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作者：爱康得生物医学技术（苏州）有限…
来源：爱康得生物医学技术（苏州）有限公司 Paul Hsu
关键词：肿瘤免疫,CAR-T,CAR-T,细胞治疗
持久性较差。目前普遍同时输注CD4+与CD8+T细胞，很可能是因为CD4+T细胞提供生长因子和其他信号以维持输注的CTL的功能和活性。另外，在小鼠中的研究有时候会误导处理人源T细胞的方法。例如，由于受到退化的影响，人源T细胞的复制能力有限，在小鼠模型中却没有这个特点，而人CD4+细胞比小鼠CD4+细胞具有更强的细胞毒性。现在的问题是是否需要利用流式细胞术或其他的方法分离细胞亚群并进行独立培养。CD4+和CD8+T细胞最佳细胞培养条件不同，这因为CD4 +和CD8 + T细胞信号转导途径不一样。此外，细胞分离法可去除对效应T细胞疗法存在潜在危害的Treg细胞。况且，需要从输注的T细胞中去除细胞，对白血病患者而言，这尤其具有挑战性。然而，在GMP生产中有些技术使细胞制备成本大大增加，如通过流式细胞术或磁珠分选细胞可使成本迅速增加10000美元甚至更多。
与上述问题相关，输注处于什么分化阶段的T细胞最佳？对小鼠和人类的研究结果表明，naive或中心记忆细胞是最好的。对只有少量naive T细胞的老年人而言，如何获取这类细胞是个挑战，且化疗或其他疾病通常会进一步放大难度。从我们采用CD19 特异性CAR-T治疗白血病患者的数据中表明，扩增能力是预测成功的最重要的生物学标志。一种方法是在全血淋巴细胞中分离中心记忆或naive T细胞。与此相反，一个更简便粗放的方法是使用大量T细胞在特定培养条件下维持naive或中心型记忆细胞的扩增。后一种方法基于特异性共刺激信号可以促使细胞定向分化的原理。如CD28的刺激可使CD4细胞保持中心记忆细胞状态，4-1BB可以促使CD8中心记忆细胞的增殖。相反ICOS共刺激分子可以促使和稳定Th17细胞的生长。利用T细胞的干细胞样特性是非常有希望的，Wnt信号通路的激活可以促进记忆的增殖。
是否存在统一的最佳细胞制品配方？抑或针对不同的需要不同的配方？
CD19 CAR-T治疗B细胞恶性肿瘤显示出的惊人且意想不到的疗效能否出现在治疗实体瘤患者身上还未可知。我们发现CAR-T在体外杀灭低分化腺癌细胞的效率类似于白血病。然而，仍然有待进一步确定是否需要修改细胞组成类型或细胞培养条件，用来优化实体瘤患者体内改造的T细胞的转运和持久性。与恶性血液疾病的散在分布不同，采用细胞工程的方法优化T细胞向实体瘤块转运，如成胶质细胞瘤和胰腺癌，可能会有所不同。已提出一种方法是利用靶向策略，如采用基因工程的手段，使用各种趋化因子或趋化因子受体促使T细胞向肿瘤部位富集。其他方法包括对或患者进行预处理，如进行放疗，注射溶瘤以及在瘤内直接注射T细胞。
最优的共激活结构域在CD4+和CD8+ T细胞内是一样的吗？
以往研究表明不同亚群的T细胞培养条件是不同的。这就提出一个问题，不同淋巴细胞亚群的T细胞是否需要不同的信号分子进行武装呢？为着手解决这个问题我们对CD4+和CD8+T细胞胞内区CD28， 4-1BB和ICOS进行了评估。在异种移植腺癌的人源化小鼠中，我们发现采用ICOS信号域的CD4+ CAR-T细胞更为优越，而CD8+T细胞常优选4-1BB。如此增加细胞制备的复杂度是否能使临床实验受益尚有待进一步确定。此外，最佳的T细胞亚群比例和信号分子的构造在不同的肿瘤微环境中很可能会有差异。比如在一些临床前模型中改造的Th17细胞比Th1细胞更优越。
生存与毁灭：自杀结构能否减弱非靶向引起的毒性？
使用改造的T细胞最大的不确定性是利用生物合成技术诱导的新的、增强的细胞效应是否会引发意外的脱靶毒性。CAR-T细胞的非靶向毒性和TCR细胞的脱靶毒性被格外关注。有多种方法可以缓解这些问题。我们发现利用编码CAR的mRNA转染T细胞，限制CAR仅在转染T细胞中表达，对评估出现的直接毒性有帮助。当出现毒性反应，停止细胞输注，毒性会迅速减弱。研究人员也提出了许多诱导基因修饰T细胞凋亡的方法。这些方法很可能都会被整合，以便按需清除T细胞，满足严格的安全需求。
基于正在进行的试验，表达CARs和TCRs的T细胞已经为广泛的商业应用准备就绪。华尔街的资源正推动这个曾因投资不足而被限制的领域的进步。在输注的T细胞中引入或删除基因，提供了能克服免疫抑制微环境的新细胞制品，并且最后可能不需要使用免疫检查点封闭抗体。ACT先进的基因工程技术的到来，将会使利用合成生物学原理进行癌症、慢性感染和自身免疫性疾病的治疗取得显着进展。（）
英文原文：Chimeric Antigen Receptor- and TCR-Modified T Cells Enter Main Street and Wall Street
原文作者：David M. Barrett
转载请标明出处： Paul Hsu原创编译
爱康得生物医学技术（苏州）有限公司，是一家专注于治疗领域高新技术开发及其产业化的生物医学公司。核心团队由多名来自如M.D.Anderson、Unicersity of California、University of Oklahoma、Wollongong University和苏州大学等国内外著名高校的抗体工程专家、专家、病毒学专家、分子生物学家、临床医生以及具备丰富企业管理和资本运作的管理人员组成。公司技术团队已经掌握CAR-T核心技术，可为全球科研工作者和医生提供成套CAR-T科研服务，可在短时间内为客户构建具有功能的CAR-T细胞。
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&11.7 上海
本次会议将聚焦CAR-T技术发展的最前沿，汇集国内CAR-T领域的著名专家、团队带头人、一线临床医生共同商讨CAR-T技术研究和应用的最新动态，促进学术交流，打通科研与临床之间的通道，紧跟国际研究动态，发挥我国临床资源丰富的优势，推动CAR-T技术更好、更快地发展。</P&&&[2]&
(责任编辑：yixin.zhang)
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中国的市场的确存在很大的隐患，干细胞行业是个专业性要求较高的行业
个体化医疗是未来医学研究与应用的趋势，而个体化治疗的关键在基于生物分子标志物的诊疗策略
中国疫苗市场的巨大潜力，吸引了世界排名最领先的跨国疫苗制造巨头前来淘金。CAR-T细胞获得
& & & &用于转染的T细胞来源于患者的外周血未经筛选的单个核细胞，这些细胞的表型各异、分化状态也不同。比如，CD8+ T细胞的发育经历初始T细胞、T记忆性干细胞、中心性记忆T细胞、效应性记忆T细胞、终末分化效应T细胞的过程。爱康得生物医学技术有限公司通过免疫磁珠、多色流式等方法可以筛选出特殊类型的效应细胞。精确地分离和检测潜在最有效的T细胞亚群，用少量的细胞达到最佳的治疗效果，将会提高临床应用的安全性。&&The phenotype of naive, memory, and effector subsets is shown and the linear pathway of differentiation from a naive T cell is based on recent data from fate mapping studies.效应细胞是特异性过继免疫细胞治疗的主体。其抗肿瘤有效性较大程度的依赖于效应细胞的选择。实验证明，CAR修饰的低分化T细胞亚群在临床过继输注后展现出了更强的扩增及抗肿瘤效应，且整体临床反应较好；而随着T细胞分化，它们的增殖能力和抗肿瘤活性也在不断地下降。在抗原暴露后，固有T细胞可被诱导分化为效应记忆细胞(TEM)或中枢记忆细胞(TCM)。虽然TEM在体外细胞毒性和增殖能力方面优于TCM，但中枢记忆细胞(TCM)因其在体内更强的分化能力和可塑性在输注后细胞毒性效果更强，并能建立长效的免疫记忆应答。在一项灵长目动物试验中，来源于TCM(CD62L+)的CMV特异CD8+T细胞克隆建立了比TEM(CD62L-)更为持久的T细胞记忆。还有研究表明与效应记忆细胞或中枢记忆细胞相比干细胞记忆性T细胞（TMSC）具有更强的调节、抑制肿瘤进展的作用，基因工程改造TCM、TMSC均具有较强的扩增和抗肿瘤效应，相关的临床试验也正在进行中。CAR修饰的T细胞体外扩增时，CD4+T细胞与CD8+T细胞共同培养对细胞毒效应T细胞的大量制备有帮助；树突状细胞与T细胞共培养对Naive T细胞到效应/记忆T细胞转化、细胞因子分泌（Th1/Th2）有重要作用。CAR基因修饰的靶细胞可以是病毒特异性的，也可以是非病毒特异性的，由于非病毒特异性的细胞常缺乏适当的共刺激分子，在体内存活时间、抗瘤活性不如病毒特异性T细胞。病毒（CMV或EVB）特异性的T细胞经过CAR修饰后在体内试验中表现了非常强的扩增能力：实验组将靶向于GD2的嵌合抗原受体基因导入EVB病毒特异性的CTL中治疗神经母细胞瘤，而对照组将其导入非病毒特异性的CTL中治疗神经母细胞瘤，结果显示实验组在体内持续时间、细胞毒作用及肿瘤消退方面优于对照组。原代T细胞分离服务如下：根据客户需求的T细胞亚群，爱康得选择适用的免疫细胞分离方法，从人外周血中分离T细胞，并使用FACS检测相应的细胞亚群特定表面分子表达水平检测。需要客户提供的材料：无交付内容：1*10^7 个T细胞QC标准：FACS检测细胞表面标志物周期：2-3周重组CAR-T细胞构建重组CAR-T细胞获得服务如下：用CAR慢病毒转染分离的T细胞，并FACS检测重组CAR-T细胞表面CAR分子的表达水平。需要客户提供的材料：荧光标记或其他标签标记的抗原蛋白交付内容：1*10^7 个CAR-T细胞及细胞培养条件QC标准：FACS检测CAR分子的表达，细胞感染表达率&60%周期：6-10周
爱康得生物公司的长期目标定位于肿瘤精准医疗技术开发及临床转化。核心团队来自国内外著名高校如University of Oklahoma、Wollongong University等，在抗体工程、免疫学、病毒学、分子生物学、临床医学转化等领域具备丰富的经验。
热线电话 1 微信公众账号　　初始T细胞(naive T cell，Tn)，也称作未致敏T细胞，在胸腺中发育成熟迁移至外周淋巴组织中（如脾脏、淋巴结）。其未接触抗原刺激前处于相对静止状态，在胸腺中发育的一类带有CD4、TCR/CD3、CD28、CD62L、CCR7等表面分化抗原的T细胞。其通过抗原刺激或树突状细胞（Dendritic cell，DC）的作用，可进一步分化成Th1细胞、Th2细胞、、调节性T细胞（Treg）、效应T细胞等。
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【求助】脾脏中分离的CD4+T
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这个帖子发布于5年零212天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
有个问题想请教一下从脾脏中分离出的CD4+T细胞全部是naive的？还是有Th1、Th2、Th17等等（我要分离对照组和应激组的）
不知道邀请谁？试试他们
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是所有CD4+细胞包括：naive CD4、Th1、Th2、Th17等等。
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那要看是什么小鼠，如果是正常小鼠，只有naive T和nTreg。
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我用的是C57BL/6小鼠，将正常组和模型组的脾脏取出后，分离CD4+ T 细胞（阴性选择），用抗CD3 和CD28刺激后ELISA法检测上清的细胞因子，包括Th1、Th2的细胞因子，两组的细胞因子水平是不同的。有以下几个疑问：1）从脾脏里分离的CD4 T 细胞是什么类型的？2）抗CD3 和CD28抗体是用来刺激原始T 细胞活化的，在没有加其他细胞因子刺激的情况下，为什么两组的细胞因子水平不同，难道是这两种抗体也可以作用于Th1和Th2细胞刺激他们分泌细胞因子吗（前提是两组的分离出来的CD4+T 细胞组成不同，有不同比例的Th1和Th2）？
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