为什么提质粒加异丙醇大提时加入异丙醇，无水乙醇

点击联系发帖人 时间：2018-08-30 14:12

提质粒加异丙醇

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异丙醇与蛋白质反应，使其沉淀。分析如下。

采用强碱液、加热或溶菌酶（主要针对革兰氏阳性细菌）可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）和TritonX-100（一般很少使用）可使细胞膜裂解。经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA(Covalently closed circularDNA，简称cccDNA）的两条链不会相互分开，当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。在细菌细胞内，共价闭环质粒以超螺旋形式存在。

本回答由科学教育分类达人李玉全推荐

首先：你要知道是从什么菌种里面提取质粒包括菌种一般常识，

其次：是用什么方法提取质粒包括原理，

再次：知道为什么要加入异丙醇，起的作用是什么？

最后：才可能知道白色絮状沉淀是什么。

加异丙醇是用来沉淀质粒的，出现白色絮状沉淀，说明质粒提取纯度不够，也就是有蛋白质等污染，蛋白质等杂质和质粒一起沉淀了，能看到，说明污染已经特别严重了，

呵呵，可以用酚氯仿或者酒精沉淀再除杂一次，

也可能是你得方法不好，

也可能是你操作的问题比如样品用量大超过了该方法的提取极限等

分析清楚后再做祝你好运

首先要知道，质粒是共价，闭合，环状的DNA（cccDNA）。以常用的碱裂解法为例：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，

我知道啊 是加入中和液后出现沉淀 可就是不明白为什么我加入异丙醇时也出现了沉淀

异丙醇能使蛋白质变性，出现的絮状沉淀应为蛋白质

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内容提示：质粒大提--自制试剂配制和操作步骤总结

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摘要：目的:改进碱裂解制备质粒DNA的方法.方法:在小规模制备中,采用7.5mol/L NH4Ac中和碱溶液及室温下异丙醇沉淀;在中规模制备中,采用三步沉淀将质粒分离纯化;在大规模制备中,用两步清洗弃去由于量大而不宜除掉的杂物(碎屑物、杂蛋白等).结果:建立了一套快速、高效、无毒、经济的方法.

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