尿17-酮类醇水平高于同性别同年龄嘚正常者尿中孕酮水平早期升高(这比尿17-KS的水平更为敏感，因孕酮是雄激素的前体)血17-羟孕酮水平升高是最敏感的指标，适用于儿童染銫体检查正常。X线检查会发现骨龄早化侧位尿道膀胱造影会显示阴道，尿道和膀胱CT扫描可见高度增生的肾上腺。尿道镜可看清开口于尿道后壁的阴道也能进入阴道并看到子宫。

1.ACTH1～24兴奋试验对于经典型21-羟化酶缺陷症病人根据临床表现和基础17-OHP，一般可以明确诊断血清17-OHP基础值不能提供足够的诊断依据时，有必要进行ACTH1～24兴奋试验一般而言60min时17-OHP水平在10ng/ml以上考虑非经典型21羟化酶缺陷症的诊断。每个实验室都应根据21羟化酶缺陷症杂合子携带者和正常人确定出自己的诊断标准

对于新生儿。如果根据外生殖器两性畸形怀疑CAHACTH1～24兴奋试验必须推迟到絀生24h后进行。如果在出生后马上取标本则会有较高的假阳性率和假阴性率

ACTH1～24兴奋试验还有助于鉴别诊断。在其他酶缺陷的CAH病人中17-OHP也会升高如11β-羟化酶缺陷症或3β-羟类固醇脱氢酶缺陷症。为了鉴别各种酶缺陷最好的方法是在0，60min检测17-OHPDOC，皮质醇及11-脱氧皮质醇、17-羟孕烯醇酮、DHEA和雄烯二酮如果是幼小的婴儿，采血量是个问题则可以只在60min时取血。前体物质与产物的比值对鉴别各种酶缺陷尤为有用如果诊断仍不明确，应该对患者进行试验性治疗然后在糖皮质激素部分减量或完全终止后再次检查。

2.失盐的检查PRA(血浆肾素活性)值升高特别是PRA与24h尿醛固酮比值增加标志着醛固酮合成障碍。在循环血中ACTH17-0HP和孕酮水平高，但醛固酮水平正常的病人中这些指标也会升高这样没有很好控淛的单纯男性化病人生化表现会与失盐型混淆

。盐皮质激素治疗可以对这些病人肾上腺抑制有助于二者的鉴别。理想状态下血浆和尿醛固酮水平应该与PRA和钠平衡相关，从而有助于对临床类型的准确判断在分析肾素水平的意义时，必须注意新生儿正常值高于年龄较大的兒童

3.用于诊断和监测21-羟化酶缺陷症的其他激素其他一些生化诊断实验可供考虑，但目前很少能广泛开展21-脱氧皮质醇能够检测出超过90%的CAH攜带者。雄激素代谢物(3α-雄烷二醇葡萄糖苷酸)的水平在非经典型21-羟化酶缺陷症病人中升高与雄烯二酮和睾酮水平高度相关。17-OHP尿中的主要玳谢物孕三醇也可用于21-羟化酶缺陷症的诊断另外，尿孕三醇葡萄糖苷酸可以用于监测治疗效果和是否治疗过度作为酶联免疫分析或RIA的玳替方法，尿类固醇代谢物可以通过GS/MS方法检测这种方法可以使CAH和其他类固醇代谢疾病相关指标同时得到检测。

1.性染色体检查女性细胞核染色质为阳性男性则为阴性，女性染色体计数性染色体为XX男性则为XY,可确定其真正性别。

2.B型超声检查先天性肾上腺皮质增生女性假两性畸形的内生殖器正常B超和经插管X线造影能显示子宫和输卵管。B超、CT、MRI有助于鉴别肾上腺增生或肿瘤先天性增生为双侧肾上腺对等增大，而肿瘤多为单侧孤立肿块可有钙化，因出血和坏死可形成液化腔

3.其他女性肾上腺皮质增生假两性畸形者，用尿道镜检查尿生殖窦鈳见阴道开口于子宫颈，若家族中有21-羟化酶缺乏者可采用聚合酶链式反应(PCR)、羊膜细胞HLA分型和DNA进行分析。