干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质.科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入山羊的DNA中.培育出羊乳腺生物发生器.使羊乳汁中含有人的干扰素.回答下列问题:(1)为保证人干扰素基因能够在受体细胞中稳定存在并表达.需要先构建基因表达载体.在此过程中需要用到的工具酶有 .基因表达载体结构至少包括人干扰素基因. . 题目和参考答案——精英家教网——
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干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质，科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入山羊的DNA中，培育出羊乳腺生物发生器，使羊乳汁中含有人的干扰素。回答下列问题：（1）为保证人干扰素基因能够在受体细胞中稳定存在并表达，需要先构建基因表达载体，在此过程中需要用到的工具酶有____。基因表达载体结构至少包括人干扰素基因、____、____和终止子等部分。（2）基因表达载体通常用____法导入山羊的____细胞中。然后将该细胞送入母体内，使其生长发育为转基因动物。（3）检测人干扰素基因是否导入受体细胞的染色体DNA的方法是________________。此转基因山羊只有乳腺细胞中产生了人干扰素，这是因为____的缘故。（4）用此方法生产干扰素的优点有____。
（1）限制性内切酶和DNA连接酶 标记基因 启动子（2）显微注射 受精卵（或胚胎干细胞）（3）DNA分子杂交 基因选择性表达（4）直接从羊的乳汁中提取到干扰素且产量高
科目：高中生物
来源：2010年福建省泉州一中高二下学期期中考试生物卷
题型：综合题
（10分）干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入羊的DNA中，培育出羊乳腺生物发生器，使羊乳汁中含有人体干扰素请回答：（1）科学家将人的干扰素基因与乳腺蛋白基因的______________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的___________细胞中，然后，将该细胞送入母体内，使其生长发育成为______动物。（2）人体干扰素基因之所以能“插入”到羊的DNA内，原因是_________________________。（3）请在下框中画出某DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图。（4）如何检测和鉴定人的干扰素因素已被成功导入羊体内？请写出两种方法： ________________________、________________________。
科目：高中生物
来源：2010年福建省高二下学期期中考试生物卷
题型：综合题
（10分）干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入羊的DNA中，培育出羊乳腺生物发生器，使羊乳汁中含有人体干扰素请回答：（1）科学家将人的干扰素基因与乳腺蛋白基因的______________等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的___________细胞中，然后，将该细胞送入母体内，使其生长发育成为______动物。（2）人体干扰素基因之所以能“插入”到羊的DNA内，原因是_________________________。（3）请在下框中画出某DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图。（4）如何检测和鉴定人的干扰素因素已被成功导入羊体内？请写出两种方法：&________________________、________________________。&
科目：高中生物
来源：2012届河南省高二下学期期中考试生物试卷
题型：综合题
（13分）干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入牛的基因组中，培育出的奶牛在乳汁中含有人体干扰素。下图1是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，图2是图1中A阶段部分过程。请分析回答：（1）利用基因工程可以获得转基因牛，从而改良奶牛的某些性状。基因工程的四个基本操作步骤是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&、基因表达载体的构建、&&&&&&&&&&&&&&&&&&&和&&&&&&&&&&&&&&&&&&。若要获得的转基因牛分泌的乳汁中含有人干扰素，则所构建的基因表达载体必须包括：某种牛乳腺分泌蛋白基因及其启动子、&&&&&&&&&& 、＿＿＿＿& 、＿＿＿＿& 和复制原点等。将该基因表达载体导入受体细胞所采用的方法是＿＿＿＿＿（显微注射法、农杆菌转化法），为获得能大量产生人干扰素的转基因牛，该基因表达载体应导入的受体细胞是＿＿＿＿＿（受精卵、乳腺细胞）。&(2) B操作指&&&&&&&&&&&&&&。A应保证发育到&&&&&&&&&&&&&&&&阶段，才能进行B操作。(3)为同时获得多个完全相同的子代个体，可在进行B操作之前进行________________。(4)除了按上述培育转基因牛的方法来生产干扰素外，人们还提出了通过分离效应T细胞并进行体外培养让其大量增殖，来生产大量干扰素的设想。请你运用细胞工程的原理，提出一个简单而可行的设计思路：&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&。(2分)&
科目：高中生物
来源：2010年陕西省西安地区高二下学期期中试题生物卷
题型：综合题
干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入羊的DNA中，培育出羊乳腺生物发生器，使羊乳汁中含有人体干扰素。请回答：（1）科学家将人的干扰素基因与乳腺蛋白基因的＿＿＿＿＿等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的＿＿＿＿＿细胞中，然后，将该细胞送入母体内，使其生长发育成为＿＿＿＿＿动物。（2）人体干扰素基因之所以能“插入”到羊的DNA内，原因是＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（3）请在下框中画出某DNA片段被切割形成黏性末端的过程示意图。（4）如何检测和鉴定人的干扰素因素已被成功导入羊体内？请写出两种方法：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿、＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。（5）为了使T淋巴细胞在体外产生大量的干扰素，有人进行了实验，可是当将T淋巴细胞在体外培养繁殖了几代后，细胞分裂就停止了。请你用细胞工程的方法，以小鼠为实验对象，提出一个既能使T淋巴细胞在体外培养繁殖，又能获得大量小鼠干扰素的实验设计简单思路: ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿&
科目：高中生物
来源：学年海南省嘉积中学高二下学期质量检测（一）生物试卷
题型：综合题
干扰素是能够抑制多种病毒复制的抗病毒物质。科学家利用基因工程技术从人的T淋巴细胞中提取干扰素基因转入牛的基因组中，培育出的奶牛在乳汁中含有人体干扰素。下图1是利用多种生物工程技术获得转基因牛的基本操作流程，图2是图1中A阶段部分过程。请分析回答：(1)为获得更多的卵母细胞，通常给供体母牛注射________________，在体外牛的精子获能常采用&&&&&&&&&&&&&&。(2)为了能确定目的基因已经导入到受精卵，相应的载体需要有&&&&&&&以便于进行检测。(3) B操作指&&&&&&&&&&&&&&。A应保证发育到&&&&&&&&&&&&&&&&阶段，才能进行B操作。(4)为同时获得多个完全相同的子代个体，可在进行B操作之前进行________________。(5)用这种方法生产药物与工厂化生产药物的优越性在于________________________。这类的转基因动物被称为________________________。(6)除了按上述培育转基因牛的方法来生产干扰素外，人们还提出了通过分离效应T细胞并进行体外培养让其大量增殖，来生产大量干扰素的设想。请你运用细胞工程的原理，提出一个简单而可行的设计思路：&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&。(2分)
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湖南省炎德·英才大联考长郡中学2018届高三月考试卷（四）生物试题.doc
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α干扰素在牛转基因细胞和核移植胚胎中的表达与功能研究
【摘要】：乳房炎和口蹄疫是危害奶牛养殖业两种严重的疾病，本研究旨在运用转基因克隆技术在牛的乳腺中特异表达乳铁蛋白肽以抵抗乳房炎，全身细胞内表达α干扰素以抵抗口蹄疫，研制同时抵抗细菌性和病毒性疾病的转基因奶牛新品种。
本研究构建了山羊β-酪蛋白启动子调控的牛乳铁蛋白肽基因和CMV启动子调控的人α干扰素基因（切除信号肽）的载体，以neo基因为筛选基因，EGFP为标记基因。通过酶切鉴定，分别得到10kb和7.9kb+2.1kb的条带，与预期一致，表明载体构建正确。
本研究采用人工授精妊娠40天的高产荷斯坦奶牛胎儿，通过酶消化法和贴壁法建立牛胎儿成纤维细胞系。运用FuGENE脂质体和Amaxa Nucleofector电转法转染，G418筛选后得到转基因细胞克隆，扩大培养后得到转基因细胞系。针对α干扰素基因和乳铁蛋白肽基因设计两对引物对两株转基因细胞进行PCR鉴定，两株转基因细胞分别扩增出550bp和450bp左右的目的条带。最后用Western blot检测到转基因细胞中α干扰素蛋白的表达。
将水泡口炎病毒（VSV）感染转干扰素基因细胞，结果表明转干扰素基因细胞与对照组相比能显著抑制VSV病毒的增殖；并且感染VSV的转干扰素细胞能诱导干扰素诱导的经典抗病毒途径中的三个关键基因PKR、OAS和P53基因的表达，启动细胞凋亡机制（凋亡比例77.03%）以抵抗病毒的增殖。
运用无透明带融合法制备了转基因克隆胚胎，与显微注射法相比能显著提高融合率。运用PCR在克隆胚胎中检测到了目的基因，运用免疫荧光检测到转基因克隆胚胎中α干扰素蛋白的表达。比较了两种最常用的细胞同期化处理方法血清饥饿和接触抑制对核移植效率的影响，二者无显著差异；比较了两种激活方法A23187+6-DMAP和离子霉素+6-DMAP，两者的核移植效率无显著差异；比较了转基因克隆和非转基因克隆胚胎的发育和妊娠率，均无显著差异。胚胎移植受体牛46头，妊娠5头，流产3头，出生2头。在出生转基因克隆牛的组织中观察到荧光，通过PCR检测到出生的转基因克隆牛携带有目的基因。建立了转基因牛耳成纤维细胞系，并进行了再克隆。
【学位授予单位】：中国农业科学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：S858.23
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