药理学实验教程（中、英文版）主编 叶春玲 钟玲暨南大学药学院药理教研室 暨南大学药学院药理教研室 2007 年 5 月 2007 年 5 月1药理学实验教程目 录 目 录第一篇 第一章 药理学实验基本知识 药理学实验须知一、药理学实验课的目的和要求 二、实验结果的整理和实验报告的撰写 第二章 药理学实验设计的基本知识一、实验设计的基本原则 二、药理实验设计中的剂量问题 三、药理实验设计中的预试问题 第三章 药理学实验的统计处理原则一、计量资料的统计分析 二、计数资料的统计分析 三、药效和剂量依赖关系（相关性）的统计分析 四、两药药效的等效性分析 第四章 常用实验动物的基本操作一、实验动物的选择及捉拿固定 二、实验动物的编号 三、实验动物的给药方法 四、实验动物的麻醉和取血 第五章 药理学实验常用仪器操作技术BL-410 生物机能实验系统 第六章 药物剂型与处方学一、药物剂型 二、处方学 第二篇 药理学总论实验 第一章 实验一 实验二 实验三 药动学实验 磺胺类药物静脉给药后的药时曲线 磺胺类药物非血管内给药后的药时曲线 3P87 计算药物动力学参数2实验四 实验五 实验六 第二章 实验一 实验二 实验三磺胺类药物在体内的分布 磺胺嘧啶的血浆蛋白结合率测定 磺胺类药物在麻醉大鼠体内经胆汁和尿排泄的实验 药效学总论实验 不同给药途径对药物作用的影响 肝功能状态对药物作用的影响 量效关系曲线和有关药效学参数测定第三章 安全性试验 实验一 药物急性半数致死量（LD50）的测定 实验二 最大耐受量（MTD）测定 第三篇 药理学各论实验 第一章 传出神经系统药物实验 实验一 药物对麻醉动物血压的影响 实验二 药物对麻醉动物血流动力学的影响 实验三 药物对离体兔主动脉环的作用 第二章 中枢神经系统药物实验 实验一 药物对小鼠自发活动的影响 实验二 药物对益智作用的影响 实验三 抗癫痫药和抗惊厥实验 实验四 镇痛药实验 第三章 心血管系统药物实验 实验一 利多卡因对哇巴因诱发心律失常的拮抗作用 实验二 强心苷对家兔在体衰竭心脏的作用 实验三 药物对垂体后叶素所致的急性心肌缺血心电图变化的影响 第四章 内脏系统药物实验 实验一 呋塞米对小鼠尿量及电解质的影响 实验二 药物对组胺诱发豚鼠哮喘的作用 实验三 药物对大鼠的利胆作用 第五章 激素类及抗炎药物实验 实验一 糖皮质激素对毛细血管通透性的影响3实验二 糖皮质激素对单核巨噬细胞吞噬功能的影响 实验三 抗炎药物对大鼠足跖肿胀的影响 第四篇 实际应用能力训练 第一章 第二章 设计性实验 病历讨论附录 一、常用动物离体实验的生理溶液 二、动物实验常用麻醉药的用法与用量 三、不同动物采血部位与采血量的关系 四、常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量 五、不同种属动物单位体重（kg）剂量折算系数 六、动物常用正常数据 七、成年动物的年龄、体重和寿命比较4第一篇 药理学实验基本知识第一章一、药理学实验课的目的和要求 1 目的药理学实验须知药理学实验课的目的在于通过实验，使学生掌握药理学实验的基本方法，了解获得药理学知 识的科学途径，验证药理学中的重要理论，更牢固地掌握药理学的基本概念和基本知识。 药理学实验课更高层次的目的是在于培养学生的能力，实验课是培养学生发现问题、分析问 题和解决问题的重要课程。几乎所有药理学知识都是通过实验――有目的的科学实验而得到的。 我们上实验课，就是要了解我们的前辈科学家们是怎样提出问题、分析问题并最终设计出科学的 实验来验证或解决问题。也就是说，我们上实验课的目的是教会学生一种方法，一种科学的方法， 一种获取知识的新手段。能否通过实验课培养学生的发现问题、分析问题和解决问题的能力，是 我们实验课成败的关键， 对学生来说， 能否通过实验课培养自已严肃认真和实事求是的科学态度， 使自已具有初步的科研能力，是医学生能否成才的关键问题。 2 要求 为达到上述目的，实验课学生必须做到下列几项： 2.1 实验前 ⑴仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、方法和操作步骤，领会其设计原理。 ⑵对实验中所用的药物，要了解其药理作用，并明白该药在本实验中的意义，预测给动物用 药后可能出现的情况。 ⑶结合实验内容，复习有关药理学和生理学等方面的理论知识。 2.2 实验时 ⑴ ⑵ 将实验器材妥善安排，正确装置。 严格按照实验指导上的步骤进行操作，准确计算药量，防止出现意外差错。⑶ 认真、细致地观察实验过程中出现的现象，准确记录药物反应的出现时间、表现及发展进 程。联系课堂讲授内容进行思考。 ⑷ 注意节约实验材料。 2.3 实验后 ⑴ 及时整理实验结果，保存好原始记录，并写出实验报告。 ⑵ 清洁实验器材，保持室内卫生，存活或死亡的动物分送至指定地点。5二、实验结果的整理和实验报告的撰写整理实验结果和撰写实验报告，是培养学生观察能力和分析综合能力的重要方法，对自己所 完成的实验进行科学总结，是实验课的最重要的目的之一。通过认真地、科学地总结，可使我们 把实验过程中获得的感性认识提高到理性认识，明确该实验已证明的问题及已取得的成果。实验 中尚未解决的问题或发现的新问题，以及实验设计中或操作中的优缺点等等，这些十分重要。实 验报告反映了学生的实验水平及理论水平。实验报告也是向他人提供研究经验及供本人日后查阅 的重要资料，可以为毕业后开展科研工作打下良好的基础。因此，应该充分认识到在校学习期间 学会做这一项科学研究工作中关键性工序的重要性。 1 实验结果的整理 实验结束以后应对原始记录进行整理和分析。药理实验结果有测量资料（如血压值、心率数、 瞳孔大小、体温变化、生化测定数据和作用时间等。计数资料（如阳性反应或阴性反应、死亡或 存活数等） 、描记曲线、心电图、脑电图、照片和现象记录等。凡属测量资料和计数资料，均应以 恰当的单位和准确的数值作定量的表示，不能笼统提示。必要时应作统计处理，以保证结论有较 大的可靠性，尽可能将有关数据列成表格或绘制统计图，使主要结果有重点地表达出来，以便阅 读、比较和分析。作表格时，要设计出最能反映动物变化的记录表，记录单个动物的表现时，一 般将观察项目列在表内左侧，由上而下逐项填写，而将实验中出现的变化，按照时间顺序，由左 至右逐格填写。 将多个或多组动物实验结果统计时，一般将动物分组的组别列于表左，而将观察记录逐项列 于表右。绘图时，应在纵轴和横轴上画出数值刻度，表明单位。一般以纵轴表示反应强度，横轴 表示时间或药物剂量，并在图的下方注明实验条件。如果不是连续性变化，也可用柱形图表示。 凡有曲线记录的实验，应及时在曲线图上标注说明，包括实验题目，实验动物的种类、性别、体 重、给药量和其他实验条件等。对较长的曲线记录，可选取有典型变化的段落，剪下后粘贴保存。 这里需要注意的是必须以绝对客观的态度来进行裁剪工作，不论预期内的结果或预期外的结果， 均应一律留样。 2 实验报告的写作 每次实验后应写好报告，交负责教师批阅。实验报告要求结构完整、条理分明、用词规范、 详略得宜、措辞注意科学性和逻辑性。一般包括下列内容： 2.1 实验题目 实验题目一般应包括实验药物、实验动物、实验主要内容等。如D心得安对麻醉犬的降压作用 分析‖， D普鲁卡因肌注对小鼠局麻作用及中毒抢救‖， D奎尼丁抗电诱发的蛙心心律失常的作用‖等。62.2 实验目的 说明本次实验的目的。 2.3 实验方法 当完全按照实验指导上的步骤进行时，也可不再重述，如果实验方法临时有所变动，或者发 生操作技术方面的问题，影响观察的可靠性时，应作简要说明。 2.4 实验结果 实验结果是实验报告中最重要的部分，需绝对保证其真实性。应随时将实验中观察到的现象 在草稿本上记录，实验告一段落后立即进行整理，不可单凭记忆或搁置了长时间后再作整理，否 则易致遗漏或差错。实验报告上一般只列经过归纳、整理的结果。但原始记录应予保存备查。 2.5 讨论 讨论应针对实验中所观察到的现象与结果，联系课堂讲授的理论知识，进行分析和讨论。不 能离开实验结果去空谈理论。要判断实验结果是否为预期的。如果属于非预期的，则应该分析其 可能原因。讨论的描述一般是：首先描述在实验中所观察到的现象，然后对此现象提出自己的看 法或推论，最后参照教科书和文献资料对出现这些现象的机制进行分析，如实验观察到用药后动 物出现了什么现象，提示了该药可能具有什么药理作用，文献曾报道该药可对什么受体有作用。 因此，可初步推测该药的这种药理作用可能与其作用于什么受体有关。 2.6 结论 实验结论是从实验结果归纳出来的概括性判断，也就是对本实验所能说明的问题、验证的概 念或理论的简要总结。不必再在结论中重述具体结果。未获证据的理论分析不能写入结论。7第二章 一 实验设计的基本原则药理学实验设计的基本知识药理学研究的目的是通过动物实验来认识药物作用的特点和规律，为开发新药和评价药物提 供科学依据。由于生物学研究普遍存在的个体差异，要取得精确可靠的实验结论必须进行科学的 实验设计，因此必须遵循以下基本原则。 1 重复 D重复‖包括两方面的内容，即良好的重复稳定性（或称重现性）和足够的重复数，两者含意 不同又紧密联系。有了足够的重复数才会取得较高的重现性，为了得到统计学所要求的重现性， 必须选择相应的适当的重复数。 统计学中的显著性检验规定的 P&0.05 及 P&0.01 反映了重现性的高低；DP‖表示不能重现的 概率。在已达到良好的重现性的条件下，如果 P 值相同，重复数越多的实验，其价值越小。它说 明实验误差波动太大，或是两药的均数相差太小。前者提示实验方法应予改进，后者提示两药药 效的差别没有临床意义。可见，靠增加实验例数来提高重现性是有一定限度的。 1.1 实验重复数的质量 除了重复数的数量问题外,还应重视重复数的质量问题。 要尽量采用精密、 准确的实验方法， 以减少实验误差。同时应保证每次重复都是在同等情况下进行。即实验时间、地点、条件，动物 品系、批次，药品厂商、批号，临床病情的构成比或动物病理模型的轻重分布应当相同。质量不 高的重复，不仅浪费人力和物力，有时还会导致错误的结论。 1.2 药理实验设计中的例数问题 实验结论的重现性与可靠性同实验例数有关，实验质量越高、误差越小，所需例数越少， 但最少也不能少于D基本例数‖。 实验动物的基本例数 （1）小动物（小鼠、大鼠、鱼、蛙）: 计量资料每组 10 例，计数资料每组 30 例。 （2）中动物（兔、豚鼠）: 计量资料每组 6 例，计数资料每组 20 例。 （3）大动物（犬、猫、猴、羊）: 计量计数资料每组 5 例，计数资料每组 10 例。 2 随机 D随机‖指每个实验对象在接受处理（用药、化验、分组、抽样等等）时，都有相等的机会， 随机遇而定。随机可减轻主观因素的干扰，减少或避免偏性误差，是实验设计中的重要原则之一。 随机抽样的方案有以下几种: 2.1 单纯随机8所有个体（病人或动物）完全按随机原则（随机数字表或抽签）抽样分配。本法虽然做到绝 对随机，但在例数不多时，往往难以保证各组中性别、年龄、病情轻重等的构成比基本一致，在 药理实验中较少应用。 2.2 均衡随机 又称分层随机。首先将易于控制且对实验影响较大的因素作为分层指标，人为地使各组在这 些指标上达到均衡一致。再按随机原则将各个体分配到各组。使各组在性别、年龄、病情轻重等 的构成比上基本一致。该法在药理学实验中常用，如先将同一批次动物（种属、年龄相同）按性 别分为 2 大组，雌雄动物总数应当相同（雌雄各半） 。每大组动物再分别按体重分笼，先从体重轻 的笼中逐一抓取动物，按循环分组发分别放入各组的笼中，待该体重动物分配完毕后，从体重次 轻的笼中继续抓取动物分组，…… 直至体重最重的笼中动物分配完毕。 2.3 均衡顺序随机 该法主要用于临床或动物病理模型的抽样分组。即对病情、性别、年龄等重要因素进行均衡 处理，其他次要因素则仅作记录，不作分组依据。先根据主要因素画一个分层表，然后根据病人 就诊顺序依次按均衡的层次交替进行分组。例如准备将病情及性别加以均衡的临床试验分组情况 见下表(病人总数 22 人)，最后分组结果达到在病情及性别基本均衡。 均衡顺序随机分组表 Balance ordering random grouping 均衡层次Balance degree开始组别按就诊顺序分层交替分为 A,B 组共计 Total A 4 2 3 2 B 4 3 3 1Group No.1 Grouped alternately as clinical ordering to A and B A B B A 1A,2B,3A,4B,5A,6B,11A,13B 7B,15A,16B,17A,18B 8B,9A,10B,19A,20B,22A 12A,14B,21A病重 男（M） Bad 女（F） 病轻 男（M） Mild 女（F）3 对照 D对照‖是比较的基础，没有对照就没有比较，没有鉴别。对照组的类型很多，将在后面加以介 绍。对照应符合D齐同可比‖的原则，除了要研究的因素（如用药）外，对照组的其他一切条件应 与给药组完全相同，才具有可比性。 3.1 分组的类型 3.1.1 阴性对照组 即不含研究中处理因素（用药）的对照，应产生阴性结果。9（1）空白对照 不给任何处理的对照，多用于给药前后对比，两组对比时较为少用。 （2）假处理对照 经过除用药外的其它一切相同处理（麻醉、注射、手术等） ，所用注射液体在 pH、渗透压、溶媒等均与用药组相同，可比性好，两组对比时常用。 （3）安慰剂对照 用于临床研究，采用外形、气味相同，但不含主药（改用乳糖或淀粉）的 制剂作对照组药物，以排除病人的心理因素的影响。 3.1.2 阳性对照组 采用已肯定疗效的药物作为对照，应产生阳性结果。如果没有阳性结果出现，说明实验方法有待改进。 （1） 标准品对照 采用标准药物或典型药物作为对照， 以提供对比标准， 便于评定药物效价。 （2）弱阳性对照 3.1.3 实验用药组 （1）不同剂量 可阐明量－效关系，证明疗效确由药物引起；还可避免因剂量选择不当而错 误淘汰有价值的新药。一般采用 3～5 个剂量组，离体平滑肌实验组间剂量比为 10，整体脏器活 动为 3.16 或 2, 整体效应为 1.78 或 1.41。 （2）不同制剂 将提取的各种有效组分、不同提取部分或不同方式提取的产物，同时进行药 效对比，以了解哪种最为有效。 （3）不同组合 用于分析药物间的相互作用，多采用正交设计法安排组合方式。 3.2 对比的性质 3.2.1 自身对比 又称同体对比、前后对比，为同一个体用药前后、或身体左右侧用药的对比。 采用疗效不够理想的传统疗法或老药作为对照，可代替安慰剂使用。可大幅度较少个体差异，但要注意前后两次机体状况是否有自然变异。 3.2.2 配对对比 采用同种、同窝、同性别、同体重的动物，一一配对。可减实验误差，提高实验效率，但要注意不可滥用。 3.2.3 组间对比 药理实验中应用最广的对比。注意非用药因素要尽可能一致，以减少误差。 下面几种对比是对比的特殊情况。 3.2.4 交叉对比 同一个体前后两次分别接受甲乙两药治疗。一组动物先用甲药，后用乙药，另一组动物先用乙药，后用甲药。两次用药期间可根据实验性质休息一定时间，以避免前药对后药 的影响。动物实验或临床研究中均可应用，主要适用于病程较长的疾病或病理模型。 3.2.5 历史对比 利用个人既往经验、过去的病历记录或历史文献资料作为对比。可比性差，除 癌症、狂犬病等难治疾病外，最好不用。 3.2.6 双盲对比 主要用于临床研究，可减少医师和病人两方面的心理因素影响。实验中病人和 观察病情的医师都不知道谁是用药组，谁是对照组。只有主持研究者保留名单，以决定具体治疗10措施和分析实验结果。为新药临床研究中必不可少的方法之一。二药理实验设计中的剂量问题1 安全剂量的探索 首先用小鼠作急性毒性实验, 求出最大耐受量(或LD1)。 然后按等效剂量的直接折算法计算 出实验中所用动物的最大耐受量；取其1/3－1/5作为较安全的试用量。 2 剂量递增方案 对于非致死性毒性反应较明显的药物，可先采用较小的剂量（例如LD1的1/50）作预试，以策 安全。 试用后如未出现药效， 也无任何不良反应， 可将药物剂量递增。 每次增幅由100％递减至30％ 左右，直至出现明显药效或产生明显不良反应。具体方案见下表： 剂量递增表 The Increasing of dosage 实验次数（Experiment No） 剂量倍数（Dosage Times） 3 不同种属动物间的剂量换算 对于文献中有在其它种属动物使用剂量的药物, 可通过剂量换算过渡到实验需用动物上来。 以往常用的标准动物的等效剂量折算系数法，简便适用，但不宜用于体重不标准的动物。 不同种属标准体重动物整体（只）剂量折算倍数K Times（K）of Dosage Conversion Between Various Standard Weight Animals 动物种属 Animal sorts 小鼠mouse（20g） 大鼠rat（200g） 豚鼠cavy（400g) 兔rabbit（1.5kg） 猫cat（2.0kg） 猴monkey（4.0kg） 犬dog（12kg） 人human（70kg） 小鼠 mouse 1 0.14 0.08 0.04 0.03 0.016 0.008 大鼠 rat 7.0 1 0.57 0.25 0.23 0.11 0.06 豚鼠 cavy 12.25 1.74 1 0.44 0.41 0.19 0.10 0.031 兔 rabbit 27.8 3.9 2.25 1 0.92 0.42 0.22 0.07 猫 cat 29.7 4.2 2.4 1.08 1 0.45 0.23 0.078 猴 monkey 64.0 9.2 5.2 2.4 2.2 1 0.52 0.16 犬 dog 124 17.8 9.2 4.5 4.1 1.9 1 0.32 人 human 388 56.0 31.5 14.2 13.0 6.1 3.1 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121 2 3.3 5 7 9 12 16 21 28 38 500.整体动物剂量（Dosage of a whole animal）： DB ＝ DA× B/KA K 现介绍一种对任何体重动物都适用的D等效剂量直接折算法‖：后面的表列出了不同动物的公11斤体重剂量折算的有关系数和标准体重整体剂量折算倍数，供计算时使用。 不同种属动物单位体重（kg）剂量折算系数动物种属小鼠大鼠豚鼠兔猫猴犬人剂量折算系数K10.71 0.09 0.20.62 0.099 0.40.370.300.320.210.11 0.1 70动物体型系数R 0.059 标准体重(kg) 0.020.093 0.082 1.5 20.111 0.104 4 12标准体重动物：DB ＝ DA× B／KA K／3非标准体重动物： DB ＝ DA× B／RA× R （WA／WB）1三药理实验设计中的预试问题在正式实验前应充分重视预实验的重要性，它可大大提高实验的效率，避免盲目性。通过预 试应建立并改进实验方法、选择最佳实验对象、条件及指标。通过预试应对于干扰实验的因素有 明确的了解。通过预试应尽可能提高实验的稳定性和灵敏性。 1 实验的稳定性及其选择 实验稳定性通常可用同一样本重复实验结果的变异系数CV表示： CV＝SD / X 实验变异系数小于0.05表示稳定性好, 大于0.2 则表示波动太大, 需改进实验方法。药理实验 中可利用CV的测定选择适当的动物模型。 2 实验的灵敏性及其选择 用药剂量稍有变化，反应强度即出现明显差异，说明灵敏度较高。灵敏度可用因变系数C.C. 表示： C.C.＝|（R1－R2）/（log D1－log D2）| 式中R1、R2为反应强度，D1、D2为相应的药物剂量。 药理实验中可利用CV和C.C.的测定选择最佳的实验动物、实验脏器或实验条件。 3 预试的任务及预试结果的意义 预试中应有计划地查明与保证正式实验成功有关的各种重要信息, 如: 动物品种、脏器类型、 实验条件、实验方法、药物用量、观察指标等等。用于预试所得数据是在逐步改进的过程中陆续12收集的，时间差异较大，一般不宜将预试结果并入正式实验结果。 通过预备实验，可拟出实验记录的内容，以保证正式实验能有条理、按顺序进行，不致遗漏 重要的观察项目，便于对结果进行统计分析。实验记录一般包括以下内容 （1）实验标本的条件 如动物的种类、来源、体重、性别、编号等。 （2）实验药物的情况 如药物的来源、批号、剂型、浓度、剂量及给药途径等。 （3）实验的环境条件 如实验日期、时间、温度、湿度等。 （4）实验进度、步骤及方法的详细记录。 （5）观察指标的变化情况 包括原始记录和相关描记图纸或照片。 （6）资料整理、数据统计分析及其结果。 （7）实验中存在的问题、改进措施，需要进一步探讨的问题。 每次实验都必须随时记录，每一阶段结束时，都要对及时进行分析结果、整理数据，并画出 必要的统计图表，作出结论，写出报告。13第三章 一 计量资料的统计分析药理学实验的统计处理原则计量资料，又称量反应资料，是对每个观察对象测量某项指标的数值大小所得的资料，如动 物的体重、血压、心率、尿量、平滑肌收缩幅度，等等；其内涵的信息比计数资料丰富，是药效 统计分析中最常用的资料类型。 1 总则 （1）一般用ｔ检验或方差分析法检验。 （2）应写出各组均值、标准差及例数。 （3）不用标准误，必要时可用95％可信限。 统计处理之前注意点： （1）有无应舍数据：数据在X± SD之外者可考虑舍弃。 3 （2）有无方差不齐：可用方差齐性检验，如两组的标准差相差一倍以上时，不必检验即可判断为 方差不齐。 （3）有无明显偏态：可用正态性D检验，如均数两侧例数之差大于2×√ｎ时，不必检验即可判断 为明显偏态。 （4）有无不定值：有&10、&30等不定值的资料时, 不宜用均数作ｔ检验,可改用中位数表达,作 Mann-Whitney秩和检验,等级和检验, 或序值法检验。 （5）有无时序关系：有用药前及用药后（包括各时间）的资料，应以各组用药前后的变化值或变 化率进行两组ｔ检验，不宜用用药后实测值进行检验。 2 方法的选择 2.1 同批资料: 方差相齐----ｔ值法 两组对比- 方差不齐----ｔ＇值法 无明显偏态多组对比- 综合对比----方差分析 组间两两对比--ｔ值法 有明显偏态, 或有不定值-----秩和检验, 序值法 注意事项： 有配对关系的用药前后比较, 只有在确知对照组用药前后实测值无明显变化时, 采 用配对ｔ检验才有意义。一般仍然采用两组用药前后的变化值或变化率作组间ｔ检验。 2.2 多批资料14一般仍然采用方差分析和ｔ值法, 必要时可采用析因ｔ检验。二计数资料的统计分析计数资料, 又称质反应资料；这种资料中每个观察对象要先按类别、性质进行划分（如阳性、阴性，痊愈、未愈等），然后清点各区中观察对象的例数而获得数据资料。由于阳性率是对这类 资料进行统计分析的最常用指标，也可称为D阳性率资料‖。 1 总则 （1）一般用X2检验或ｕ检验。 （2）应写出各组例数、阳性例数及阳性率。 （3）药效统计中样本均不很大，以用X2（2× 2）法为好。 统计处理之前注意点： （1）样本是否太小：如两组总例数少于40且其中有数据小于5，或数据中有0或1时，应改用精确 概率法。 （2）有无配对关系：当每一对象接受两种处理（两个疗程或左右两侧用药），应改用配对X2检 验。 （3）有无等级关系：有等级关系的资料（如痊愈、显效、有效、无效，＋＋＋、＋＋、＋、－等）， 应采用等级序值法，或Ridit法检验。 2 方法的选择 2.1 两率对比: 无配对关系――样本较大------ X2 (2× 2)法 样本较小------精确概率法 有配对关系----------------配对X2 法 2.2 多率对比: 无等级关系――多率综合对比--- X2 (R× C)法 组间两两对比---- X2 (2× 2)法 有等级关系--------Ridit法, 等级序值法 注意事项： （1）两率多组资料，应在组间两两对比。 （2） 两率多院资料， 应分别算出各医院的有效率, 再用合适方法计算总有效率， 采用加权合并√X2 法较为严谨。三药效和剂量依赖关系（相关性）的统计分析15通常用剂量的对数值与药效强度做量效关系分析。如剂量选择适当，数据近似直线关系，可 用各实测数据进行直线回归分析，写出回归方程式、回归系数及其显著性检验。 1 直线回归及其特点 如果两个变量 x，y 有相关关系，且相关系数的显著性测验有显著性，则可以根据实验数据的 各(x，y)值，归纳出由一个变量 x 的值推算另一个量 y 的估计值之函数关系，找出经验公式．这 就是回归分析。若相关是直线相关，且要找的经验公式是直线方程。则称为直线回归分析。它是 应用最广的一种，呈直线关系或能直线化的函数规律的资料都可进行直线回归分析。 把实验资料描成散点图时，各点并不恰在一直线上，要选择一条最合适的直线作为这种函数 关系的代表．就要符合回归方程算出的理论 ye 值与各实际 y 值越接近，则直线越合适的原则。于 是规定：Σ(y-ye)2 为最小的直线为回归直线，也就是实验 y 值与理论 ye 值差值的平方和为最小(或 各点与直线的纵距离的平方和为最小)是决定回归线的条件，这种方法称为最小二乘方或D最小二 乘法‖。其直线方程称直线回归方程，简称回归方程。 2 回归方程与回归系数 直线回归方程的通式是 ye＝a 十 bx，其中 ye 是由 x 推算的估计值(理论值)，故标为 ye，a 是 回归线在 y 轴上的截距，b 为回归系数(由 x 推算 y 的回归系数)，即回归线的斜率，反映 y 随 x 变化的变化率。 3 回归与相关的关系 回归反映两变量间的依存关系，相关反映两变量间的互依关系，两者都是分析两变量间数量 关系的统计方法,其实际的因果关系要靠专业知识判断， 不要对实际毫无关联的事物进行回归或相 关分析。 相关系数 r 与回归系数 b 的正负号一致，正值说明正比，负值说明反比，而且 b 或 r 与 0 的 差异有否显著性的 t 测验是等值的，即 tr＝tb。因 tr 易算，故可用 t r 代替 tb 进行显著性测验，而且 对任一个样本的 b 或 r 都应进行显著性测验，以说明 x 与 y 间有无直线关系。 4 等级相关分析 如果两个变量均为随机变量， 但不服从正态分布， 特别是其中有率或构成比等相对数的变量， 或本来就是等级变量，要研究其相关性，可用等级相关分析（Spearman 法） ，简介如下。 先将两变量从小到大分别排序，得出它们的序值。如果其中有相等的值，其序值都取其平均 值。比如排序为 3、4 的两个 X 值相等，它们的序值均为 3.5。然后计算每对变量的序值之差，依 次记为 d1、d2、d3、……，dn。按以下公式求等级相关系数 rs。 rs = 1 - 6Σd2 / N（N2-1）16等级相关系数 rs 在等级相关分析中的意义与相关分析中的相关系数 r 一样，可反映两变量间 是否存在相关性。四两药药效的等效性分析要证明两药的药效相近, 绝不能仅以P & 0.05为依据, 必须作双向单侧ｔ检验。下面介绍一种简便、适用的D等效界值法‖：Ｌ＝Ｄ×Ｍｓ－Ｔ×Ｓｅ ｆ＝ｎ1＋ｎ2－2说明： （1）式中D为等效性检验标准，通常生化指标取5％，生理指标取10％，药动学指标取20％。 （2）Ｍｓ为标准药物组的均数，Ｔ是自由度ｆ下的单侧ｔ值，Ｓｅ是两组的共同标准误。 （3）先按计算公式算出等效界值 L，然后计算两组均数之差。如果均数差小于 L，表示等效性合 格。17第四章 一 实验动物的选择及捉拿固定常用实验动物的基本操作正确掌握动物捉拿固定的方法，可以防止动物过度挣扎或受损伤而影响实验观 察效果，并可避免实验者被咬伤，从而保证实验顺利进行。下面介绍药理学实验课中常用的几种 动物的捉拿固定方法。 1 小 鼠 小鼠性情温顺，一般不会主动咬人，但抓取时动作也要轻缓。抓取时先将小鼠放在粗糙物（如鼠笼）上面，用右手提起鼠尾， 将小鼠轻轻向后拉，这样可使小鼠前肢抓住粗糙 面不动，用左手拇指和食指捏住鼠头皮肤和双耳，其余三指和掌心夹住其背部皮肤及尾部，这样 小鼠便可被完全固定在左手中（图 1） ，此时右手可作注射或其它实验操作，也可将小鼠固定在特 制的固定器中。图 1 小鼠的捉拿方法图 2 大鼠的捉拿方法2 大 鼠捉拿固定的方法基本上与小鼠相同。由于大鼠比小鼠牙尖性猛，不易用袭击的方式抓取，捉拿时较难一些，为防大鼠在惊恐或激怒时咬伤手指，实验者应带上棉手套或帆布手套，先 用右手将鼠尾提起，放在粗糙物上，向后轻拉鼠尾，使其不动，再用左手拇、食指捏住头颈部皮 肤，其余三指和手掌固定鼠体，使其头、颈、腹呈一直线（图 2） ，这时右手可作注射，若需进行 手术，则应对大鼠进行麻醉后固定于手术台上。如需尾静脉取血或注射，可将大鼠放入固定盒内 或用小黑布袋装大鼠，使其只露尾巴。 3 豚 鼠 豚鼠胆小易惊，性情温和，不咬人，抓取幼小豚鼠时，只需用双手捧起来，对体型较大或怀孕的豚鼠，先用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手 托住其臀部（图 3） 。18图 3 豚鼠的捉拿方法4 家 兔家兔比较驯服，一般不会咬人，但脚爪较尖，应避免抓伤。抓取时轻轻将兔提起，另一手托其臀部，使其躯干的重量大部分集中在该手上，然后按实验需要将兔固定成各种姿势（图 4） 。注意抓兔时不要单提两耳，因为兔耳不能承受全身重量，易造成疼痛而引起挣扎，因此单提 兔耳，捉拿四肢，提抓腰部和背部都是不正确的抓法。图 4 家兔的捉拿与固定5 青蛙和蟾蜍 用左手握住动物，以食指和中指夹住一侧前肢，大拇指 压住另一前肢，用右手协助，将两后肢拉直，左手无名指和小指将其压 住固定（图 5） 。注意在抓取蟾蜍时，切勿挤压其两侧耳部突起的毒腺， 以免毒液喷出射入眼中。图 5 蟾蜍的捉拿与固定二实验动物的编号在动物实验时，常常需要编号分组，将动物做上不同的标记加以区别。标记的方法很多，常用的编号标记方法有染色法、挂牌法和烙印法。家兔等较大动物可用特制的号码牌 固定于耳上，而小动物则常用染色法。染色法是药理学实验课中最常使用的方法，通常用化学试 剂涂染动物背部或四肢一定部位的皮毛，代表一定的编号，常用染色的化学试剂有：19黄色：3%-5%苦味酸溶液 咖啡色：20%硝酸银溶液 红色：0.5%中性红或品红溶液 黑色：煤焦油的酒精溶液图 6 大鼠、小鼠标记法（1）1-10 号标记法：编号的原则是先左后右，从前到后，如将动物背部的肩、 腰、臀部按左、中、右分为九个区，从左到右标记 1-9 号，第 10 号不作标记（图 6） 。 （2）10-100 号标记法：在上述编号的同一部位，用各种不同颜色的化学试剂擦上斑点，就可代 表相应的十位数，例如涂上黄色的苦味酸代表 1-10 号，涂上红色的中性红代表 11-20 号，涂上咖 啡色的硝酸银代表 21-30 号，以此类推。三 1 小1.1实验动物的给药方法 鼠灌胃法 以左手捉住小鼠，使其腹部朝上，右手持灌胃器（以 1-2mL 注射器上连接细玻璃灌胃管或把注射针头磨钝稍加弯曲制成的灌胃针头）灌胃管长约 4-5cm， ， 直径约 1mm。 操作时，先从小鼠口角将灌胃管插入口腔内，然后用灌胃管向后上方压迫小鼠头部，使口腔与食 道呈一直线，再将灌胃管沿着上颚壁轻轻推入食道（图 7） ，当推进约 2-3cm 时可稍感有阻力，表 明灌胃管前部已到达膈肌，此时即可推进注射器进行灌胃，若注射器推注困难，应抽出重插，若 误入气管给药，可使小鼠立即死亡，注药后轻轻拔出灌胃管，一次灌药量为 0.1-0.3mL/10g 体重。 1.2 皮下注射法 通常选择背部皮下注射，操作时轻轻拉起背部皮肤，将注射针刺入皮下，把针尖向左右摆动，易摆动说明针尖确已刺入皮下，然后注射药液，拔针时，以手捏住针刺部位， 防止药液外漏（图 8） ，注射药量为 0.1-0.3mL/10g。20图7小鼠灌胃法图8小鼠皮下注射法1.3 肌肉注射法 小鼠因肌肉较少，很少采用肌肉注射，若有需要可注射于股部肌肉，多选后腿 上部外侧，一处注射量不超过 0.1mL。 1.4 腹腔注射法 以左手固定小鼠，腹部向上，注射部位应是腹部的左、右下外侧 1/4 的部位，因为此处无重要器官。用右手将注射器针头刺入皮下，沿皮下向前推进 3-5mm，接着使针头与皮肤 呈 45 度角刺入腹肌，继续向前推进，通过腹肌进入腹腔后感觉抵抗力消失，此时可注入药液，一 次注射量为 0.1-0.2mL/10g 体重（图 9） 。图 9 小鼠腹腔注射法图 10小鼠尾静脉注射法1.5 静脉注射法 一般采用尾静脉注射，事先将小鼠置于固定的筒内或铁丝罩内， 或扣于烧杯内，使尾巴露出，尾巴于 45-50 C 的温水中浸泡半分钟或用 75%的酒精棉球擦拭，使 血管充血，选择尾巴左右两侧静脉注射，如针头确已在血管 内，推注药液应无阻力，。注射时若出现隆起白色皮丘，阻力增大，说明未注入血管，应拔出针头重新向尾根部移动注射。 注射完毕后，把尾巴向注射部位内侧折曲而止血。需反复静脉注射时，应尽可能从尾端开始，按 次序向尾根部移动注射。一次注射量为 0.05-0.1mL/10g 体重（图 10） 。2 大2.1鼠灌胃法 用左手以捉拿固定法握住大鼠（若两人合作时，助手以左手捉住大鼠用右手抓住后肢和尾巴） ，灌胃方法与小鼠相类似，仅采用安装在 5-10mL 注射器上的金属灌胃管（长 6-8cm, 直径 1.2mm,尖端为球状的金属灌胃管） 。一次灌药量为 1-2mL/100g 体重。 2.2 皮下注射法 注射部位可选择背部或大腿外侧，操作时轻轻拉起注射部位皮肤，将注射针刺 入注射部位皮下，一次注射药量为 1mL/100g 体重。 2.3 肌肉注射与腹腔注射法同小鼠。 2.4 静脉注射法 清醒大鼠可采用尾静脉注射，方法同小鼠，麻醉大鼠可从舌下静脉给药，也可 将大鼠腹股沟切开，从股静脉注射药物。3 豚鼠3.1 灌胃法 用左手拇指和食指固定豚鼠两前肢，其余手指握住鼠身（两人操作时，21助手以左手从动物的背部把后腿伸开，并把腰部和后腿一起固定，用左手的拇指和食指捏住两前 肢固定） ，灌胃管与灌胃方法同大鼠。亦可采用插管灌胃法，用木或竹制开口器，把导尿管或塑料 管通过开口器中央的小孔插入胃内，回注射器针栓，无空气抽回时即可注入药液。 3.2 皮下注射法 注射部位多选择大腿内侧、背部、肩部等皮下脂肪少的部位。通 常在大腿内侧注射，一般需两人合作，一人固定豚鼠，一人握住侧后肢，将注射器针头与皮肤呈 45 角方向刺入皮下，确定针头在皮下后注射，注射完毕后以指压刺入部位片刻，以防药液外漏。 3.3 3.4 肌肉注射与腹腔注射法同小鼠。 静脉注射法 注射部位可选择前肢皮下头静脉、后肢小隐静脉、耳壳静脉、或雄鼠的阴茎。静脉，偶尔亦可用心脏穿刺给药。一般用前肢皮下头静脉穿刺较用后肢小隐静脉成功率高，而后 肢小隐静脉下部比较固定，比起明显可见但不固定的上部穿刺成功率要高。也可在胫前部将皮肤 切开一小口，暴露出胫前静脉后注射，一次注射量不超过 2mL。4 兔4.1 灌胃法 给家兔灌胃需要两人合作，助手就坐，将家兔的躯体夹于两腿之间，左手紧握双耳固定头部，右手抓住双前肢固定前身。术者将木或竹制的开口器横放在家兔的上下颌之间，固定 于舌头之上，然后把合适的导尿管经开口器中小孔，沿图 11家兔灌胃法上颚壁慢慢插入食道约 15-18cm，此时可将导尿管外口端置于一杯清水中，若无气泡逸出，说明 确已插入食道，这时可用注射器注入药液，然后用少许清水冲洗导尿管，灌胃完毕，应先捏闭导 尿管外口，拔出导尿管，再取出开口器（图 11） 。 4.2 皮下、肌肉、腹腔注射法 基本方法与鼠类相同，选用的针头可以大一些。给药的最大容量分别为：0.5mL、1.0mL 和 5.0mL/kg。 4.3 静脉注射法 注射部位一般采取耳缘静脉（兔耳外缘的血管为静脉，中央的血管为动脉（图 12） 。可用酒精棉球涂擦耳部边缘静脉部位的皮肤， 或用电灯泡烘烤兔耳使血管扩张，以左手食22指放在耳下将兔耳垫起，并以拇指按住耳缘部分，右手持注射器，针头经皮下，沿皮下向前推进 少许再刺入血管，注射时若无阻力或无发生局部皮肤发白隆起现象，说明针头在血管内即可注射图 12兔耳缘血管分布图 13兔耳缘静脉注射法药液，注射完毕压住针眼，拔去针头，继续压迫数分钟止血（图 13） 。5 青蛙和蟾蜍淋巴囊内注射 蛙及蟾蜍皮下有多个淋巴囊，对药物易吸收， 但皮肤无弹性，药液容易从穿刺孔逸出。因此，给任何一个淋巴囊注药均不能直接刺入。如作腹淋巴囊注射时，将针头从股部上 端刺入肌层，进入腹壁皮下淋巴囊再注药，作胸部淋巴囊注射时，针头由口腔底部穿下颌肌层而 达胸部皮下；作股淋巴囊注射时，应从小腿皮肤刺入，通过膝关节而达大腿部皮下。注入药液量 一般为 0.25-0.5mL（图 14） 。1.颌下囊 2.胸囊 3.腹囊 4.股囊 5.胫囊 6.侧囊 7.头背囊 图 14 蛙的皮下淋巴囊四 动物的麻醉和取血1 实验动物的麻醉 在一些动物实验中，特别是手术等实验，为减少动物的挣扎和保持其安静，便于操作，常需 对动物采取必要的麻醉。由于动物属间的差异等情况，所采用的麻醉方法和所选用的麻醉剂亦有 所不同。231.1 常用的麻醉剂 动物实验中常用的麻醉剂分为三类，即挥发性麻醉剂、非挥发性麻醉剂和中药麻醉剂。 1.1.1 挥发性麻醉剂 这类麻药包括乙醚、氯仿等。乙醚吸入麻醉适应于各种动物，其麻醉量和致死量差距大，所 以安全度也大，动物麻醉深度容易掌握，而且麻醉后苏醒较快。其缺点是对局部刺激作用大，可 引起上呼吸道黏膜液体分泌增多，再通过神经反射可影响呼吸、血压和心跳活动，并且容易引起 窒息，故在乙醚吸入麻醉时必须有人照看，以防止麻醉过深而出现上述情况。 1.1.2 非挥发性麻醉剂 这类麻醉剂种类较多，包括巴比妥钠、戊巴比妥钠、硫喷妥钠等巴比妥类的衍生物，氨 基甲酸乙脂和水合氯醛。这些麻醉剂使用方便，一次给药可维持较长的麻醉时间，麻醉过程较平 衡，动物无明显挣扎现象。但其缺点是苏醒较慢。 1.1.3 中药麻醉剂 动物实验时有时也用到像洋金花和氢溴酸冬莨菪碱等中药麻醉剂，但由于其作用不够稳定， 而且常需加佐剂麻醉效果才能理想，故使用过程中不能得到普及，因而，多数实验室不选用这类 麻醉剂进行麻醉。 1.2 动物的麻醉方法 1.2.1 全身麻醉 吸入法：用一块圆玻璃板和一个钟罩或一个密闭的玻璃箱作为挥发性麻醉剂的容器，多选用 乙醚做麻药。麻醉时用几个棉球，将乙醚倒入其中，迅速转入钟罩或箱内，让其挥发，然后把待 麻醉动物投入，约隔 4～6min 即可麻醉，麻醉后应立即取出，并准备一个蘸有乙醚的棉球小烧杯， 在动物麻醉变浅时套在鼻上使其补吸麻药。本法最适于大、小鼠的短期操作性实验的麻醉， 腹腔和静脉给药麻醉法：非挥发性和中药麻醉剂均可用作腹腔和静脉注射麻醉，操作简便， 是实验室最常采用的方法之一。腹腔给药麻醉多用于大鼠、小鼠和豚鼠，较大的动物如兔、狗等 则多用于静脉给药进行麻醉。由于各种麻醉剂的作用长短以及毒性的差别，所以在腹腔和静脉麻 醉时，一定要控制药物的浓度和注射量（详见附录表 2） 。 1.2.2 局部麻醉 局部麻醉一般应用 0.5%～1.0%盐酸普鲁卡因注射；眼、鼻、咽喉、黏膜表面麻醉可 2%盐酸 可卡因溶液，滴入后数秒钟即可出现麻醉。 1.2.3 麻醉注意事项 1 静脉注射必须缓慢，同时观察肌肉紧张性、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明 显减弱或消失时，立即停止注射。配制的药液浓度要适中，不可过高，以免麻醉过急；但也不能 过低，以减少注入溶液的体积。 2 麻醉时需注意保温。麻醉期间，动物的体温调节机能往往受到抑制，出现体温下降，可影24响实验的准确性。此时常需采取保温措施， 3 做慢性实验时，在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平。 2 实验动物采血方法 实验研究中，经常要采集实验动物的血液进行常规检查或某些生物化学分析，故必须掌握血 液的正确采集。 不同动物采血部位与采血量的关系见附录三。 常用实验动物的最大安全采血量与最小致死采血量，见附录四。25第五章 BL-410 生物机能实验系统1 概述：药理学实验常用仪器操作技术BL-410 生物机能实验系统是配置在微机上的 4 通道生物信号采集、放大、显示、记录与处理 系统，它将现代电子技术与计算机数据处理技术有机地融合在一起，替代了原来利用分离的放大 器、示波器、记录仪、刺激器等众多仪器组成的烦琐的生物信号观测与记录装置，在微机上以中 文 Windows 操作系统平台为基础，直观而操作简便，这套实验系统主要由以下三部分组成： 1、IBM 兼容微机。 2、Biolap410 生物信号采集、放大硬卡； 3、Biolap98 生物信号显示与处理软件。 2 生物信号显示与处理软件界面介绍： 2.1 主界面： 主界面（图 1）是我们与 BL-410 生物机能实验系统打交道的直观窗口，熟悉主界面上各个部 分的用途，可以帮助我们使用和操作该系统，为实验观察和记录打下基础。 主界面从上到下依次分为：标题条、菜单条、工具条、生物信号显示窗口、反演相关功能按 钮区及状态条等 6 个部分；在生物信号显示窗口的左边为控制区和信息区，控制区从上到下可分 为 4 个通道的参数及扫描速度调节区和特殊实验标记选择区；在主界面左下角有一个最小化的设 置刺激器参数对话框。主界面上各个部分的功能见表 1。26图 1 BL-410 生物信号显示与处理软件主界面表1BL-410 软件主界面上各部分功能一览表名称 标题条 菜单条功能 显示 Biolap98 软件的名称以及实验标题 显示所有的顶层菜单项， 您可以选择其中的某一菜单项 以弹出其子菜单。最底层的菜单项代表一条命令。备注工具条一些常用命令的图形表示集合， 它们使常用命令的使用 变得方便与直观。控制、信息区 切换按钮 时间显示窗口 生物信号显示 窗口 控制区及信息 区切换控制区和信息区控制区和信息区占据屏幕左边 相同的区域显示记录数据的时间 显示生物信号的原始波形或数据处理后的波形， 每一个 显示窗口对应一个实验采样通道 控制区用于调节实验参数， 信息区用于显示实验数据测 量结果在数据记录和反演时显示控制区和信息区采用分时复用 技术使用相同屏幕资源，27数据查找滚动 条 四个数据反演 相关功能按钮 状态条 设置刺激器参 数对话框用于实时实验和反演时快速数据查找和定位用于反演时进行数据剪辑、 图形剪辑以及波形的横向扩 展和压缩 显示当前系统命令的执行状态和一些提示信息 设置刺激器参数 反演时消失2.2 生物信号波形显示窗口简介： 这是一个实验者观察生物信号波形的显示窗口。当系统处于初始状态时屏幕上共有 4 个波形 显示窗口，实验中可根据自己的需要选择在屏幕上显示 1 个、2 个、3 个或 4 个波形显示窗口，图 2 表示的是一个波形显示窗口，窗口中包含有背景格线、标尺、基线和基线调节旋钮等四部分。 表 2 列举了波形显示窗口中各部分的功能。图2 生 物信号 显示窗 口表 2 生物信号波形显示窗口各部分功能一览表名称 生物信号显示区 标尺功能 显示采集到的生物信号波形 该窗口中的增益标尺， 实验者可根据该标尺及背景 标尺点直接读出生物信号的大小 参见图 2-2备注可以取消、可以移动基线 基线调节旋钮生物信号的参考零点，其上为正，其下为负 调节基线在波形显示窗口中的位置3 常用实验的一般操作步骤： 3.1 运行 BL-410 生物机能实验系统： 3.1.1 在 Windows 操作系统下用鼠标双击图标（图 3） ，进入实验系统。 3.1.2 在实验系统面板上用鼠标随意单击一下进入系统主界面。图 3 BL-410 启动图标283.2 选择输入方式： 在顶级菜单条上一共有 10 个菜单选项，它们是：文件、编辑、显示方式、输入信号、实验项 目、定标、刺激、数据处理、打印及帮助。从菜单条（图 4）进入，可从两种途径选择输入方式：文件（F） 编辑（E） 显示方式（D） 输入信号（I） 实验项目（M） 定标（A） 刺激（E） 数据处理（P） 打印（N） 帮助（H）图 4 顶级菜单条3.2.1 鼠标单击菜单条D输入信号‖，弹出下拉 式菜单（图 5） 。信号输入菜单中包括有 1 通 道、2 通道、3 通道、4 通道 4 个菜单项，每 一个菜单项都有一个输入信号选择子菜单， 可 根据需要选择各通道信号种类。 3.2.2 鼠标单击菜单条D实验项目‖,弹 出下拉式菜单（图 6）,可根据实验需要选 择固定配套的使用项目。图 5 输入信号下拉式菜单3.3 编辑实验参数： 鼠标单击顶级菜单条上的D编辑‖菜单 项，弹出D编辑‖下拉式菜单（图 7） ，编辑 菜单中包括复制、粘贴、显示剪辑页、实 验标记编辑、实验人员名单编辑、记滴时 间设置、实验标题编辑和实验相关数据编 辑等 8 个命令，以下介绍其中常用的 4 个 命令。图 6 实验项目下拉式菜单29图 7 编辑下拉式菜单图8设置实验标记对话框3.3.1 实验标记编辑: 选择实验标记选项会弹出D设置实验标记‖对话框（图 8），可根据实验的需要编辑和选择所 需的实验标记组或实验标记组内的特殊实验标记，包括添加、修改和删除实验标记组或实验标记 组内的特殊实验标记。3.3.2 实验人员名单编辑： 选择该命令，利用D实验人员名单编辑‖对话框（图 9） 输入参加实验的人员名字和实验组号，这一功能有利于学 生从网络打印机中找到自己打印的实验图形。图 9 实验人员名单编辑对话框3.3.3 实验标题编辑： 选择该命令，可通过D改变实验标题‖ 对话框（图 10）来改变实验题目，并且可 以为同一个实验设置第二个实验标题，这 样便于资料存档。 实验相关数据编辑：图 10 改变实验标题对话框3.3.4选择该命令，在D设置实验相关数据‖对话框（图 11）中，可根据实验需要，设置实 验动物的名称、体重、麻醉方法、麻醉剂名称、麻醉剂量等参数。动物名称的输入，可在动物名 称下拉式列表中选择，也可直接输入，但限定在 5 个汉字内；麻醉方法和麻醉剂名称则限定在 1030个汉字内。 3.4 观察与记录： 在实验中观察与记录，可利用工具条（图 12）上的图形按钮 进行选择，BL-410 工具条上从左到右一共有 24 个图形按钮，分 别代表系统复位、自动回零、直流平衡增档、直流平衡减档、打 开上一次实验设置、反演数据读取、打 印当前通道图形、数据记 录、启动波形显示、暂停波形显示、停止波形显示等命令。下面 简单介绍常用的几个按钮。图 11 设置实验相关数据对话图 12工具条启动波形显示按钮，选择它可快捷进入波形显示。 暂停波形显示按钮，选择它将暂停波形显示。 数据记录按钮，当按钮呈红色时，表示系统正在进行记录，再次选择它时程绿色，表示系 统停止记录。 停止波形显示按钮，选择它将停止波形显示。 打印当前通道图形按钮，选择它可打印当前通道的图形。 反演数据按钮，选择它（与D文件‖菜单中的D选择反演数据‖命令功能相同）将弹出打开对话 框（图 13），在文件名列表中选择一个文件或在文件名编辑框中直接输入需要反演的文件名，按 D确定‖按钮，即可启动反演数据文件。图 13打开对话框3.5 数据的打印：31鼠标单击菜单条D打印‖菜单项，弹出下拉式打印菜单（图 14） ，该菜单包括 1 通道图形、2 通 道图形、3 通道图形、4 通道图形、1、2 通道图形、1、2、3 通道图形、所有通道图形、打印比例、 打印位置等 11 个命令。下面重点介绍打印比例和打印位置命令。 3.5.1 打印比例： 选择该命令时，弹出打印比例子菜单，包括 4 个子命令：100%、70%、50%、25%（图 15） ， 分别表示原来图形的 100%、70%、50%或 25% 进行打印，可以根据实验需要进行选择。默认的 打印比例为 100%。图 14打印下拉式菜单 图 15 打印比例子菜单3.5.2 打印位置：图 16打印位置子菜单选择该命令时，弹出打印位置选择子菜单（图 16） ，子菜单包含 9 个子命令：左上角、右上 角、左下角、右下角、上中、下中、横向左、横向右和 4 组/张，可根据实验需要选择打印位置。 3.6 实验参数设定与实验数据显示： BL-410 系统将实验参数设定与数据显示功能合并在一起， 通过控制区与信息区的切换按钮进 行切换显示，即控制区和信息区不能同时显示在屏幕上，当你在调节好实验参数后，可以切换到 信息区同时观察 4 个通道的测量结果。 3.6.1 参数设定： 参数设置时，选择控制按钮，主界面上弹出控制区总体图（图 17） ，它包括 4 个通道的增益、 时间常数、滤波、显示速度以及特殊标记选择区等，可根据实验需要设定实验参数和选择特殊标 记。 3.6.2 数据显示： 选择信息按钮，弹出信息区总体图（图 18） ，通常每个通道可同时显示 6 个测量数据，一般 而言，信息显示区内所测量的数据与当前通道的设置有关，如：在输入信号选择压力信号时，信 息区将显示收缩压、舒张压和平均压；如果选择输入信号选择的是电信号或张力信号时，那么信 息区显示的是最大值、最小值和平均值。32图 17控制区总体图图 18信息区总体图3.6.3 特殊实验标记的选择： 特殊实验标记选择区位于控制区的最下方，是一个选择特殊实验标记的下拉式列表（图 19） ， 根据实验的需要可预先通过编辑菜单中的D特殊实验标记编辑‖命令任意编辑一组实 验模块，实验时将其选入特殊实验标记区中。图 19特殊实验标记选择区3.7 数据编辑： 对保存的实验数据进行编辑，可通过图形剪辑与数据剪辑的方式，删除无用数据，留下有效 数据，将有效图形剪辑后粘贴到 windows 操作系统下的其他文件中，为实验报告的整理和论文的 撰写提供方便。 3.7.1 图形剪辑；33图形剪辑是为了把不同实验阶段所显示的波形粘贴在一起，形成一张完整的图形，该图形不 能进行测量，但可以与其它 windows 的应用程序所共享。在进行图形剪辑时，选择 或从反演控制按钮中选择D图形剪辑‖，此时图形显示将被暂停，按下鼠标左键，确定需剪辑图形的左上 角，按住鼠标不放，并想右拖动鼠标，此时，屏幕上将出现一个方形虚线框（图 20） ，虚线框内 是你准备剪辑的图形，当选择确定后，松开鼠标，这时会出现一张白色剪辑页（图 21） ，你选定 的图形将被放在该页的左下角，利用鼠标可随意调节图形的位置。图 20 图形剪辑示意图图 21图形剪辑页在反演过程中，可重复选择你需要的图形，最后，在剪辑页上形成一张剪辑的整体图形（图 22） ，用 windows 操作系统平台，直接粘贴到其它文件中去，如 word 文档、小画板等。图 22 图形剪辑后形成的剪辑页（2）数据剪辑： 数据剪辑是针对数据进行剪辑，剪辑后的数据与原始记录的数据在格式上没有任何差别，它34可以作为反演数据进行播放，也可以对其进行测量、分析。进行数据剪辑时，选择或从反演控制按钮中选择D单屏内数据剪辑按钮‖，此时波形将被停止， 同时在当前通道中将 出现一条白 色的垂直线，该线用来确定剪辑数据的起始点，它将随着鼠标左右移动，按下鼠标左键确定剪辑 数据的起始点，此时，屏幕上又将出现另一条垂直线，它用来确定剪辑数据的末点（图 23） ，按 下鼠标左键确定剪辑数据末点，这段数据将被存储到编辑文件中。图 23数据剪辑示意图35第六章 一 药物的制剂及剂型药物剂型与处方学剂型系指按药典或处方配制成的具有一定规格的药物制品。 根据药物的性质和用药目的不同， 可将药物制成各种适宜的剂型以便充分发挥疗效，减少不良反应。制剂除应保证含量准确、均匀 稳定、便于临床应用和贮存外，还应具有较高的生物利用度。 常用剂型按形态分为固体剂型、半固体剂型、液体剂型和气雾剂等。近些年来，一些新的剂 型，包括药物载体制剂如微型胶囊、脂质体、微球剂、磁性微球、前体药物制剂、膜剂等不断用 于临床。下面主要介绍一些常用的药物剂型。1 固体剂型1.1 片剂(tablet) 是将药物加入赋形剂经压制而成的小圆片。片剂的制造、分发和服用都很方便。片剂一般在 胃液中崩解和开始吸收，是临床应用最多的一种制剂。此外，片剂可根据需要制成下列不同类型： 多层片：外层为速释部分药物，内层为缓释部分药物。如多酶片。 植入片(经过灭菌)：埋藏于皮下，起长效作用。如睾丸素植入片。 肠溶片：是在片剂外层包有耐酸的肠溶包衣，能完整地通过胃部而到达肠内才崩解。如氨茶 碱肠溶片。 含毒药的外用片剂：应着色，并压制成与内服片剂能够明显区别的片型。如高锰酸钾外用片 剂。 1.2 丸剂(pill) 通常是将药物细粉(多为中草药， 目以上)或药物提取物加适宜的粘合剂或辅料制成的圆球 100 型固体制剂，专供内服用。粘合剂可用蜂蜜、水、米糊或面糊，所制成的丸剂分别称为蜜丸、水 丸、糊丸。如银翘解毒丸。 1.3 散剂(powder) 系指一种或多种药物均匀混合而制成的干燥微末状制剂，供内服或外用。如冰硼散。 1.4 胶囊剂(capsule) 系将药物装入空硬胶囊或软胶囊中制成的制剂，供内服。如四环素胶囊。 1.5 颗粒剂(granule) 是将化学药物制成干燥颗粒状的内服剂。如四环素颗粒剂。近年来，以中草药为原料，根据 汤剂特点，创制成一种颗粒性散剂(powder granule)临用时加水冲服，故又称冲剂。冲剂既保留了 汤剂发挥药效较快的优点，又便于保存和运输。如感冒退热冲剂。362 半固体剂型(软性剂型)2.1 软膏剂(ointment): 是指药物加入适宜基质(凡士林、液体石蜡、羊毛脂等)制成的半固体外用 制剂，如氢化可的松软膏。专供眼疾用的极为细腻的软膏又称眼膏剂。如金霉素眼膏。 2.2 硬膏剂(plaster): 系将药物溶解或混合于半固体或固体的粘性基质中，涂于敷背材料上，供贴 敷于皮肤上的外用制剂。中药制剂中的硬膏剂称为膏药。如骨健灵贴膏。 2.3 栓剂(suppository): 系药物与适宜基质混合制成的专供塞入人体不同腔道使用的―种软性制 剂。重量和形状因用途不同而有差别。如肛门栓剂是圆锥形，重约 2 克，常用的基质有甘油、明 胶和柯柯豆脂。 2.4 浸膏(extract): 系将药物浸出液浓缩后的粉状或膏状固体剂型。除特别规定外，浸膏的浓度每 克相当于 2―5 克原生药。如颠茄浸膏。3 液体剂型（1）溶液剂(solution 或 liquid) 一般为非挥发性化学药物的澄明水溶液，供内服或外用。如 10％氯化钾溶液(内服)，4％硼酸 溶液(外用)。 （2）注射剂（injection） 一般指药物的灭菌溶液或混悬液， 亦称安瓿剂(ampou1)， 供注射用， 如盐酸肾上腺素注射液。 有的药物在溶液中不稳定，则以其灭菌的干燥粉末封装于安瓿中，通常称为粉针剂，临用时配成 溶液，如青霉素 G 钠盐。注射剂是临床最常用的制剂之一，具有疗效迅速、剂量准确、作用可靠 的优点。适用于不宜口服的药物以及不能口服或急症的患者。 （3）合剂(mixture): 是多种药物配制成透明或混悬液的水性液体制剂，供内服。如胃蛋白酶合剂。 （4）煎剂(decoction): 是用水煎煮的生药煎出液，中草药常用这种剂型。须新鲜制备。 （5）糖浆剂(syrup): 系含有药物、药材提取物或芳香物质的蔗糖近饱和的水溶液。如小儿止咳糖 浆。 （6） 酊剂(tincture): 系生药或化学药品用乙醇萃出或溶解而制成的澄清液体制剂。 如复方樟脑酊。 （7）醑剂(spirit): 一般系指含芳香挥发性药物的醇溶液，含醇量一般比酊剂高。如芳香氨醑。 （8）流浸膏(1iquid extract): 一般是指生药的浸出液经除去部分溶媒而成为浓度较高的液体剂型。 除特别规定外，每毫升相当于生药 1 克。如甘草流浸膏等。 （9）乳剂(emulsion): 是指互不相溶的两种液体(如油类药物和水)，经过乳化剂的处理，制成均匀 而较稳定的乳状液体，一般供内服用。如鱼肝油乳剂。目前尚有脂肪乳剂可供静脉注射。 (10) 洗剂(lotion): 主要是指含有不溶性药物的混悬液，专供外用。如炉甘石洗剂。374 气雾剂(airosol)是指药物与抛射剂(液化气体或压缩气体)一起装封于带有阀门的耐压容器内的液体制剂。使 用时借助于气化的抛射剂增加器内压力，当阀门打开后，能自动将药液以极细的气雾(颗粒直径一 般在 l0 微米以下)喷射出来。患者顺势吸人药物直达肺部深处，就能很快发生作用。5 新剂型(1) 缓释剂（retarder） ：将药物制成小的颗粒，分作数份，少数不包衣为速释部分，其他分别 包上厚薄不同的包衣为缓释部分。取上述颗粒以一定比例混合，制成各种剂型。服用后药物按包 衣厚薄不同，在需要时间内依次释药，不断发挥疗效，减少或避免药物浓度的D峰谷‖波动。 (2) 控释片（controlled release tablet） ：一般先把药制成片芯，然后，在片芯外面包上一定厚 度的半透膜，再采用激光技术在膜上打若干小孔。病人服用后，药片与体液接触，水从半透膜进 入片芯，使药物溶解，当药片内部的渗透压高于外部时，药物便从小孔中徐徐流出，能控制药物 释放速度，使药物较平稳地持续发挥疗效。 (3) 泡腾片（effervescent tablet）：它与普通片剂的不同之处，就在于它还含有泡腾崩解剂， 当泡腾片放入饮水中之后，在泡腾崩解剂的作用下，即刻产生大量气泡（二氧化碳），使片剂迅 速崩解和融化。泡腾片剂崩解快速、服用方便、起效迅速，生物利用度高，能提高临床疗效。泡 腾片特别适用于儿童、老年人以及吞服药丸困难的患者，经过调味后的泡腾片，口味更佳，良药 不再苦口，使病人更乐于接受。由于崩解产生的大量泡沫增加了药物与病变部位的直接接触，更 好地发挥其疗效作用，所以泡腾片还用于口腔或阴道疾病等的防治用药。 (4) 微形胶囊(microcapsule)：药物被包裹在囊膜内制成微小的无缝胶囊。外观呈粒状或圆珠 形，直径 5―400μm。囊心可以是固体或液体药物，包裹材料是高分子物质或共聚物，如氯乙烯 醇、明胶及乙基纤维素等。微形胶囊的优点在于可防止药物的氧化和潮解，控制囊心药物的释放 以延长药效。如维生素 A 微囊。 (5) 脂质体( liposomes)：或称类脂小球，液晶微囊，是一种类似微型胶囊的新剂型。脂质体 是将药物包封于类脂质双分子层薄膜中制成一种超微形球状体制剂， 直径不超过 5μm。 所谓载体， 可以是一组分子，包蔽于药物外，通过渗透或被巨噬细胞吞噬后，载体被酶类分解而释放药物， 从而发挥作用。脂质体广泛用作抗癌药物载体，具有增强定向性、延缓释药、控制药物在组织内 分布及血液清除率等特点。 (6) 微球剂（microspheres） ：是一种适宜的高分子材料制成的凝胶微球，其中含有药物。微球 的粒径很小（1～3μm） ，经常悬于油中。微球对癌细胞有一定的亲和力，能够浓集于癌细胞周围， 特别对淋巴系统具有指向性。38(7) 磁性微球( magnetic microspheres)： 磁性微球是将药物(大多是抗癌药)与超微磁铁粒子包封 于生物降解聚合物(如聚氨基酸)膜中而制成的微球剂，直径为 1μm。服用这种制剂后，在体外适 当部位用一适宜强度磁铁吸引，将磁性微球引导到体内特定靶区，使达到需要的浓度。这种载体 具有用量少、局部作用强，提高疗效的优点。 (8) 前体药物制剂（pro-drug preparations） 是将一种具有药理活性的母体药物，导入另一种 ： 载体形成一种新的化合物，在人体内经过生物转化，释放出母体药物而显疗效。如潘生丁磷酸腺 苷酸是潘丁与嘌呤核苷酸生物结合成的分子化合物，在消化道中吸收好。增强了潘生丁的护冠作 用，而且也加强了核苷酸对心肌作用。 (9) 膜剂(药膜 sheet)：是将药物溶解于或混悬于多聚物的溶液中，经涂膜、干燥而制成。按 给药途径分为口服膜剂(如安定膜剂)，眼用膜剂(如毛果芸香碱眼用膜剂)：阴道用膜剂(如避孕药 膜)，皮肤、粘膜外用膜剂(如冻疮药膜)等。膜剂是近年国内外研制应用的一种新剂型，具有体积 小、重量轻以及便于携带和贮存的优点。二 处方学 1 处方的意义处方(prescription)是医师写给药剂师的书面通知， 指示取何种药物和剂量， 以及调配方法和服 用方法。因此，处方是医师和药师共同对患者负责的一项重要的书面文件。凡是由于开写处方或 配制、发药的差错而造成的医疗事故，处方便是重要的证据之一，借以确定医师或药师应负的法 律责任。为了正确开写处方，医师不仅应具有丰富的临床医学知识，而且要通晓药物的药理作用、 毒性、剂量、用法、配伍禁忌以及药剂学等方面的知识。2 处方的结构与书写要求一般医疗单位都有印好的统一处方笺， 便于应用和保存， 处方时只需把应写的项目填好即可。 完整的处方可分作 6 部分，其排列顺序如下： 2.1 处方前项 包括医院全名、患者的姓名、年龄、性别、住院号或门诊号、处方日期等。2.2 处 方头 凡写处方都以 R 或 Rp 起头。 R 为拉丁文 Recipe 的缩写，是D请取‖的意思。此部分已印 在处方笺上，不必另写。 2.3 处方正文 这是处方的主要部分，包括制剂和药量。制剂为药名、剂型及规格的全称。如果一张处方开写两种或两种以上的药物，则每种药物均应另起一行书写。药品数量一律用阿拉伯数 字表示，药量应写在各药的后面，纵横对齐。处方中的药量单位一律按药典规定的公制单位开写。 固体或半固体药物以 g 或 mg 为单位，液体药物以 mL 为单位，其他单位如国际单位(iu 或 u)等。39小数点前如无整数，必须加零，如 0.5，以免出错。 2.4 配制法 完整处方开完药物后，还要写明调配方法。简单处方没有这一项。2.5 用法 是告诉患者用药的方法，通常以 sig 或 S．标志(拉丁文 signa 或 signeture 的缩写)； 内容包括：每次用量、给药途径、给药时间、给药次数等。如为口服，可省去给药途径；饭后服 用，可省去给药时间。除每次用量外，其余各项常用外文缩写表示。一般药物以开 3 天量为宜， 最多不超过 7 天量(慢性病或特殊情况可适当增加)。限剧药总量一般不超过 2 日极量。麻醉成瘾 药品一般不超过 3 日用量，并应单独以专用处方笺(红色)书写。如果病情需要超过限用量或极量 时，医师在剂量或总剂量旁边加示惊叹号，如 3．O!，并在此总剂量处盖章或签名，以示负责。 2.6 医生签名(或盖章) 书写处方时，字迹要工整、清楚。不得用铅笔书写。急诊处方须立即取药者，一般用急诊处 方笺书写，或在处方左上角加D急!‖字。需做过敏试验的药物应注明D皮试!‖。写完处方应仔细核对 保证无误，并向患者做适当说明后交给患者(或护士)到药房取药。药师有责任检查处方，如发现 错误，有权退还医师改正。确认无误后，才能进行配制和发药，并在处方笺上签名。 过去，在开写处方时常用拉丁文。即处方的 3、4 项用拉丁文开写。其中制剂名称均用单数属 格。现在则常用英文开写，当然，也有用中文书写的。至于用那种文字书写，各医疗单位常有自 己的规定。3 处方类型及中、英文处方实例处方类型主要有完整处方和简化处方两大类。考虑到当前国内的实际情况，这里只介绍简化 处方，简化处方是开写已经制成各种剂型的药物，在处方正文中，药物的名称、剂型、规格、取 用量一行即可写完，并将第 4 项的配制方法省略。简化处方目前又可分为单量处方和总量处方两 类。 3.1 单量处方 有些药物剂型每次用量独立可分，如片剂，每片单量是一定的。注射剂、胶囊剂亦然。此类 处方的通式是： 剂型及药名 单量× 总个数(片、支等) 用法：每次用量 给药途径 给药时间 给药次数 举例： (1) 四环素片 0.25× 16 S 每次 0.5 每 6 小时一次 0.25× 16Tab．Tetracycline40S0.5 q.6.h 40 万单位× 6(2) 青霉素 GS 皮试阴性后，一次肌注 40 万单位，每日二次 Inj. Penici11in G 400,000u× 6 S 400,000u im A.S.T b.i.d． (3) 盐酸肾上腺素注射剂 l mg× 1S 立即皮下注射 1 mg Amp. Adrenaline Hydrochloride l mg× 1 S l mg S.C． st 3.2 总量处方 有些药物剂型每次用量需从总量中取出，处方时制剂后应写总量。如溶液剂，糖浆剂，酊剂， 软膏剂等。此类处方的通式如下： 剂型及药名 浓度-总需要量 （浓度也可写在药名前面） 用法：每次用量 给药途径 给药时间 每日次数 举例： (1)胃蛋白酶合剂 100 毫升 S 每次 10 毫升 每日三次 Mixt．Pepsin 100mL S 10mL t.i.d． (2) 氯化钾溶液 10％―100 毫升S 每次 10 毫升 每日三次 So1．Potassium Chloride 10％一 100mL S 10mL t.i.d． 3.3 极量处方 指药物用量超出极量时开写的处方，既可见于单量处方中，又可见于总量处方中，因此未将 其算为一类。与上述两类处方的区别是：医师在剂量或总剂量旁边加示惊叹号，表示我认为病情 需要超过极量，并在此总剂量处盖章或签名，以示负责。 如： 阿托品注射液 2 mg × 5 S 立即静脉注射 10 mg ! 2 mg × 5Amp Atropine41S10 mg ! ivst3.4 简易处方 在实际工作中，在医院内部取得共识的前提下，有时会以较为简单的方式书写处方，省略掉 正式处方中的某些部分，现举例如下： （1）住院长期医嘱：只写药名（和剂型） 、每次用量、给药途径、 （给药时间） 、给药次数。 如：Penici11in G 400，000u im b.i.d． （2）住院临时医嘱或门诊病历：较住院长期医嘱增加一项用药天数。 如：So1．Potassium Chloride 10％一 10.0 t.i.d．× 3 （3）一次性多药混合注射给药：分行写出所用各药的药名（和剂型） 用量后，在右侧划 、 一斜线，然后写出给药途径（或和使用说明） 。如：Inj. Glucose 5%-500mL Gentamicin 160,000u iv gtt4 处方常用缩写字4.1 剂型: Tab 片剂, Caps 胶囊, Loz 喉片, Pil 丸, Gran 颗粒剂， Amp 安瓿, Inj 注射剂, Sol 溶液, Emul 乳剂, Extr 浸膏, Syr 糖浆, Tr 酊剂, Dec 煎剂，Ung 软膏, Ocul 眼膏, Lot 洗剂, Mixt 合剂, Nabula 滴鼻剂, Ol 油剂, Past 糊剂, Pulv 散剂, Supp 栓剂 4.2 剂量单位: gtt 滴, iu 或 u 国际单位, q.s. 适量 4.3 给药途径: im 肌注, iv 静注, iv gtt 静滴, P.O 口服, Pr 灌肠. S.C 皮下注射 4.4 给药次数: q.d 每日一次, b.i.d 每日二次, t.i.d 每日三次, q.i.d 每日四次, q.o.d 隔日一次, q.3.d 三日一次， q.h 每小时一次, q.4.h 每四小时一次, q.6.h 每六小时一次, q.8.h 每八小时一 次,… … 4.5 给药时间: q.m 每晨, a.m 上午, p.m 下午, q.n 每晚, H.S.睡前, A.C.饭前, P.C.饭后,st 立即, s.o.s 必要时, p.r.n 必要时(长期医嘱), A.S.T 皮试后。 4.6 其他: aa 各, ad 加至, aq dest 蒸馏水, Co 复方, etc 等等。42第二篇 药理学总论实验第一章 实验一 【目的】 药动学实验磺胺嘧啶一次性静脉给药后的药时曲线磺胺嘧啶静脉一次性给药后其血药浓度随时间变化的规律。【原理】 已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的氨基（―NH2）将被离子化而生成铵类化合物（―NH3+） 。后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而生成重氮盐（―N ＝N+―） 。该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合物。在 525nm 波长下比色，其光 密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。具体反应过程为：NH2 NaNO3 CCl3COOH SO2NHR N N Cl H 3C OH+SO2NHRNaOHN H 3CN ONa CH(CH3)2CH(CH3)2根据上述原理,在给受试家兔一次静脉注射一定剂量的磺胺嘧啶后,于不同时间点采集其静 脉血样,采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析,并以血药浓度对相应时间作图, 从而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。 【动物】 3kg 左右家兔一只 【药品】 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD） 、7.5％三氯醋酸、0.1％SD 标准液、0.5％亚硝 酸钠、0.5％麝香草酚（用 20％NaOH 配制） 、1000u/mL 肝素生理盐水、3％戊巴比妥钠、蒸馏水。 【器材】 721 分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、 硅胶管） 、兔手术台、注射器（5mL）及针头、移液器（0.01～1mL） 、吸头、试管、离心管、试 管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。 【方法与步骤】 1．血中药物浓度测定：参见表 1 流程图。 （1）麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食 12 小时不禁水） ，记录体重和性别，耳 缘静脉注射 3％戊巴比妥钠 0.8～1.0 mL/kg 麻醉，仰位固定于兔手术台上。 （2）手术：颈部手术区剪毛，切皮约 6cm 左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分 离出颈总动脉约 2～3 cm 左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。 （3）耳缘静脉注射 1000u/mL 肝素 1 mL/kg。 （4）插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动脉上剪一DV‖型切口，插入尼43龙管，用线结扎牢固，以备取血用。 （5）取血：打开动脉夹放取空白血样 0.4mL，分别放入 1 号管（空白管）和 2 号管（标准管） 各 0.2mL 摇匀静置。而后静注 20％SD 1.5mL/kg，分别于注射后 1、3、5、15、30、45、60、90， 120 分钟时由动脉取血 0.2mL 加到含有 7.5％三氯醋酸 2.7mL 的试管中摇匀。 标准管加入 0.1％SD 标准液 0.1mL，其余各管加蒸馏水 0.1mL 摇匀。 （6）显色：将上述各管离心 5 分钟（ 转/分） ，取上清液 1.5mL，加 0.5％亚硝酸 钠 0.5mL，摇匀后，再加入 0.5％麝香草酚 1mL 后溶液为橙色。 （7）测定：于分光光度计在 525nm 波长下测定各样品管的光密度值。表1 7.5％ 时间 试管 （min） （mL） 空白管 标准管 给药后 0 0 1 3 5 15 30 45 60 90 120 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 0.2 0.2三氯醋酸磺胺类药物血药浓度测定的步骤 0.5％ 0.5％ 浓度亚硝酸钠 麝香草酚 光密度血液蒸馏水 （mL） 0.1标准液（mL） （mL） （mL） 1 1 1 充分 0.5 取上清 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 液 1.5 0.1 mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1 1 1 1 1 0.5 1 0.5 摇匀 1 1 0μg/mL 0.5 0.5 0.5 心 5 分，充分摇 0.1 匀后离 0.1 0.116.70.2 0.2（8）计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，通过空白血标准管浓 度及其光密度值推算出样品管的磺胺药物浓度。公式如下：样品管光密度(OD )=样品管浓度(μg/ mL)44标准管光密度(OD‘)标准管浓度(μg/ mL)样品管光密度(OD)× 标准管浓度 样品管浓度(μ g/ mL)=标准管光密度(OD‘)血药浓度(μg/ mL) = 样品管浓度× 稀释倍数（30）【结果与处理】 将所得数据填入表 1 中，并用计算机软件绘制药物的药时曲线。 【注意事项】 1．每次取血前要先将插管中的残血放掉。 2．每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸量管时必须将其中的残液用生理盐 水冲净。 3．将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。实验二磺胺类药物非血管内给药后的药时曲线【目的】 了解磺胺嘧啶非血管内一次给药后血药浓度随时间变化的规律。 【原理】 同上 【动物】 3kg 左右家兔一只 【药品】 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD） 、7.5％三氯醋酸、0.1％SD 标准液、0.5％亚硝 酸钠、0.5％麝香草酚（用 20％NaOH 配制） 、1000u/mL 肝素生理盐水、3％戊巴比妥钠、蒸馏水。 【器材】 721 分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、 硅胶管） 、兔手术台、注射器（5mL）及针头、移液器（0.01～1mL） 、吸头、试管、离心管、试 管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。 【方法与步骤】 1．血中药物浓度测定：参见表 1 流程图。 （1）麻醉：全麻或局麻均可。取兔一只（实验前禁食 12 小时不禁水） ，记录体重和性别，耳 缘静脉注射 3％戊巴比妥钠 0.8～1.0 mL/kg 麻醉，仰位固定于兔手术台上。 （2）手术：颈部手术区剪毛，切皮约 6cm 左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分 离出颈总动脉约 2～3 cm 左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。 （3）耳缘静脉注射 1000u/mL 肝素 1 mL/kg。 （4） 插管：用动脉夹夹住动脉近心端，再于两线中间的一段动脉上剪一DV‖型切口，插入45尼龙管，用线结扎牢固，以备取血用。 （5）取血：打开动脉夹放取空白血样 0.4mL，分别放入 1 号管（空白管）和 2 号管（标准管） 各 0.2mL 摇匀静置。而后腹腔注射 20％SD 1.5mL/kg，分别于注射后 5、15、30、45、75、120、 180、240、300 分钟时由动脉取血 0.2mL 加到含有 7.5％三氯醋酸 2.7mL 的试管中摇匀。标准管 加入 0.1％SD 标准液 0.1mL，其余各管加蒸馏水 0.1mL 摇匀。 （6）显色：将上述各管离心 5 分钟（ 转/分） ，取上清液 1.5mL，加 0.5％亚硝酸钠 0.5mL，摇匀后，再加入 0.5％麝香草酚 1mL 后溶液为橙色。 （7）测定：于分光光度计在 525nm 波长下测定各样品管的光密度值。表1 7.5％ 时间 试管 （min） （mL） 空白管 标准管 给药后 0 0 1 3 5 15 30 45 60 90 120 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 2.7 0.2 0.2三氯醋酸磺胺类药物血药浓度测定的步骤 0.5％ 0.5％ 浓度亚硝酸钠 麝香草酚 光密度血液蒸馏水 （mL） 0.1标准液（mL） （mL） （mL） 1 1 1 充分 0.5 取上清 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.1 液 1.5 0.1 mL 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1 1 1 1 1 0.5 1 0.5 摇匀 1 1 0μg/mL 0.5 0.5 0.5 心 5 分，充分摇 0.1 匀后离 0.1 0.116.70.2 0.2（8）计算血中药物浓度：根据同一种溶液浓度与光密度成正比的原理，可用空白血标准管浓 度及其光密度值求算出样品管的磺胺药物浓度。公式如下：样品管光密度(OD )=样品管浓度(μg/ mL)46标准管光密度(OD‘)标准管浓度(μg/ mL)样品管光密度(OD)× 标准管浓度 样品管浓度(μ g/ ml)=标准管光密度(OD‘)血药浓度(μg/ mL) = 样品管浓度× 稀释倍数（30）【结果与处理】 将所得数据填入表 1 中，并用计算机软件绘制药物的药时曲线。【注意事项】 1．每次取血前要先将插管中的残血放掉。 2．每吸取一个血样时，必须更换吸量管，若只用一支吸量管时必须将其中的残液用生理盐 水冲净。 3．将血样加到三氯醋酸试管中应立即摇匀，否则易出现血凝块。实验三【基本要求】3P87 计算药物动力学参数1. 在合理的设计基础上取样 对于非静脉注射给药, 一室模型不少于五个, 二室模型不少于八个, 三室模型不少十一个不 同时刻的血药浓度数据。对于静脉推注给药和静脉滴注给药滴完药以后, 一室模型不少于四个, 二室模型不少于六个, 三室模型不少于九个不同时刻的血药浓度数据。 2. 硬件配置 IBM-PC 及于其兼容的各种型号微机，英文 DOS 操作系统，打印机。 【调用 3P87 程序前的准备工作】 1. 确定主数据 如果一个剂量组有几个个体, 主数据是指浓度数据的均数或中位数, 或用户认为最具代表性 的浓度数据。 一般来说, 对静脉注射给药的数据用均数或中位数比较合适, 对于非静脉注射给药也 可考虑用实测点多的数据为主数据。确定主数据的目的是在计算个体数据时, 可参考主数据的计 算结果, 选定房室数和权重进行计算。 2. 运行前准备 开启微机后，然后将 3P87 程序盘插入 A 驱动器，按预定指令运行之。如果系统不包含软驱，47可通过将 U 盘驱动器重新命名为DA‖驱动器的方式， U 盘代替软盘， 用 不论使用软盘或 U 盘， 3p87 的所有文件均必须放置在该盘的根目录下，不得置于子目录中。将 U 盘驱动器重新命名为DA‖驱 动器的方法是：依次打开控制面板→管理工具→计算机管理→磁盘管理，用右键点击选定的 U 盘 驱动器，选择D更改驱动器名和路径‖，将该驱动器名改为DA‖即可。【程序使用方法简介】 1. 启动程序 点击D3P87‘运行文件，进入程序运行界面，点击键盘上任意键即可进入如下主菜单： 1. 输入或修改数据 2. 用主数据计算药代动力学参数 3. 对多组数据进行批处理计算 4. 由用户指定算法和条件计算药代动力学参数 5. 输出计算结果 6. 用简化系统计算药代动力学参数 7. 药代动力学房室模型的图示和说明 8. 退出 3P87 程序 2. 输入数据 在主菜单选取第一项（Input or Modify Data） ，再从分菜单选取第 1 项（Input Data）以输入 数据。输入数据时，先输封面，其中有些项目是必须输入的，包括文件名、实验对象、浓度单位、 时间单位及剂量单位，其它内容可酌情处理。接着要按屏幕提示先后输入给药途径、剂量组数、 实验对象个数、剂量等，最后分批输入 T-C 数据。 输入 T-C 数据时，先输入组内的主数据，后逐一输入各个体的相应数据，包括数据对数（时 间点数）和各时间点的 T-C 数据。数据输完后，可选择该分菜单的第 6 项检查所输内容是否正 确，如有错误，可选取第 2 或 3 项修改。核对无误后，选第 8 项退回主菜单。 3. 计算主数据的有关参数 在主菜单选取第二项以计算主数据的有关参数。 按屏幕提示输入文件名后， 计算机将自动计 算，并在计算完毕后退回主菜单。 4. 选择最佳数学模型 在主菜单进入第五项以输出计算结果，选取该分菜单的第 1 项，进入常规打印菜单。选第 2 项（输出房室模型类型的选择） ，打印出各种模型的比较表格。48先从第一个表格中找出 AIC 值最小的一种，然后从 F 检验表中查看该种模型与相邻模型的 F 检验有无显著意义? 如果 F 检验有显著意义, 取 AIC 值最小的一种为最佳数学模型，否则按房 室数较少者为宜的原则处理最佳数学模型的房室数, 权重系数不变; 记住最佳数学模型的报告序 号。 如果不能进行打印机打印， 在主菜单进入第五项以输出计算结果时， 选取该分菜单的第 2 项， 进入屏幕显示菜单。首先按屏幕要求输入首个报告序号（1）和最后一个报告序号(静脉注射给药 为 9，其他给药途径为 6)。然后通过屏幕将各个报告逐一浏览一遍，并记录下各种模型的 AIC。 找出 AIC 值最小的一种，然后查看该种模型与同等权重的相邻模型的 AIC 的差异是否大于 10%, 作为判断有无差异显著性的标准。如果差异有显著性, 取 AIC 值最小的一种为最佳数学模 型，否则按房室数较少者为宜的原则处理最佳数学模型的房室数, 权重系数不变。 5. 批处理计算各个体的参数 在主菜单选取第三项批处理计算各个体的参数。按屏幕提示输入文件名、选择房室模型类型 和权重系数（此两项必须与最佳数学模型相符） ，计算完后退回主菜单。 6. 输出计算结果 在主菜单选取第五项以输出计算结果，有两种输出方式： 如果通过打印机输出，选取该分菜单的第 1 项，进入常规打印菜单。先选取打印菜单的第 1 项，打印出封面页。然后可进行批处理计算打印出的主要内容， 在回到常规打印输出菜单后, 键入数字 3 即可打印出如下主要内容： (1) 批处理拟合优度表； 一级参数表； 二 (2) (3) 级参数表；一级和二级参数表中均给出各剂量内各个体的参数值, 平均值, 标准差和标准误。(4) 统计矩计算结果 [AUC, AUMC, MRT, VRT]。也可选取第 5 项打印各种参数的详细计算结果，按 屏幕要求输入需打印的首、尾报告的序号（一般只需打印最佳模型和各个体的报告） ，计算机将通 过打印机将所要求的报告的全部结果打印出来。 如果要通过屏幕显示计算结果，选取输出结果分菜单的第 2 项。首先按屏幕要求输入首个报 告序号（1）和最后一个报告序号。然后通过屏幕将各个报告逐一浏览一遍，并记录下有关参数。 浏览过程中，可通过屏幕打印的方式将所需结果打印出来。 该程序还可以绘制相关图及误差散点图。 在屏幕显示输出菜单后, 键入数字 3 则显示相关图 及误差散点图. 图形可直观的反应：实测值与计算值的相关关系，不同时间的误差分布，不同浓 度的误差分布。这些图形可供药代动力学分析和研究时参考。 7. 用简化系统计算药代动力学参数 简化系统是对个体数据进行简便计算的专用程序，在确定计算机已与打印机有效连接的情况49下可以选用。在屏幕显示出主菜单后, 键入数字 6 即进入药代动力学参数计算的简化系统。用户 只须按屏幕显示出的表格依次键入有关内容即可建立标题文件、指定给药途径、输入浓度--时间 数据(见前面数据输入方法).之后, 计算机将自动按相关数据计算方法进行计算, 无需指定算法, 收敛精度, 房室数, 权重. 计算完毕后, 自动打印出以下主要内容： (1) 药代动力学模型及条件. 包括指明是线性还是非线性房室模型; 房室数; 用药途径; 计 算方法; 权重; 收敛精度等。 (2) 拟合优度数据. 内容有: 加权残差平方和; 残差均方; 相关系数(R); 确定系数(R*R);最大绝对误差; 最大相对误差; 游移检验等。 (3) F 检验. 列出房室间的 F 检验表, 供选择模型时参考。 (4) 药代动力学参数. 包括一级和二级参数。 (5) 浓度实测值与计算值比较表: 列出时间, 浓度实测值, 浓度计算值, 绝对误差和相对误 差。 (6) C--T 图和 LN(C)--T 图。 (7) 选择权重: 简化系统第一次输出的是权重为 1 的计算结果, 如用户希望了解权重为1/C 或 1/C/C 的结果, 可回答屏幕上显示的提问, 键入相应数字即可打印出对应的结果。 8. 各种数学模型的模式图 如果想进一步了解各种药代动力学模型的体内过程情况，可在主菜单选取第七项，屏幕上将 出现 12 种数学模型的菜单供你选择。 输入各项前面相应的字母， 屏幕上将显示出该种数学模型的 模式图，并可通过屏幕打印方式将其打印下来。 9. 退出程序 选取主菜单的第八项，即可退出本程序 【应用实例】 给 4 只家兔灌胃口服某药 300 mg/kg, 用药后分别于 0.5、1、2、3、5、7、10、15、24 小时 取血样测定血药浓度，所得数据如下表。请计算有关药代动力学参数，并判断属何种数学模型。 （单位：时间 h , 血药浓度 mg/L） 时间( h ) 血 1号 药 2号 浓 3号 度 4号 0 .5 3.3 3.1 3.4 3.0 1 4.6 5.0 4.7 4.9 2 4.0 4.2 3.9 4.3 3 3.0 3.2 2.9 3.3 5 1.7 1.9 1.6 2.0 7 1.0 1.1 0.9 1.1 10 0.6 0.7 0.5 0.6 15 0.30 0.35 0.25 0.30 24 0.15 0.17 0.13 0.1550均 值3 .24 .84 .13 .11 .81 .00 .60.300.15【操作步骤】 1. 输入数据 启动 3P87 后, 按前述方法输入数据：文件名为 X，实验对象为家兔，灵敏度和精确度均为 0 .01，浓度单位为 mg/L，时间单位为 h，剂量单位为 mg/kg,，给药途径为静脉外，剂量组数为 1， 实验对象数为 4，剂量为 300。输 T-C 数据时，先输入均值，时间点数均为 9。核对无误后，继续 下一步。 2. 选择数学模型 按前述方法计算均值的参数后, 打印出各种数学模型的 AIC 值及 F 检验结果，根据上述原则 选取最佳数学模型(二房室，权重系数为 1/C/C)。 3 计算参数 按前述方法计算均值和各个体的有关参数，需输入文件名，房室模型类型和权重(二房室，权 重系数为 1/C/C)。 4 输出结果 输入文件名后，选择屏幕显示，显示报告为 1－6 号。可见第 6 号报告的 AIC 值最小，报告 显示药物吸收有延迟时间（Lag time ） ，结果表明：该药在家兔体内的药代动力学为二房室模型， 权重系数为 1/C/C，口服吸收延迟。再次进入屏幕显示，选择显示 6－11 号，记录 6 号和 8－11 号报告的有关药动学参数：A、α、B、β、Ka、Lag time、V/F（C） 1/2(Ka)、t1/2α、t1/2β、K21、 、t K12、AUC、CL/F、T(peak) 和 Cmax。 5 图示数学模型 在主菜单选取第七项，输入相应代号 I，即可在屏幕上看到该数学模型的图解，进一步了解 各参数的意义。实验四磺胺类药物在体内的分布【目的】 了解药物在体内的分布动力学规律 【原理】 同实验 1【动物】 25g 以上小鼠 3 只 【药品】 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine，SD） 、0.05%SD、7.5％和 15％三氯醋酸、0.5％亚硝 酸钠、0.5％麝香草酚（用 20％NaOH 配制） 、1000u/mL 肝素生理盐水。 【器材】 721 分光光度计、离心机、精密扭力天平、手术器械、组织研磨器、1mL 小鼠灌51胃器、5mL 离心管、试管、移液器（0.01～1.0mL） 、吸头、滤纸、硫酸纸、玻璃记号笔、计算机。 【方法与步骤】 参见图 1 1．标准管制备：精确吸 0.05%SD 0.1mL 加入含 7.5％三氯醋酸 1.4mL 的试管中，摇匀，加入 0.5％亚硝酸钠 0.5mL，摇匀后，再加入 0.5％麝香草酚 1.0mL。 2．取小鼠 3 只，禁食 12 小时不禁水，其中 2 只用 20％SD 灌胃 0.1 mL /10g，另 1 只用生理 盐水灌胃 0.1 mL /10g 作为对照。 3．给药小鼠分别于给药后 30、60 分钟各取 1 只断头取血（离心管内预先加入 1000u/mL 肝 素 0.1mL 抗凝） ，取血后立即摇匀。对照小鼠在实验开始时同法取血。 4．取试管 3 只编号，分别于 1 号管（对照） 号管（给药 30 分）和 3 号管（给药 60 分） 、2 内加 7.5％三氯醋酸各 2.8mL，再加入抗凝血各 0.2mL 用振荡器充分混匀。 5．取试管 9 支编号。预先称重硫酸纸。迅速剖取上述小鼠的肝、肾、脑并用滤纸沾去上面的 血液。称取小鼠全脑，全肾及 300-400mg 肝组织，分别置于组织研磨器中，加入生理盐水 （0.5mL/100mg 组织） ，研碎后再加入 15％三氯醋酸（0.5mL/100mg 组织）摇匀，制成匀浆后全 部倾入试管中。 6．将对照鼠和各给药鼠的血及组织匀浆离心 10 分（1500 转/分） ，分别取上清液 1.5mL 放入 另一相应试管中，加入 0.5％亚硝酸钠各 0.5mL，充分摇匀后再加入 0.5％麝香草酚 1.0mL，摇匀 后为橙黄色。(详细步骤见图 1) 7.5%三氯醋酸 2.8mL 血 0.2mL 脑 全部 肾 全部 肝 300-400mg 研磨 ① 0.5% 亚 硝 酸 钠 0.5mL, 摇匀 ② 0.5% 麝 香 草 酚 1.0mL 血 药 浓 度 （μ g/mL） 组织药物浓 度（μ g/g） 代入方程式 浓度值 光密度 分光光度计 测定液 （525nm 波长） 摇}