青岛海博生物为您提供种类齐全的微生物培养基产品及相关技术服务！
海博商城全新改版，更丰富的产品内容，更美观清新界面，微生物培养基网上订购平台欢迎您的访问。
600多种微生物培养基配方、原理、用法、质量控制，涵盖所有常检细菌及其他细菌。
> ->->大肠菌群平板计数法检验
大肠菌群平板计数法检验
录入时间: 11:34:51
来源：海博生物
选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1 mL。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
及时将15 mL～20 mL冷至46 ℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL～4 mLVRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
平板菌落数的选择
25 g（mL）样品+225 mL 稀释液，均质10 倍系列稀释选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液，接种VRBA 平板选取菌落数在15 CFU～150 CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm或更大。
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，36 ℃±1 ℃培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
大肠菌群平板计数的报告
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以9.3中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1 mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105 CFU/g（mL）。
版权所有 青岛高科技工业园海博生物技术有限公司查看: 9723|回复: 39
有关大肠菌群平板计数法 ，求记录模板
在线时间1184 小时
阅读权限90
签到天数: 823 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
食坛知名, 积分 6052, 距离下一级还需 3948 积分
& &&&& & 2010版大肠菌群平板计数法已施行好多年了，到今天我再来问这些问题，应该有更多的坛友能回答了吧，求解。
& && & 1.如果VRBA平板上都没有长菌，是不是就不需要再接种BGLB肉汤管了呢？
& && & 2.如1所述，产品可以报告成＜10，对吗？
& && & 3.如果VRBA平板上的数值都不在15-150CFU之间。比如说都在15以下，还用做接种BGLB肉汤管吗？还是可以出报告了？
& && &&&4.如果VRBA平板上的数值都不在15-150CFU之间。比如说都在150以上，还用做接种BGLB肉汤管吗？还是直接报告不合格呢？
& && && &5.如果有4个管的稀释度都在15-150CFU之间，请问是接种40根BGLB肉汤管吗？还是只做10个BGLB肉汤管？
& && && & 6.如果有4个管的稀释度都在15-150CFU之间，如果是接种40根BGLB肉汤管，那么结果怎么计算，怎么报告啊？
& && && && &唉，感觉好复杂呢，大家有相应记录模板吗？可不可以分享出来借鉴一下呢，谢谢！
& && && && &&&望高手释疑，欢迎大家积极讨论。
在线时间1184 小时
阅读权限90
签到天数: 823 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
& & 我的帖子怎么没人看呢？后来才想起今天是周末呢。
在线时间491 小时
阅读权限50
签到天数: 370 天[LV.9]以坛为家II
主题帖子积分
求高人指点，我也想知道。
(建筑队-小酷)
在线时间2456 小时
阅读权限90
签到天数: 761 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
没有长怎么挑菌继续进行BGLB实验了？不用。BGLB只是验证那个菌是否是大肠。对于你自己怀疑的菌可以挑来做一下实验，然后数大肠的时候更清楚哪些是哪些不是吧。
在线时间1184 小时
阅读权限90
签到天数: 823 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
没有长怎么挑菌继续进行BGLB实验了？不用。BGLB只是验证那个菌是否是大肠。对于你自己怀疑的菌可以挑来做一 ...
& && &&&如果什么都没长呢，应该不用再验证，可以直接报告小于10了吧？
(建筑队-小酷)
在线时间2456 小时
阅读权限90
签到天数: 761 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
如果什么都没长呢，应该不用再验证，可以直接报告小于10了吧？
剪影的你轮廓太好看，凝住眼泪才敢细看！
在线时间444 小时
阅读权限50
该用户从未签到
主题帖子积分
样 品 制 备& & & & 固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225ml生理盐水的无菌灭菌杯内，进行均质处理。
液体样品：吸取25ml于样品于225ml生理盐水中，混匀。&&
液体样品：直接吸原液检验。
培养温度/时间& & & && && && & ℃& && && &h ；&&每个稀释度各接2皿
& && && && &稀 释 度
典型可疑菌落个数
样品编号& & & & & & & & & & & & & & & & 计数的VRBA
平板菌落数（个）& & & & 证实BGLB产气（个）& & & & 结果 CFU/g（mL）
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
& & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
空白试验& & & &
报告CFU/g（mL）& & & & n=5，c=& &，m=&&，M=& &&&& & & & & & & & & & & & & & & & & & & &
我们的表格
在线时间444 小时
阅读权限50
该用户从未签到
主题帖子积分
不长后续不用做，BGLB证实。
其他低于15，高于150的等同菌落计数情况处理。
在线时间1184 小时
阅读权限90
签到天数: 823 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
样 品 制 备& & & & 固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225ml生理盐水的无菌灭菌杯内，进行均质处理 ...
& & 呵呵，看不到呢
在线时间1184 小时
阅读权限90
签到天数: 823 天[LV.10]以坛为家III
主题帖子积分
不长后续不用做，BGLB证实。
其他低于15，高于150的等同菌落计数情况处理。
& && && & 标准上没说要等于菌落总数的办法计数啊
在线时间444 小时
阅读权限50
该用户从未签到
主题帖子积分
标准上没说要等于菌落总数的办法计数啊
我是说数据处理的方式，你们自己怎么做啊？
在线时间221 小时
阅读权限30
该用户从未签到
主题帖子积分
5.如果有4个管的稀释度都在15-150CFU之间，请问是接种40根BGLB肉汤管吗？还是只做10个BGLB肉汤管？
特想知道这个答案
学习，是为了自由点的活着
食坛知名勋章
食坛知名勋章
十佳新人每年固定
2016魅力人物
2016魅力人物
食坛巨匠勋章
食坛巨匠勋章
食品论坛认证会员
Powered by进出口SN标准微生物检测方法之大肠杆菌和大肠菌群计数方法_文档库
文档库最新最全的文档下载
当前位置： & 进出口SN标准微生物检测方法之大肠杆菌和大肠菌群计数方法
进出口SN标准微生物检测方法之大肠杆菌和大肠菌群计数方法
PCA（标准方法）（M124）
Butterfield`s磷酸盐缓冲液（R11）或同等稀释液（贝类除外）
Kovacs`试剂（R38）
V-P试剂（R89）
革兰氏染色液（R32）
甲基红指示剂（R44）
结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）（M174）
VRBA-MUG琼脂（M175）
EC-MUG培养基（M50）
LST-MUG肉汤（M77）
0.1%蛋白胨水稀释液（R56）
C、MPN法—用于大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的计数
称取50g样品加入高速捣碎杯中，见第1章或现在FDA器械 。冷冻样品在2-5℃解冻(≤18h)，但不要融化。加入450ml 磷酸盐缓冲液，搅拌2分钟，如果样品量小于50g，称取一半样品加入足够体积的无菌稀释液，制成1：10的样品液，在捣碎杯中的液体应完全覆盖刀片。稀释倍数根据大肠菌群对样品的污染情况，用稀释液将样品制成一系列十倍递增的样品稀释液，以30cm幅度于7s内将样品振摇25次（或以器械振摇器震荡）。选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液，每个稀释度接种3管LST，每管接种1ml，以一定的角度，使吸管的尖部在试管壁上停留2-3s，从制备样品匀液至稀释完毕，全过程不要超过15min。
（注意：用5管MPN法检测贝类食品和贝类养殖水）将接种的LST管放置35℃培养，检查和记录在24±2h时倒管内产气的试管，未产气的试管继续培养24h，在48±2h时检查和记录产气情况，对所有产气的试管进行确证试验。
D、MPN法—大肠菌群确证试验
将所有LST肉汤产气管，用接种环接种一环到煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤中。置BGLB试管于35℃培养48±2h，记录所有BGLB肉汤管的产气管数。按BGLB肉汤产气管数，查MPN表（见附录2 ），计数出大肠杆菌的最可能数值。
E、MPN法—粪大肠菌群和大肠杆菌确证试验
从产气LST肉汤管中接种一环培养物到EC肉汤管中（木制接种棒也可以使用）。将所有接种的EC肉汤管放入带盖水浴箱中，45.5℃培养24±2h，检查产气情况。如果不产气，继续培养至48±2h，检查产气情况。按产气管数，查MPN表计数出粪大肠菌群MPN值。继续大肠杆菌分析，按以下F部分进行。EC肉汤MPN方法可用于海水和贝肉类的粪大肠菌群检测。
注意：除水、贝类和贝类养殖水中的粪大肠菌群检测的培养温度为44.5±0.2℃外，其他所有食品中粪大肠菌群的培养温度为45.5±0.2℃。F、MPN法—大肠杆菌的完全测定
进行大肠杆菌完全测定前，轻轻摇匀产气的EC肉汤试管，取产气管的培养物划线接种于伊红美蓝平板（L-EMB），35℃培养18-24h，检查L-EMB平板上有无具黑色中心的有金属光泽或无金属光泽的扁平菌落。挑取5个典型菌落接种到PCA斜面培养基上，35℃培养18-24h，进行进一步检测。
注意：检测5个可疑菌落中任何一个为大肠杆菌，都可以确证EC肉汤管为阳性。因此，并非5个菌落都必须检测。
革兰氏染色：所有为革兰氏染色阴性短杆菌的培养物，都应进行IMVIC生化反应检测和重新接种到LST肉汤进行产气确证试验。
吲哚试验：将PCA斜面纯培养物接种到胰蛋白胨肉汤中，35℃培养24±2h，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml。上层出现明显红色为靛基质阳性反应。
VP试验：将纯培养物接种到MR-VP肉汤中，35℃培养48±2h，以无菌操作称取培养物1ml至13*100mm试管中，加入0.6mlα-萘酚溶液，0.2ml 40%KOH溶液和少许肌酸结晶。振摇试管后静置2h。如出现伊红色，为VP阳性反应。
甲基红试验：在VP试验完后，试管中MR-VP培养物剩余部分继续在35℃培养48±2h；滴加5滴甲基红溶液，培养物变为明显红色为甲基红试验阳性，若变为黄色则为阴性反应。
柠檬酸盐试验：接种纯培养物到Koser’S枸橼酸盐肉汤中清澈液体，避免接种量过量产生浑浊。35℃培养96h，培养物为明显浑浊为阳性反应。发酵乳糖产气试验：接种纯培养物到LST肉汤中，35℃培养48±2h，产气或轻轻摇动试管产生气泡为阳性反应。
结果报告：所有培养物（A）在35℃培养48±2h内发酵乳糖产酸产气（B）革兰氏阴性无芽孢杆菌 （C）IMVIC试验为+ + - -或- + - -为大肠杆菌。再根据EC肉汤中阳性管数（连续3个稀释度）查MPN表（见附录2）计算出每克（毫升）样品大肠杆菌MPN值。
注意：可以选用API20E或VITEK生化分析，鉴定大肠杆菌，替代IMVIC生化试验。
G．大肠菌群固体培养基测定法
按照生产厂家说明制备结晶紫中性红琼脂（VRBA）冷至48℃时备用。样品制备按照以上I.C部分制备。
每个稀释度分别移取2个1ml样品液到2个灭菌平皿中,根据细菌受损和挤压的程度。取10ml冷至48℃的VRBA培养基加入平皿中，小心旋转平皿，将培养基与样品液充分混匀。待琼脂凝固后，再加入5mlVRBA培养基覆盖平板表层，以防止细菌蔓延生长。如果细菌细胞受损严重，需要复苏修复，取8-10ml冷至48℃的胰蛋白胨大豆琼脂，将培养基与样品液充分混匀，在室温中放置2±0.5h，再加入8-10ml冷至48℃的VRBA培养基覆盖平板表层。
把凝固后的平板，35℃倒置培养18-24h，检测乳制品时，放置32℃培养18-24h，用带光源的放大镜下检查平板。选用有25-250个菌落的平板，计数平板上出现的典型大肠菌群，典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。为了确证大肠菌群，从VRBA平板至少挑取10个典型菌落，接种于BGLB肉汤内，35℃培养24h和48h，观察产气情况。
注意：将出现产气的BGLB肉汤管判为大肠菌群阳性。对形成菌膜的阳性管应进行革兰氏染色，以便挑除革兰氏阳性杆菌。每克样品中的大肠菌群数量等于经最后证实为阳性的试管百分比乘以VRBA上的可疑菌落，再乘以稀释倍数。
另外一种方法：大肠杆菌可以与大肠菌群进行区别，在每毫升VRBA覆盖琼脂中加入100ug MUG，经培养后，大肠杆菌在长紫外灯下出现蓝色荧光。（详见LST-MUG部分Ⅱ）
Word文档免费下载：
SN出口食品中大肠菌群、大肠杆菌检测方法 食品微生物检测食品微生物检测隐藏&& 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、 出口食品中大肠菌群、粪...伙伴网 GB 10 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数 1 范围 本标准规定了食品中大肠菌群(Coliforms)计数的方法...测定》 SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》...粪便中多以 典型大肠杆菌为主,而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠...出口食品平板菌落计数 SN/T
食品中大肠菌群和大肠杆菌快 速计数法—PetrifilmTM 测试片 法 GB/T 8 食品卫生 微生物学检验 大肠菌群计数...检验检疫行业标准(SN) ? 农业行标(NY) ? 国外主要食品微生物检测体系 ? ...肠杆菌科 大肠菌群 芽孢杆菌 沙门氏菌 弧菌科 粪大肠菌群 大肠杆菌厌氧 梭菌...食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》 (二)原国家...FDA的标准方法,用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测...具体操作参见 SN0169-92 《中华人民共和国进出口...出口食品中大肠菌群、 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法食品商务网
12:00:00.0 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0169-...大肠杆菌检测方法_农林牧渔_专业资料。大肠杆菌检测方法...国家标准 食品卫生微生物学检验 大肠 菌群测定》 (...具体操作参见 SN0169-92 《中华人民共和国进出口...主要负 责进出口肉类及肉类制品的微生物监管的官方...SN/T
非标(SOP):好氧菌计数方法(参考...大肠杆菌和大肠菌群检测方 法(参考采用FDA BAM ...为您提供鱼的做法大全：黄花鱼怎么做好吃，熏鱼的家常做法，清蒸鲳鱼的做法，不管是怎样的做法，我们这里鱼的家常菜谱全都有哦。快一起来看看鱼怎么做才好吃吧！
在此可输入您对该资料的评论~
(window.slotbydup = window.slotbydup || []).push({
id: '4540180',
container: s,
size: '250,200',
display: 'inlay-fix'
热门资料排行
添加成功至
资料评价：
所需积分：0}