中国人兽共患病学报
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中国人兽共患病学报
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中国人兽共患病学报
2006年&22卷&06期
刊出日期：
美国《Emerging Infectious Diseases》2006年第4期有关人兽共患病论文摘译
2006&Vol. 22&(06):&480-480
于恩庶;黄丰;潘亮;王晓欢;
当今人兽共患病病原体分类
2006&Vol. 22&(06):&485-492
李鹏;罗德炎;高永辉;张松乐;宋艳;王希良;
布氏杆菌BCSP_(31)/pVAX1重组表达质粒的构建及其免疫保护效果的研究
目的构建布氏杆菌BCSP31/pVAX1重组表达质粒,免疫BALB/c小鼠,观察其免疫应答及免疫保护效果。方法克隆BCSP31基因,构建BCSP31/pVAX1重组表达质粒。转染COS7细胞,免疫组化检测其BCSP31蛋白抗原的表达。BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉注射免疫BALB/c小鼠,观察特异性体液免疫和细胞免疫效果。进一步用1.25×104布氏杆菌A544强毒株腹腔攻毒,观察BCSP31/pVAX1重组表达质粒的免疫保护效果。结果扩增的BCSP31保护性抗原基因片断在牛、羊和猪布氏杆菌株中具有高度保守性,构建的BCSP31/pVAX1重组表达质粒在COS7细胞有目的蛋白抗原的表达。制备的BCSP31/pVAX1重组表达质粒肌肉免疫BALB/c小鼠4次,ELISA检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒产生了较高水平的特异性IgG抗体,并随免疫次数增加抗体的滴度也递增,且抗体亚型以IgG2a为主,表明主要引起Th1型的免疫应答。FCM检测BCSP31/pVAX1重组表达质粒的CD4+/CD8+比值明显下降,说明激发了显著的CTL效应。MTT测定BCSP31/pVAX1重组表达质粒的淋巴细胞增殖能力与对照组比较差异显著。布氏杆菌A544强毒株攻毒后,动物存活及脾组织细菌数与对照组比较有显著性差异,说明BCSP31/pVAX1重组表达质粒能够产生有效的保护效果。结论研制的BCSP31/pVAX1重组表达质粒免疫BALB/c小鼠能产生高水平的特异性体液免疫和细胞免疫,以细胞免疫为主,并产生有效的免疫保护效果,为布氏杆菌病新型疫苗的研究奠定了基础。
2006&Vol. 22&(06):&493-497
孙强正;熊衍文;李振军;孙晖;徐建国;
乳酸乳球菌食品级载体的构建及Mn-SOD基因的克隆和表达
目的构建乳酸乳球菌(L.lactis)食品级载体,并利用其表达锰超氧化物歧化酶(Mn SOD)。方法PCR方法扩增L.lactissubsp.cremorisWg2的隐性质粒pWV01的复制子、L.lactisMG1363的thyA基因及质粒pUC18的多克隆位点,PCR方法连接后构建食品级载体pSH91,CaCl2法转化大肠杆菌X51菌株。提取质粒pSH91电转化L.lactisMBP71(△thyA),检测转化子在改良SA培养基上的生长能力。PCR扩增L.lactisMG1363菌株的sodA基因(含自身启动子),克隆到质粒pSH91中,构建食品级表达载体pSH91∶SOD,电转化L.lactisMBP71,黄嘌呤氧化酶法测定转化子L.lactis MBP71/pSH91∶SOD的SOD酶活性。结果经PCR扩增、连接、鉴定,食品级载体pSH91构建成功;转化L.lactisMBP71后,突变株回复了在改良SA培养基上生长能力,并且其生长速率和酸化能力与野生株相似。PCR扩增得到sodA基因并克隆入pSH91,构建了食品级表达载体pSH91∶SOD。重组菌L.lactisMBP71/pSH91∶SOD的SOD酶活性较出发菌株L.lac tisMBP71高10余倍。结论成功构建了食品级载体pSH91;利用该载体可在L.lactis中表达Mn SOD等外源蛋白。
2006&Vol. 22&(06):&498-501
熊飞;李俊琳;明珍平;钟沁萍;董惠芬;蒋明森;
鼠胚胎成纤维细胞饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞LDH、ACP影响的研究
目的以乳酸脱氢酶(LDH)、酸性磷酸酶(ACP)为评价指标,研究鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层及其与肝基质联合对日本血吸虫童虫培养细胞代谢的影响。方法实验分MEF与肝基质联合组(后简称联合组)、MEF组、肝基质组和对照组4组。联合组与肝基质组预先铺敷肝基质,MEF组和对照组未铺敷肝基质,将虫龄21d的日本血吸虫童虫细胞分别接种于预先铺敷或未铺敷肝基质的小盖玻片上。肝基质组和对照组细胞培养于RPMI1640含20%小牛血清附加常量抗生素的常规培养基中,联合组与MEF组的细胞培养于有MEF饲养层的常规培养基中。培养第7d,运用酶细胞化学方法对日本血吸虫童虫培养细胞进行LDH、ACP染色,OlympusBX51显微镜下观察并拍照,HIPAS2000图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果4组童虫培养细胞其LDH、ACP活性不同。LDH、ACP着色按联合组、MEF组、肝基质组、对照组依次变浅。定量分析显示,培养细胞的LDH含量,各组之间两两比较差异具显著性(P<0.01);联合组、MEF组、肝基质组培养细胞的ACP含量两两比较存在显著差异(p<0.01),联合组、MEF组与对照组之间比较差异具统计学意义(P0.05)。结论MEF饲养层能促进日本血吸虫童虫培养细胞的代谢,并能与肝基质协同促进培养细胞代谢。
2006&Vol. 22&(06):&502-505
陆群英;陈勇;姚亚萍;叶菊莲;孟真;罗芸;姜理平;朱智勇;
汉坦病毒激发人胃上皮细胞病变和凋亡
目的证实人胃粘膜上皮细胞是否为汉坦病毒属(HV)汉滩病毒型(HTN)和汉城病毒型(SEO)病毒的靶细胞,病毒对其是否有致细胞病变效应(CPE)和促凋亡作用。方法建立人胃上皮细胞(HGEC)离体培养;用HVN8、76118、Z37、Seoul8039株感染HGEC,观察细胞CPE,用直接免疫荧光法(IFA)检测病毒感染细胞和感染灶;用AnnexinV FITCkit观察HV的致HGEC凋亡和坏死作用。结果HTNV和SEOV可以感染离体培养的HGEC,形成感染灶并出现CPE;与模拟感染细胞相比,N8、76118、Z37、Seoul8039株感染的HGEC凋亡和坏死细胞比例明显增高,HTNV较SEOV促凋亡和坏死作用更强。结论HGEC可作为HTNV和SEOV感染的靶细胞,致CPE并促进细胞凋亡和坏死,在急性肾综合征出血热病人胃粘膜损害机制中起重要作用。
2006&Vol. 22&(06):&506-509
陈梅玲;张晶波;孙长俭;温博海;杨晓;牛东升;
实时荧光定量PCR检测五日热巴通体
目的采用TaqMan- MGB探针建立检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR(real- timequantitativePCR)方法。方法根据五日热巴通体特异的16-23SrRNA间隔区序列设计引物和探针,以克隆的1623SrRNA间隔区基因片段作DNA模板,建立了检测五日热巴通体实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.996);与普通PCR相比较,荧光定量PCR检测的灵敏度约为它的200倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌,检出结果为阴性。实时荧光定量PCR检测五日热巴通体实验感染小鼠血、脾脏、肝脏和肺组织DNA样本,脾脏和肝脏样本中检出较高水平五日热巴通体DNA,血和肺部检出的目的DNA的水平较低。结论本研究建立的检测五日热巴通体的实时荧光定量PCR法具有很高的检测灵敏度和特异性,可用于临床患者血样本的检测,作五日热的早期诊断。
2006&Vol. 22&(06):&510-513
殷月兰;焦新安;许海燕;焦红梅;潘志明;黄金林;
产单核细胞李斯特菌减毒候选菌株分子生物学特性研究
目的为了确定用于减毒的产单核细胞李斯特菌菌株,对初筛入选的血清型为1/2a菌株Lm1、Lm2、Lm3和Lm4的分子生物学特性进行了比较研究。方法利用PCR技术均成功地扩增出4株菌株的hly基因及actA和plcB基因片段。以LD50的测定试验作为菌株毒力指征,对4株菌株的毒力进行了测定。结果4株菌株均为强毒菌株,其中菌株Lm4的毒力最强,用BALB/c小鼠测得的LD50为1.47×104CFU。结论确定以Lm4作为候选菌株。
2006&Vol. 22&(06):&514-517
陈伟业;王淑杰;王永;胡森;王清华;辛九庆;佟有恩;黄克和;步志高;
重组布氏杆菌BP26蛋白和OMP31蛋白作为间接ELISA诊断抗原的研究
目的传统布氏杆菌病血清学方法因其抗原构成复杂,存在较严重的交叉免疫反应性,导致结果判定困难。BP26及OMP31分别为布氏杆菌细胞周质蛋白及外膜蛋白,在感染牛、绵羊、山羊、犬和人类均为优势免疫原,且在抗原性上具有较好的布氏杆菌种属特异性。方法以大肠杆菌表达、纯化的BP26和OMP31重组蛋白为包被抗原,初步建立了检测血清特异抗体的间接ELISA方法,并以现地牛布氏杆菌普查检测血清100份为样本,与传统的试管凝集试验进行了比较研究。结果试管凝集试验血清样本阳性率为15%(15/100);BP26包被抗原ELISA检测判为阳性的12个样本中有11为试管凝集反应阳性,相对阳性率为73.3%,二者阳性符合率为92%(11/12);而采用OMP31为包被抗原,阳性检出率为0(图5)。结论被检测区域阳性牛主要感染布氏杆菌为牛种布氏杆菌(B.abortus天然缺失OMP31基因);BP26作为间接ELISA包被抗原用于牛布氏杆菌血清学检测具有良好的特异性及较好的敏感性。
2006&Vol. 22&(06):&518-521
韩晓娜;李承毅;方立群;冯丹;赵文娟;杨红;Sake J de V曹务春;
SARS传播动力学及预测模型效果初评
目的为进一步探索SARS的传播和流行规律及其与预防控制措施的关系;方法利用数学和传播动力学的方法,建立流行病学数学模型。将人群分为6类,即易感人群、暴露人群、疑似人群、确诊人群、恢复人群与死亡人群。应用天津市的流行资料调整各参数方程并进行拟合和模拟。结果基于确定性微分方程,对重要的流行参数给出了估计方法,评估疾病流行过程中的干预措施的有效性。结论模拟天津市SARS的流行情况,并对预防控制措施的执行情况进行评价。提示在保持相应控制措施的情况下,SARS的流行是可以防止和控制的。
2006&Vol. 22&(06):&522-525
李德良;马文丽;师永霞;李凌;张宝;郑文岭;
HIV-1B亚型核心蛋白gag基因真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达
目的克隆人类免疫缺陷病毒Ⅰ型B亚型核心蛋白gag基因,构建真核表达载体,并在真核细胞中表达,为进一步制备自行设计的以λ噬菌体作为载体的HIV核酸疫苗奠定基础。方法以克隆好的HIV1B亚型U26942全基因质粒DNA作为模板,根据Genbank中gag基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5’端分别引入BamHⅠ及XhoⅠ酶切位点,特异性的扩增gag基因。TA克隆后经双酶切、测序等鉴定重组质粒,再经双酶切、连接构建含gag编码基因的真核表达载体,并进行酶切鉴定分析pcDNA3.1(+)/gag。在脂质体介导下转染HepG2细胞,经G418压力筛选建立稳定转染gag基因的细胞系,用RT PCR及Western印迹检测其在HepG2细胞中的表达。结果重组质粒经BamHⅠ、XhoⅠ双酶切成5.4kb与1.5kb的片断,表明表达载体pcDNA3.1(+)中插入了gag基因片断,测序结果表明编码框正确。RT PCR及Western印迹证实稳定转染gag基因的HepG2细胞系中有该基因的表达。结论成功构建了HIV1B亚型核心蛋白gag基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/gag,并在HepG2细胞中获得稳定表达。
2006&Vol. 22&(06):&526-529
李明伟;朱兴全;曹湛;林瑞庆;宋慧群;
寄生于猫的马来西亚弓首蛔虫在我国的发现
目的对采集于广州1只猫小肠内、形态与犬弓首蛔虫相似的寄生虫进行分子生物学鉴定。方法以核糖体DNA(rDNA)内转录间隔区(ITS)作为遗传标记对虫体进行种特异PCR鉴定,并测定了ITS-2序列,将序列与犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫、马来西亚弓首蛔虫序列进行比较,得到其序列的相似性和差异性。结果用马来西亚弓首蛔虫种特异性引物对试验虫体DNA进行扩增时,能扩增出明显的DNA片段,而犬弓首蛔虫、猫弓首蛔虫种特异性引物对试验虫体DNA扩增时不能扩增出任何DNA片段。试验虫体的ITS-2序列与马来西亚弓首蛔虫的ITS2序列相似性为100%,与猫弓首蛔虫的相似性为88.7%～89.0%,与犬弓首蛔虫相似性为75.8%。结论经分子生物学和形态学鉴定,从广州猫体采集的蛔虫为马来西亚弓首蛔虫,在我国为首次发现。
2006&Vol. 22&(06):&530-532
李莉莎;周晓农;林金祥;张仪;程由注;张榕燕;方彦炎;林陈鑫;陈宝建;李友松;
福建省广州管圆线虫6种新宿主的发现及疫源地的感染率周年变化
目的探讨福建省广州管圆线虫病自然疫源地的状况。方法选择有广州管圆线虫感染病例或螺类和鼠粪检查阳性的连江、南安2县、市6个村为调查点,在春、夏、秋季对中间宿主、转续宿主和保虫宿主的感染情况与感染因素等进行调查分析。结果两县、市6个村共采集检查中间宿主与转续宿主22种7169个样本,发现感染广州管圆线虫幼虫者14种。感染率最高的是褐云玛瑙螺,为36.12%(108/299),其次是沼水蛙和高突足襞蛞蝓,分别为34.72%(25/72)与25.83%(273/1057)。秋季和距离居民点5m内的环境,螺类感染率最高。14种感染宿主中,一待定种环棱螺、光滑颈蛞蝓、罗氏巨楯蛞蝓、黄蛞蝓、双线大蛞蝓和沼水蛙,为广州管圆线虫首次报告的新宿主。结论证实连江、南安2县、市6个村为广州管圆线虫严重的自然疫源地。推想全国同纬度、同自然环境条件地区均有可能有本病的自然疫源地。
2006&Vol. 22&(06):&533-537
张佃波;魏庆宽;宰德富;崔勇;李瑾;高红刚;柏雪莲;赵立江;韩广东;刘克义;
刚地弓形虫ROP2-P30复合基因在E.coliBL21中的表达和鉴定(英文)
目的获得编码弓形虫RH株棒状体蛋白2和主要表面抗原1重组复合蛋白为弓形虫病快速诊断试剂盒及蛋白质疫苗的研制作准备。方法用PCR技术从弓形虫基因组DNA中扩增出ROP2和P30基因片段,分别克隆入pMD18T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR.,双酶切和测序鉴定,将pMD ROP2中的ROP2基因片段经EcoRⅠ和HindⅢ酶切,连接等反应,亚克隆入pET30a(+)原核表达载体构建pET ROP2载体,然后再将pMD P30中的P30基因片段与经BglⅡandEcoRⅠ酶切的pET ROP2载体连接,构建pET ROP2P30载体,经含卡那霉素的LB平板筛选,酶切和PCR鉴定。阳性重组质粒转化到大肠埃氏菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达产物用SDS PAGE进行鉴定。大量的表达融合蛋白经纯化和复性后,用Westernblot分析。结果从弓形虫RH株基因组DNA中扩增出特异的ROP2和P30基因片段,成功构建成pET ROP2和pET ROP2P30载体,成功表达了弓形虫棒状体蛋白2和弓形虫棒状体蛋白与主要表面抗原1的融合复合蛋白,表达出的蛋白经纯化复性后具有免疫反应性。结论ROP2和P30基因重组后,在原核表达载体中表达出的蛋白经纯化复性后具有活性,获得纯化和复性的弓形虫ROP2和ROP2P30的高效表达产物,为弓形虫病的诊断和疫苗研究奠定了基础。
2006&Vol. 22&(06):&538-543
郝文波;孙晓敏;王萍;陈白虹;徐伟文;李明;
噬菌体随机环7肽库筛选恶性疟原虫EBA-175的结合肽
目的从噬菌体随机环7肽库中筛选恶性疟原虫EBA175抗原的结合肽。方法以EBA175重组蛋白为靶筛选噬菌体随机环7肽库,通过ELISA、竞争抑制试验、Westernblot等方法鉴定获得的噬菌体短肽与EBA175之间的结合特性。对阳性克隆进行DNA序列测定,推导其氨基酸序列并与GPA氨基酸全序列进行了同源性比较。结果获得9株可与EBA175结合的阳性噬菌体克隆,序列分析显示为3种氨基酸序列,P1(MLLITIR)、P2(TRKLPRT)、P3(KRLMPLK)。其中出现频率最高的P1序列中LLI与EBA175的受体GPA的108110位氨基酸同源。竞争性ELISA显示展示序列P1的噬菌体能竞争抑制EBA175与其单抗的结合。结论获得了可与EBA175特异结合的阳性噬菌体短肽,·LLI··几位氨基酸可能对EBA175与GPA的结合起重要作用。
2006&Vol. 22&(06):&544-546
翁文川;杨汝德;焦红;胡锋科;许龙岩;凌莉;
免疫磁分离-荧光PCR应用在肉类单增李斯特氏菌的检测
目的建立适用于肉类产品中单核增生李斯特氏菌的荧光PCR检测方法。方法根据单增李斯特氏菌溶血素基因hlyA,设计合成引物和荧光探针,结合免疫磁珠筛选,选择简便的DNA提取方法,建立适用于检测肉类制品中单增李斯特氏菌的荧光PCR方法。对该方法进行特异性、灵敏度及模拟样品检测效果的研究。结果对20株不同菌属的标准菌株和30株野生李斯特氏菌菌株,及混合菌液的检测,结果显示该方法具有良好的特异性。对染菌模拟样本的检测结果表明,经过24h增菌,该方法的检测低限为1cfu/g,整个流程只需27h。结论免疫磁分离荧光PCR方法为快速、简便和准确检测肉类制品中单增李斯氏菌提供了一个新的途径。
2006&Vol. 22&(06):&547-550
张强;高正琴;周育森;贺争鸣;吴昊;
SARS病毒核蛋白的原核表达及间接ELISA的初步建立
目的探讨SARS冠状病毒(SARS CoV)重组核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein,N蛋白)的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法通过RT PCR获得SARS CoV核衣壳蛋白N基因,将N基因克隆至pPET32a+,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。采用凝胶电泳回收纯化。结果经Western blot,动物免疫试验证实N蛋白为SARS CoV特异性蛋白,可刺激机体产生相应的抗体,具有良好的抗原性和免疫原性。在此基础上,建立间接ELISA法检测36名健康人血清及地坛和佑安医院急性期和恢复期病人血清,以健康人A450均值的2.1倍为阳性临界值,结果发现地坛医院20名急性期病人IgG阳性率为100%,佑安医院24名病人IgG阳性率为95.8%,两医院恢复期病人IgG阳性率均为100%。结论SARS CoV重组N蛋白抗原具有较强免疫原性,在SARS血清学诊断试剂研制方面具有重要价值。
2006&Vol. 22&(06):&551-554
任艳;李红梅;魏艳丽;张显升;张大伟;姚碗生;杨合同;
重组犊牛前胸腺素-α对小鼠脾细胞增殖的影响
目的为评价重组犊牛前胸腺素α(prothymosinα,ProTα)的活性。方法用MTT法检测了ProTα对BALB/c鼠脾细胞的增殖作用。结果与结论无论加或不加ConA,20μg·ml-1以上浓度药品组均能对脾细胞产生增殖作用,且随着浓度增加,增殖率呈上升趋势,至40μg·ml-1时,增殖率达到76.0%。当浓度低于20μg·ml-1时,重组ProTα无明显的增殖作用。重组ProT a与进口的阳性对照品增殖活性间没有显著差异,而且略高于后者,该项研究为今后药理药效研究及开发应用提供了有力的支撑。
2006&Vol. 22&(06):&555-557
刘军;冯辉;郑丽;凌静;朱晓彤;曹雅明;
我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点分析
目的明确我国疟疾流行区间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点。方法收集疟疾单纯流行区浙江、湖北两省间日疟患者血样,制备血样干滤纸片;提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48基因;Sanger双脱氧链终止法测序并分析。结果成功扩增12例间日疟原虫分离株Pvs48全长基因。与间日疟原虫标准株SalⅠ比较,检测出6个错义突变位点,导致6处氨基酸置换和6种基因型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48具有保守性。
2006&Vol. 22&(06):&558-560
谢红艳;胡旭初;徐劲;吕刚;陈守义;魏全德;李艳文;吴忠道;余新炳;
华支睾吸虫Rho GTPase样基因的识别、克隆表达与免疫鉴定
目的对新发现的华支睾吸虫(Clonorchissinensis)的RhoGTPase样基因进行克隆、表达和免疫学鉴定。方法将用生物信息学方法识别的华支睾吸虫cDNA质粒文库中的RhoGTPase样基因的完整编码序列(CDS)克隆到原核表达质粒pET-30a(+)中,在大肠埃希菌BL21中用IPTG诱导表达。表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和蛋白印迹(Westernblotting)进行分析,并用镍离子金属螯合亲和层析柱进行纯化。结果华支睾吸虫的Rho GTPase样基因的完整阅读框含576个碱基,编码192个氨基酸,理论分子量为21.7kDa。PCR、双酶切及DNA测序的结果均表明重组质粒pET-30a(+)-RhoGTPase构建成功。SDS PAGE结果表明RhoGTPase基因在大肠埃希菌BL21中获得了高效表达,重组蛋白可被感染华支睾吸虫的猫血清识别,表明其具有免疫反应性。亲和层析获得了高纯度的蛋白。结论华支睾吸虫的RhoGTPase样基因可在原核系统中获得有免疫学活性的高效表达,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。
2006&Vol. 22&(06):&561-564
薛峰;陈浩;彭宜;仇保丰;刘文博;刘秀梵;
盐城国家级珍禽自然保护区野鸭、天鹅、丹顶鹤禽流感监测分析
采用常规的血清学试验对江苏省盐城国家级珍禽自然保护区野鸭、燕鸥、天鹅、丹顶鹤中流感病毒的带毒状况和相应的禽流感抗体进行监测。共采集咽拭子和泄殖腔标本144份,在野鸭、丹顶鹤中分离鉴定出H4、H3、H6、H9、H5等亚型禽流感病毒13株,分离率为9.0%,其中泄殖腔标本阳性率为12.5%。野鸭血清中H4、H9、H6、H11等抗体呈阳性,燕鸥血清相应抗体检测为阴性,而天鹅由于免疫过AIVH5、H9油乳剂灭活苗,AIVH5、H9抗体平均效价均较高,同样免疫过的丹顶鹤AIVH5抗体却一直呈阴性。
2006&Vol. 22&(06):&565-567
柳建发;Kusel JR;
环孢素A体外抗FITC-ConA标记的曼氏血吸虫童虫的作用
目的探讨环孢素A体外抗FITC ConA标记的曼氏血吸虫童虫的作用以及虫体表膜通透性。方法人工制备曼氏血吸虫童虫,使用FITC ConA进行标记,环孢素A体外作用,荧光显微镜下观察并摄照。结果童虫损伤或死亡,虫体逐渐从淡蓝色变成亮蓝色,虫体可见多个亮蓝色小点,虫体表面损伤。结论环孢素A能增加童虫表膜流动性。
2006&Vol. 22&(06):&568-570
吴忆;刘军;冯辉;马世红;曹雅明;
CD4~+CD25~+调节性T细胞在约氏疟原虫感染小鼠应答早期中的作用
目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期的作用及意义。方法用约氏疟原虫(致死型)感染DBA/2和BALB/c小鼠,计数红细胞感染率;在感染后第0d、3d、4d、5d和6d提取脾细胞应为,流式细胞术检测两种小鼠感染不同时间脾细胞悬液中CD4+T细胞和CD4+CD25+T细胞百分含量;ELISA法检测脾细胞培养上清IFNγ、IL10和TGFβ1水平。结果DBA/2小鼠的IFNγ水平在感染后第3d迅速升高后缓慢下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数仅在感染后第5d出现有意义的升高(P<0.05),而IL10水平和CD4+T细胞数量都无明显改变。BALB/c小鼠的IFNγ水平在感染后第3d出现有意义的升高后迅速下降(P<0.01),CD4+CD25+T细胞数在感染后第3d开始明显升高,于感染后第5d出现下降(P<0.05),而IL10水平自感染后第3～6d持续维持高水平(P<0.05),CD4+T细胞数量于感染后第6天明显下降(P<0.05)。结论CD4+CD25+调节性T细胞在致死型约氏疟原虫感染BALB/c小鼠早期可能通过抑制性细胞因子IL10发挥免疫抑制作用。
2006&Vol. 22&(06):&571-574
郑南才;黄宝明;徐劲;黄善盛;胡旭初;陈金中;余新炳;
华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性位点氨基酸点突变对酶活性和热稳定性影响
目的为了研究华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸的点突变对酶活性和热稳定性的影响,进一步了解蛋白分子结构与功能的关系。方法利用PCR技术,对胞浆苹果酸脱氢酶H195及其周围氨基酸基因进行点突变,与pQE30质粒连接构建重组质粒,转染大肠杆菌后表达蛋白,测定酶活性和圆二色性,测定不同温度时222nm圆二色性改变,确定不同点突变蛋白的热稳定性。结果H195被异亮氨酸、半胱氨酸和酪氨酸置换后,酶活性下降了100倍以上,但随着H195被不同氨基酸置换和H195周围氨基酸被置换情况的不同,不同突变株表达的蛋白酶活性差别很大,H195/I195和H195/Y195突变株表达的蛋白酶活性明显高于H195N197/I195Y197和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白酶活性;H195/Y195突变株表达的蛋白与未突变蛋白的二级结构差异明显;H195/Y195和H195T198/C195M198突变株表达的蛋白热稳定性明显降低,tm值分别为63.5℃和64℃,比Cs cMDH的tm值分别下降了4℃和3.5℃。结论活性中心H195的点突变可导致华支睾吸虫胞浆苹果酸脱氢酶活性的明显下降,而且H195被不同的氨基酸置换后可导致酶活性下降程度的不同,H195周围氨基酸被替换成具有形成氢键或二硫键的氨基酸后,导致酶活性下降更为明显;H195及其周围氨基酸的突变可导致蛋白质二级结构的改变和热稳定性的不同程度下降。
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