质的。USP/NF中的分析方法是法定的用于药典項目检测的分析方法为了确认符合法规，需使用法定分析方法
替代分析方法是申请者提出用于代替法定分析方法的分析方法。只有当┅替代分析方法相当于或优于法定分析方法时才可以应用验证过的替代分析方法。
I如果提交了替代分析方法申请者还应当提供其理由，并标明其用途（如放行，稳定性实验）验证资料及其与法定分析方法的对比资料。
稳定性指示分析是能检测出原料药或制剂的某些性质随着时间的延长而出现的变化的定量分析方法
稳定性指示分析能不受降解产物，工艺杂质赋形剂或其它潜在杂质的影响而准确测萣其中的活性成分。
如果申请者递交了用于放行检测的非稳定性指示分析方法则应当要有能定性和定量地监测杂质，包括降解产物的汾析方法对其进行补充。稳定性试验中所用的含量分析方法应当要有稳定性指示能力除非有科学的理由能证明其合理性。
可以从USP/NF处或其咜官方(比如说CBER，21CFR 610.20)获得标准品 (也就是一级对照四个合格品)如果不能确定一标准品的来源是否会被FDA认为是官方来源，申请者应当要向适当嘚化学评审人员咨询如果没有官方来源，则被用来作标准品的物质应当要有尽可能高的纯度并得到充分界定。
工作对照四个合格品 (也僦是内部标准品或二级标准品)是根据一级对照四个合格品标定的并用来代替一级对照四个合格品的。
对于非官方标准品在申请的分析方法和控制章节中应当要提供该标准品的分析报告单。对于从官方获得的标准品用户应当要确保标准品的适用性。应当正确储存标准品並在已确定的时间段内使用该标准品
从USP/NF及其它官方来源获得的标准品是不需要进一步界定的。非官方对照四个合格品要有尽可能高的纯喥并进行充分地界定以确保其结构，剂量质量，纯度和效力
T用于界定标准品的定性和定量分析方法应当要不同于用于控制原料药或淛剂的结构，剂量质量，纯度和效力的分析方法要比它们更深入。用于标准品界定的分析方法不应仅仅是和先前的指定标准品进行比較实验
一般来说，界定资料应当要包括：
标准品的简单工艺描述如果其生产工艺是否于其相应的原料药的话。应当要叙述制备标准品時所用的补充精制过程
相关光谱图，色谱图TLC照片及其它仪器输出的清晰复印件。建立纯度的资料应当要应用适当的检测方法来获得這些资料，比如说TLCGC，HPLC相溶解分析，适当的热分析方法及其它必要的分析方法
适当的化学性质资料，比如结构式经验式和分子量等。结构确证资料应当要包括适当的分析测试比如元素分析，IRUV,NMR和MS，及适用的官能团分析还应当要提供具体的结构解析资料。
物理性质嘚描述包括颜色和物理形态。 适当的物理常数比如说熔程，沸程折射率，离解常数(pK值)和旋光度用于界定标准品的分析程序的详细敘述。
至于生物技术/生物产品的标准品应当要考虑上述建议，可能可以应用然而，其它确定物理化学性质结构特性，生物活性和/或免疫化学活性的补充检测和/或其它检测将是非常重要的
物理化学性质包括异构体，电泳和液相色谱行为及光谱性质等结构界定可能包括氨基酸序列，氨基酸组成缩氨酸图和碳水结构。确定生物和/或免疫化学活性的分析方法应当要和用来确定产品效力的分析方法一样
Th這些分析方法可以包括基于动物的，细胞培养的生物化学的或配位体/接受体螯合的分析方法。如果这些检测需用于某些标准品的界定苼物和免疫化学检测的分析方法验证方面的特殊建议并不在本指南的范围之内。
V．IND中的分析方法验证
对于IND而言每个阶段的研究都需要有足够的资料以确保合适的认定，质量纯度，剂量和/或效力所需的分析方法和方法验证方面的资料会随着研究的阶段变化而变化(21　CFR　312.23(a)(7))。
N關于在第1阶段研究所需提交的分析方法和方法验证资料方面的指南发起人可以参考FDA的指南：药品（包括结构确定的，有疗效的生物技術产品）第1阶段研究的IND申请的内容和格式（1995年11月）。
第2和第3阶段研究所需提交的分析方法和方法验证资料方面的指南发起人将可以参考FDA嘚指南：药品（包括结构确定的，有疗效的生物技术产品）第1阶段研究的IND申请的CMC内容和格式（草案，1999年4月）
在递交NDA，ANDABLA或PLA时，所有的汾析方法都应当要开发出来并得到验证。
VI．　NDAANDA，BLA和PLA中分析方法的内容和格式
NDAANDA，BLA和PLA中所提交的任一分析方法都应当要有详细的描述鉯使合格的分析人员能重现出所需的实验条件并获得和申请者相当的实验结果。应当要叙述分析方法中需要特殊注意的地方
如果所用的汾析方法是USP/NF或其它FDA认可参考文献（如，<<AOAC国际方法汇编>>）中且所参考的分析方法未经过修改的话则需提供该分析方法的参引，而不用提供該分析方法的描述（21 CFR 211.194）
对于从其它公开发表的文献上获得的分析方法，应当要对其进行叙述因为评审官可能并不能很方便的获得这些攵献。
分析方法描述中需要包括的典型内容如下所示：
HPLC进行分离的检测器为UV检测器。
需要叙述的有：所选样品的数目（比如瓶，片等）它们是如何使用的（也就是，单独的或是混合样品）每个样品分析的重复次数。
需要叙述的有：仪器列表（比如仪器类型，检测器柱子类型，尺寸等）和仪器参数（比如流速，温度运行时间和设定波长等）。如果必要的话还要提供实验结构示意图（比如，闡述喷洒式分析方法的位置）
需要叙述的有：试剂列表及其相应的规格（比如：USP/NF，美国化学社（ACS）分析试剂）如果使用的是自制试剂戓更改过的商业试剂，则应当要有其制备方法对于不稳定的或有潜在危险的试剂，应标明其储存条件安全使用说明和使用周期。
系统適应性实验参数和合格标准是建立基础是：仪器电子元件，分析操作和待测样品是个不可分割的整体系统适应性实验确保系统在样品汾析的时候能很好地运行。在分析方法中应当要包括适当的系统适应性合格标准
所有的色谱分析方法都应当要有系统适应性实验及相应嘚合格标准。CDER评审官指南<<色谱分析方法的验证>>（1994年11月）对用于评估系统适应性的典型参数进行了定义和讨论
建议系统适应性实验应成为所有分析方法的一部分，而不仅仅是色谱分析方法无论是哪类分析方法，都要采用实验来证实该系统能不受环境条件的影响而正确地运荇比如说，滴定法一般来说需要进行空白实验
要有所有标准品溶液（比如，储备液工作对照四个合格品溶液，内部对照四个合格品溶液）的配制方法
应当要按操作步骤对操作过程进行逐步叙述。叙述应当要适当包括如下信息：平衡时间样品进样顺序和系统适应性戓启动参数。需标明不常见的危险
应当要提供代表性计算公式，并要列表说明所有符号和数字系数及计算降解产物和杂质的特殊使用說明。所有用于数据分析的数学转换或公式应详细描述这些包括对数转换以获得指数数据的线性关系，或多元回归分析的使用
应该规萣关键计算步骤中的数字单位（例如，‘标签’标示量的百分比W/W，W/Lppm等）
在有关原料药和产品的杂质检测规程中，应当包括杂质的名称囷检测位/标志（例如保留时间RT，相对保留时间RRT）以及杂质的种类（比如工艺降解产物，赋形剂降解产物）如有可能，还应当指明检測限DL或定量限QL也可以在原料药检测中设置DL和QL。
有机杂质的报告中应当包括：1、有记载的已经过确认的杂质的名称；2、有记载但未经过確认杂质的（检测）位/标志；3、所有的没有记载的杂质，以及；4、总杂质总有机杂质是指所有达到或超过其自身定量限度的杂质的总量。在这里可以参考FDA杂质指南文章中有关判定定量限度的内容（看后面的参考）无机杂质和溶剂的残留，也应该被提到
对于产品以及原料药的工艺杂质也可以不包括在报告中，除非分析规程和控制环节中描叙了一个可以被接受的原则那么，在产品制造和包装过程中（包括贴签）产生的杂质就要被提到
并不是所有产品（比如，生物制剂、生物工艺制剂、植物制剂、放射制剂）的报告都必须严格按照以上談到的内容来写但是所有关键的工序以及产品相关的杂质都要有检测和报告。
在NDAANDA，BLA或PLA中应当要递交资料以说明检测中所用的分析方法是满足适当的准确度和可靠性要求(21 CFR 211.194(a)92))。分析方法验证是个论述分析方法是适用于其拟定用途的过程在递交资料时，NDAANDA，BLA或PLA中应当要包含汾析方法验证资料以支持分析方法的准确度
ICH指导原则Q2A：分析方法验证（1995年3月）和Q2B：分析方法验证：方法学（1996年11月）给出了分析方法验证嘚建议。对于超出ICH指导原则范围的分析方法也是需要验证的
申请者应当要送交其所拟定分析方法的验证项目方面的信息（见ICH　Q2A和ICH Q2B）。尽管不是对于所有类型的分析方法都需要进行所有的验证项目（见第VII.A.3章）但还是有典型的验证项目，如：
精密度（重复性和中间精密度）
汾析方法验证资料还应当要包括：
说明所有分析制备样品在完成分析所需的时间内的稳定性的资料
L清晰可读的仪器代表性输出和记录资料（如色谱图）和原始资料输出（积分面积）。安慰剂对照四个合格品和样品的仪器输出也都是需要提供的（见第VII.A.2.c章）。
代表性计算公式以表明原料药中的杂质是如何计算的。(见VII.A.2.b章）对于杂质分析方法，要标明杂质的名称和位置标识符（如色谱中的相对保留时间RRT）。
1. 讨论可能会形成的异构体并讨论异构体的控制
对每个有机杂质进行适当的标识和界定。不是所有的产品（如植物药）都需要这些资料的。对于其它杂质（如无机杂质残留溶剂），应当要进行说明并定量分析
FDA的指导文件，如比ICH指导原则Q3A 新原料药中的杂质（1996年1月）
巳知杂质列表，包括工艺杂质降解产物和可能的异构体。如果知道结构的话也需提供。
原料药在制剂中可能的降解途径通过准确度實验论证的样品回收率资料。要有资料论证无论是新制的安慰剂还是分解了的安慰剂都不会影响活性成分的定量分析ICH　Q2A和ICH　Q2B几乎对所有嘚验证参数都进行了论述。下面论述的是那些还需要更详细地进行论述的方面
ICH　Q2A和ICH　Q2B对耐用性是有论述的，它衡量的是分析方法在细微嘚变化下不受影响的能力该实验应当是在分析方法开发过程中进行的，对实验结果进行讨论和/或递交如果观察到有影响，需提供代表性仪器输出（如色谱图）
FDA很多关于药品稳定性的指导原则都对强降解实验进行了论述。
在申请的稳定性一章中应当要提供的资料有：强降解实验设计和实验结果而代表性仪器输出（如：色谱图）和/或其它资料（强降解实验中所得的降解信息）应当要提供在分析方法和控淛　一章中。
c.仪器输出/原始资料
应当要提供代表性资料以支持有机杂质的评估一般来说，是不需要残留溶剂的代表性资料的仪器输出囷原始数值（比如，峰面积）及合适的标记和标注（比如色谱峰的保留时间，核磁共振的化学位移和耦合常数）都应当要提供根据所提供的定量限和仪器输出对杂质情况进行评估。还应当要提供其它资料以确认杂质情况得到了充分地界定比如说，比如说代表性图谱選用的检测波长是205nm，则可以将拟定的运行时间延长至两倍以支持分析方法的专属性
在定量分析时，原料药的响应因子可用于没有相应对照四个合格品的杂质如果响应因子不接近的话，只要应用了较正因子或或者杂质实际上是被高估的话这样做也是可行的。用于评估指萣杂质或未指定杂质的合格标准和分析方法经常都是基于分析假设的（比如相当的检测器响应）。应当要对这些假设进行讨论和合理性說明
ANDA和相关的递交，用于生物利用度研究的批次（biobatch）或者提交批次（submission batch）的相关资料应当要提供所有的响应（比如，色谱峰）都应当要進行标注所用的分析方法应当要有能力区分先前批次和当前批次之间的变化，如果有这些变化的话应当要说明定量限和有机杂质的类型（比如：降解物，工艺杂质）还需提供分析方法编号，批号生产日期和生产地点及分析日期。
在制剂的分析方法和控制一章中应偠当提供的资料有：代表性批号在长期和加速稳定性实验条件下及强降解实验条件下的仪器输出（如，图谱）和原始资料（如峰面积）對于ANDA和相关递交，应当要提供生物利用度实验批次或递交批次的适当资料在申请的稳定性章节中应当要引用原始资料（比如：图谱）。
臸少递交材料中应当要包括放行检测(Release testing)的仪器输出和原始资料. 需标注所有的响应信号（如色谱峰）。此外还要提供，分析方法编号制劑的批号，生产日期分析日期，原料药的来源和批号生产地点及容器/密闭系统信息。如在过往批次和现批次之间存在差异的话所用嘚分析方法应当要有能力区分出来。应当要报告检测限和类型（如降解物，包装时的漏出物）
3.各类检测的推荐验证项目
表1概述了在不哃分析方法的验证过程中所需要的验证项目。同一分析方法可用于多个用途验证资料需要能支持该分析方法的拟定用途。比如说如果拉曼光谱用于定量分析多晶型杂质，或手性HPLC用于分析异构体杂质则要应用表1中杂质定量分析　中所推荐的验证项目。然而如果拉曼光譜或手性HPLC被用于鉴定或特征实验的话，则要应用表1中所推荐的这些类型的验证项目
表1：不同类型检测的推荐验证项目

copy)和另外三份副本。對于BLA和PLA则不需要单独递交分析方法验证资料。类似的资料应当摆在BLA和PLA申请中
分析方法验证资料应当要包括：
1．所需递交样品的列表清單
(化学名和结构式)，包装类型和大小生产日期，样品量
FDA实验室分析人员根据这个描述进行操作。(见第VI章)
应当要提供申请者对所提供样品所做分析的分析结果或者提供其相应的分析报告单。需说明分析日期
需说明制剂的组分和组成。
需提供原料药和制剂的质量标准
申请者应当要提供所有样品，标准品和试剂的安全数据表(MSDS)(29CFR (g))还要适当提供分析方法验证中所列各分析方法所有的其它物料的安全数据表(MSDS)。洳果是毒性物料或危险性物料则在外包装上要贴上MSDS，以便于安全处理
NDA或ANDA申请者必须要根据药品评审和研究中心(CDER)的要求递交制剂，原料藥非药典对照四个合格品和空白，以使FDA实验室可以评估申请者所用制剂和原料药分析方法的适用性(21CFR 314.50(e) 和314.94(a)(10))。对于BLA和PLA需提交产品的代表性樣品，并提供所提交样品批次的检测结果(21CFR601.2(a)和601.2(c)(1)(vi)).
对于CDER产品，FDA实验室会告诉申请者所需递交样品的量一般来说，样品量应当是实验用量的两倍除了递交原料药和制剂样品之外，申请者还应当要递交内部对照四个合格品非美国药典对照四个合格品，杂质样品降解物和非常鼡试剂。应当要向每个指定的实验室寄送一系列样品
CBER咨询关于样品和支持资料的递交。
除非评审官另有说明任一批次的样品，最好是較早批次都可以用于新药申请及其补充申请。所递交的制剂样品必须是根据拟定的上市配方生产的对于仿制药申请及其相关的补充，應当要提交用于支持申请批准的制剂批次的样品如果样品是来自于一申请中未提及的批次的话，则在ANDA中还应当要补充一份批记录和分析報告单的复印件对于不需要递交申请和不需要审阅批记录及相关资料的补充，可递交任一商业批次的样品对于生物制品，应当要提交連续几个生产批次的样品
应当要以其原包装提供制剂样品。而像原料药杂质，赋形剂等则应当要保存在不透明的惰性容器中。为了防止在运输过程中泄露样品应当要装在耐用的容器中。如果是美国国外的样品则应当要有适当的海关单据，以减少耽搁
如果样品需偠特殊的储存条件(比如，冷冻惰性气体保护)，则要事先和验证实验室联系以安排直接递送如果是毒性样品或危险性样品，则在容器的顯著位置标明警示标志和预防措施
FDA可以向其发送提交样品的要求。如果没有提供这些信息的话则会用NDA，ANDABLA或PLA申请中所写地址和联系人信息进行联系。
NDA或ANDA资料一起编写和递交对于BLA和PLA，则不需要递交单独的分析方法验证资料
一旦FDA实验室要求申请人提交样品的话，申请人應当要在10个工作日将样品提供给FDA实验室除了样品运送之外，所有关于在FDA实验室进行验证的交流工作都要当要让CDER申请的化学评审官知道洳果是CBER申请，则要让BLA/PLA委员会主席知道
化学评审官负责审核分析方法验证报告（包括鉴别，浓度/剂量质量，纯度和功效对申请进行评審后，如要对分析方法作必要修改的话则需要重新递交分析方法验证资料。化学评审官会和相关的FDA实验室进行讨论确定需要对哪个分析方法进行验证。化学评审官会将FDA实验室对所做研究的意见转给申请人
FDA实验室会和申请者联系，告知样品递交程序和注意事项及邮寄地址FDA实验室会所递交的分析方法对样品进行检测，以确定该分析方法是否适用于质量控制并符合法规要求。在完成研究之后FDA实验室会將结果和意见转给化学评审官。
检查官会对进行放行检测和稳定性实验的分析实验室进行检查以确保所做的分析检测能符合CGMP/GLP。
II章到第IX章提供了分析方法和分析方法验证资料方面的基本信息包括验证项目。下文就一些具体的方法给出了说明：
HPLC分析方法的广泛应用及色谱柱囷柱填充的众多来源都经常会给可比性评估带来很多问题如下这些要点中，很多都适用于其它色谱分析方法
在定义某一色谱柱时，如丅这些性质是很有用的也应当要包括在分析方法描述中。如果分析方法开发表明只有某一商业来源的色谱柱是适用的则在分析方法中應当要包括这些资料。如果有多种色谱柱都是适用的话则应当要包括等效色谱柱列表。
1.材质：玻璃不锈钢，塑料
5.预柱和/或保护柱（如使用）
1.颗粒类型：尺寸形状，孔径
2.表面修饰(如：键合表面类型表面覆盖，碳比例甲硅烷基化作用)
CDER的评审官指南：色谱方法的验证(1994年11朤) 中对如下这些系统适应性实验进行了定义：
一般来说，在仪器开始运行时进行进样精密度实验，计算其相对标准偏差然而，对于运荇时间很长的分析或申请者另有理由说明，则可以在运行的开始和结束时或在运行的开始，中间和结束时进样然后报告其平均值。
洳果用到了内标物则应当要标明内标物与活性成分(单个或多个)之间的分离度的最低可接受值。如果该分析方法是用于控制杂质水平的則应当要说明活性成分和最邻近杂质组分，或每两相邻组分的分离度最小可接受值
应当要确定空白溶液，系统适应性实验用标准溶液戓其它标准溶液和样品溶液的进样顺序。应当要对流速温度和梯度洗脱进行描述。
需详细说明流动相的配制包括试剂的添加顺序，去氣和过滤的方法分析方法中应当要说明流动相组成的调整会对保留时间所产生的影响。如使用了预柱和/或保护住的话则要进行说明并提供给出合理性解释。如有任何其它要求如使用了惰性管(inert tubing)或进样阀(injection valve)，都应当要对此进行说明
在GC分析方法描述中，至少要包括如下内容如分析方法中用到了其它的一些参数，对此也应当要进行说明如果分析方法开发表明只有某一商业来源的色谱柱是适用的，则在分析方法中应当要包括这些资料如果有多种色谱柱都是适用的话，则应当要包括等效色谱柱列表
色谱柱尺寸：柱长，内外径
柱填充料(比如：硅酸玻璃，不锈钢)
载气：纯度流速，压力
温度：色谱柱进样器，检测器(包括升温程序如用到的话)
典型保留时间和总运行时间。
茬所有的分析方法中都应当要有适当的系统适应性要求
如采用国内标准，则应满足内标和一个或多个组分的最小分离度要求如果该分析方法是用于控制杂质水平的，则应当要说明活性成分和最邻近杂质组分或每两相邻组分的分离度最小可接受值。
一般来说在仪器开始运行时，进行进样精密度实验计算其相对标准偏差。然而对于运行时间很长的分析，或申请者另有理由说明则可以在运行的开始囷结束时，或在运行的开始中间和结束时进样，然后报告其平均值
C：分光光度法，光谱法和相关的物理方法
(IR)近红外光说(NIR)，紫外可见咣谱(UV/Vis)原子发射光谱/原子吸收光谱，核磁共振(NMR)拉曼光谱，质谱(MS)和X-射线衍射(XRD)
光谱分析方法可能没有稳定性指示能力。必要的话可能通過与色谱方法的比较来评估光谱分析方法的偏差。如果用到了手动仪器的话则分析方法描述中应当要有取样(sampling)和读数(reading)之间时间差的可接受標准。建议使用适当的系统适应性实验和/或校准实验验证标准中应当要包括专属性(说明没有空白干扰)，线性重复性，中间精密度和耐鼡性
D：毛细管电泳(CE)
对于一个毛细管电泳分析方法，至少要指明下述参数如分析方法需要的话，还要包括其它参数若方法开发研究表奣只有某一商业来源的毛细管是适用的话，则在分析方法描述中需包括该信息如果有多种毛细管柱都是适用的，则要列表说明所有的等效毛细管柱
毛细管尺寸：长度，至检测器长度内径，外径
毛细管内部涂层(如果有的话)
毛细管制备过程：第一次使用前第一次进样前，每次进样前(比如用100mmol的氢氧化钠冲洗，或用电流缓冲液冲洗)
电泳缓冲液：组成包括详细的制备程序及各组分的添加次序。
进样：形式(電动的水力的)，参数(比如电压，压力时间等)
典型的迁移时间和总运行时间
电压(如果是恒压的话)
电流(如果是恒流的话)
极性(比如，检测器电极的极性)
每个分析方法都应当要有适当的系统适应性实验以确定该系统的关键参数是否包括其它参数，这由申请者来决定
如用到叻内标物，则至少要指明内标物和一个或多个活性组分间分离度的最小可接受值若该分析方法是用于控制杂质水平的话，则要说明活性組分的最接近流组分间的最小可接受分离度或每两邻近组分间的最小可接受分离度。
旋光度用于测定多糖类物质的纯度通过单色光（鈉光）的偏振，但事实上已扩展到使用任一波长的光源
如不在钠光谱的波长测定的话，则要给出选择该波长的理由并要对比在钠D和所選用波长下的旋光度。循环二色性图谱能达到这个目的除了USP<781>中的规定之外，旋光度测定程序还应当要包括溶剂浓度，及水溶液所要调節到的pH值所用仪器和条件都要能适用于消旋物或光学异构体的结构确认。
光学异构体纯度可以用异构体过量(e.e.) 来表示举例如下：
和分别昰较多光学异构体和较少光学异构体的量。对于消旋物来说该值为0，若为纯的光学异构体则为100%。若为中间浓度则将其表示为中间值；比如，97：3的e.e为94%
推荐进行适当的系统适应性实验和/或校准实验。验证项目应当包括专属性和中间精密度
和粒径分析相关的分析方法：
對于有些原料药和制剂的质量控制和官方评审来说，粒径分析是个很重要的因素
和其它分析方法，比如HPLC相比粒径分析方法的验证是不盡相同的。然而在给验证进应用到标准混合物。
粒径分析可以包括尺寸特征形态，表面和粒子群如下这些参数对于描述界定原料药戓制剂所用粒径分析时是很有用的。
粒径分析方法包括但不局限于：
ii. (动态，光子相关激光衍射)
b.  根据粒子的尺寸进行分离的物理性分级方法。
iv. 尺寸排除色层分析法
为确保仪器操作的准确性应根据供应商和/或实验规范对系统进行校准。
分析方法验证经常会包括中间精密度囷耐用性(robustness)的评估应当要确保所得到的数据是可重现的，并能控制产品的质量更多信息可参见第V和VII章。
在USP<711>或USP<724>中说明了溶出度实验所用的設备溶出度实验分析方法描述及其分析方法验证中应当包括如下资料：
简要讨论媒介选择的理由。
(自动在线分析或手动取样然后进行HPLC分析)书面程序应当要包括如下这几点：
--样品制备(比如，间隔过滤，样品处理稀释)
无论是用什么分析方法，都应当要有系统适应性实验并要有相应的合格标准。还应当要有空白溶液和标准溶液的光谱或色谱图
无论是溶出程序，还是分析方法都应当要经过验证
在操作程序中应当要说明完成样品分析所用的时间。还应当要有资料说明样品在实验过程中的稳定性若进行了在线过滤或在样品制备过程中进荇了过滤，则应当要进行适当的回收实验并整理成文件需说明实验过程中出现的所有偏差。
FDA鼓励开发和使用最恰当的仪器稀有系统的使用不仅给官方实验室带来了过度的负担，也会耽搁验证过程
若使用非商业化仪器，则应当尽可能地能以经济的商业化配件组装成实验所用仪器对于需要合同制造的特殊分析方法或仪器，申请者应当要和FDA实验进行合作以使该分析方法可以重现，这一点是非常重要的除了需提供仪器设计和仪器规格之年，还应当要提供完整的性能评估程序这样的系统必须是适用的。
自动分析方法的使用会导致官方分析方法验证的延误即使是非常适用于检测控制的，因为在样品分析之前FDA实验室必须要对系统进行装配和验证。为了避免这类延误申請者应当尽可能论证在相同的原理基础上，手动分析方法和该自动分析方法是相当的
NDA，ANDABLA和PLA中递交的分析方法和方法验证相关资料如下所示。并标明了本指南中给出了相应建议和/或讨论的章节的章节号
在分析方法和控制 一章中需包括的资料：
分析方法，第IIIVI章
分析方法驗证资料，第VII章
杂质研究的仪器输出/原始资料第VII.A.2.b章
统计分析，第VIII章
必要的再验证第IX章
分析方法验证中所需包括的资料：
分析方法验证嘚内容，第XI章
强降解实验的代表性仪器输出/原始资料第VII.A.2.C章
某一批次最初样品和最老样品的代表性仪器输出/原始资料，第VII.A.2.b章
稳定性章节中所需包括的资料：
强降解实验的实验设计和实验结果第VII.A.2.b章
参考分析方法和控制章节中所递交的的代表性仪器输出/原始资料，第VII.A.2.C章
分析方法验证的问题和延误
下文举列说明了些会延误成功验证的常见问题
--未能提供关键杂质，降解物内标物或新试剂的样品。
--未能提供非药典药物的已界定标准品
--未能提供分析方法的详细描述，或使用和了不可接受的分析方法比如：
--随意使用数学校正。
--未能提供系统适应性实验
--含量均一性分析和含量分析的分析方法是不一样的，且未说明校正用的等效因子而这是美国药典第<905>章：剂型的均一性 所必需的。
--未能提供完整清晰的数据比如：
--未能标注仪器输出。
不合理的运送方式比如：
-- 未能正确标注样品
-- 未能根据产品储存条件来包装产品。
--货运不完备(比如没有国外样品的报关单)
--未在运送包装上标明适当的储存条件。
活性成分(Active moiety): 原料药中那些能起生理作用或药理作用的分子戓离子不包括那些使该药物分子成为酯，盐(包括带氢或配位键的盐)或其它非共价键衍生物(比如，络合物螯合物，或包合物)(21CFR 314.108(a)). 活性成分指的是整个分子或离子而不是活性位置。
检测限(Detection limit)：分析方法的检测限指的是样品中被分析物能被检测出的最低量但并不需要定量检测。
制剂(Drug product): 成品剂型比如，片剂胶囊，或包含某一原料药成分的溶液通常还会有其它的一些组分，但这也不是必须的(21 CFR 314.3(b))。
原料药/活性成汾(Drug substance/active ingredient): 能在疾病的诊断治疗上，缓解处理或预防中起到药理作用或其它直接作用的成分，也包括能影响人体的结构和功能的成分原料药鈈包括那些在该原料药的合成过程中所用到的中间体。这个术语还包括那些在制剂生产过程中为产生化学变化的的组分或以改变后的形式存在的制剂中以完成某一功能或作用的成分。(21 CFR 空白(Placebo or blank): 指不含活性成分或用惰性成分代替了活性成分，而其它成分均与某一制剂保持一致嘚剂型
定量限(Quantitation limit): 分析方法的定量限指的是样品中的被分析物可在适当的精密度和准确度下被定量检测出的最低量。检测量是低含量组分样品定量分析的一个参数特别是用于杂质和/或降解物的测定。
试剂(Reagent): 在分析方法中用于检测测量，检查或分析其它物质的物质
规格(specification): 质量標准(也就是，检测项分析方法和合格标准)，提供在已批准的申请中以确认原料药制剂，中间体原辅料，试剂和其它组分包括容器密闭系统，和过程控制物料的质量
加样(Spiking): 往标准，样品或空白中加入少量已知量的已知物特别是用于确认某一分析方法的性能或对仪器進行校准。
稳定性指示分析(Stability-indicating assay): 可以检测出原料药和制剂的相关属性(如活性成分，防腐剂的量) 随着时间延长而产生的变化稳定性指示分析能不受降解物，工艺杂质赋形剂或其它潜在杂质的影响对活性成分进行测定。
工作对照四个合格品(Working standard): 根据一级标准品进行确认的对照四个匼格品并用以代替一级对照四个合格品。(也被称之为内部对照四个合格品或工作对照四个合格品)