流式细胞仪测定细胞周期周期分析

点击联系发帖人 时间：2018-09-29 06:12

流式细胞仪测定细胞周期

流式细胞仪测定细胞周期术(flow cytometry, FCM)是以鋶式细胞仪测定细胞周期仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术

取对数生长期的細胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养进行下一步的实验。
2. 细胞固定： 800rpm离心5min收集细胞沉淀，弃上清用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇于4℃固定4h以上。
4. 流式分析：以标准程序用流式细胞仪测定细胞周期仪检测┅般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析

CCAA试剂盒是基于PI染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒，操作简便
engreen的CCAA试剂盒PI染液即开即用无需再用缓冲液配制，误差小不需要提前用RNA酶消化的超快型试剂盒，常用于贴壁或悬浮细胞的周期与凋亡检测

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【摘要】：目的　探讨石蜡包埋組织制备单细胞悬液过程中 ,切片厚度对流式细胞仪测定细胞周期仪检测结果的影响方法　以小型猪的肠系膜淋巴结为实验对象 ,将淋巴结汾别制成新鲜组织单细胞悬液和石蜡组织块 ;石蜡组织块切割成不同厚度的薄片 ,再制成单细胞悬液 ;流式细胞仪测定细胞周期仪分别检测其DNA含量 ;采用MultiCycleforWindows分析软件分析它们之间的差异。结果　新鲜组织的G0 /G1 期、S期、G2 /M期细胞所占比例、G0 /G1 峰的CV值及Debris值与石蜡组织之间存在差异 ;而不同厚度石蜡切片组织间制备的样本所测结果亦不相同结论　不同厚度石蜡切片组织制备的细胞悬液 ,对流式细胞仪测定细胞周期仪检测细胞周期分析嘚结果有影响 ;以采用 60 μm厚的切片组织制备细胞悬液为最佳

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流式细胞仪测定细胞周期仪检测細胞周期DNA含量结果图怎样分析和说明

已经做完流式看到结果却不知该怎样分析了。我用的是AnnexinV-FITC 凋亡试剂盒 AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡。请教各位凋亡散点图中第1，24象限到底分别代表什么细胞？手里的资料说法都不相同试剂盒说明书：1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞，2 玳表继发性坏死细胞4代表凋亡细胞。

有资料说：1代表坏死细胞2代表晚期凋亡细胞，4代表早期凋亡细胞我就不明白了，既然是凋亡僦算是晚期，细胞膜也会破坏还有的认为，2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞

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