液相色谱压力很不稳定，怎么办啊，求助各位大_百度知道
液相色谱压力很不稳定，怎么办啊，求助各位大
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看流动相是否有气泡，是否有杂质。要过滤脱气，现配现用；注意柱温变化；管路是否有堵塞，处理在线过滤器。
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高效液相常见问题
为了方便大家阅读，现将月旭公司和仪器信息网液相色谱[/url]版联合举办的，第33期在线讲座------液相色谱柱使用疑难问题解析中，板友提问和plexu版主的回答汇总如下）1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。反冲后是正者用，还是反着用。具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因?我用的是离子交换柱.
答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？
3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？
答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？
答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
5、氨基柱在进酸性样品时，很伤柱子，如使用一段时间后，柱效降低，峰形改变，如何恢复？
答：氨基柱测酸性样品，应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
6、色谱柱的技术都有哪些？比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里？
答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。
国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。另外，对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。
7、色谱柱技术的差距在哪里？
答：液相色谱柱装填实际上是有一定技巧和程
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…淮水‖木鱼…【求助】死时间与保留时间有什么区别，不懂
死时间与保留时间有什么区别，不懂，请指教！啊
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stephanie1984
死时间可以看做是在色谱柱中完全没有保留的物质的出峰时间，即溶剂峰的出峰时间。保留时间是从进样开始到出现组分峰的最大值时的时间，就是死时间+相对保留时间，即出峰时间
这个最清楚。tarenss 发表:
死时间是指不能在色谱柱上“挂住”直接流出的组分的保留时间，保留时间是指物质通过色谱柱分离后流出时的不同时间，即保留在色谱柱上的时间。ws_shi 发表:死时间与保留时间有什么区别，不懂，请指教！啊
终于有我懂的了，大家都告诉你了
liu820422 发表:死时间:不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间保留时间:组分从进样到出现峰最大值所需的时间
zhx_fs_ln 发表:死时间应该是在色谱系统中没有保留性的物质（一般指载气和载流）通过系统所需时间。保留时间是被测组分通过系统所需时间。
死时间:不被固定相滞留的组分,从进样到出现峰最大值所需的时间保留时间:组分从进样到出现峰最大值所需的时间
死时间应该是在色谱系统中没有保留性的物质（一般指载气和载流）通过系统所需时间。保留时间是被测组分通过系统所需时间。
从进样开始至每个组分流出曲线达到极大值所需的时间称为保留时间用TR表示。从进样开始到惰性组分从柱中流出呈现浓度极大值的时间称为死时间，用TM表示。
dickwang2008
液相中的死时间就是进样甲醇出峰的时间；保留时间就是待测物经过色谱柱分离后的出峰时间。ws_shi 发表:死时间与保留时间有什么区别，不懂，请指教！啊
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