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【求助】有做过小鼠肝内注射肿瘤细胞的吗，我做的总是漏出
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这个帖子发布于2年零343天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
看文献上是在肝左叶注射100-200ul但是我做的时候很容易漏出啊，就是打100ul都会漏出很多，小鼠的肝好脆啊，一不注意就夹破了，用注射器穿的时候不小心就穿透了问问大家是咋做的，咋样才能不漏出呢，漏出一点就腹腔种植了。还有就是你们都是剖开一点露出来肝就注射还是充分暴露了注射？还有我查的文献都是写的肝左叶，为啥右叶不能做
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他们结论：We conclude that a standardized growth of isolated metastases is
best achieved by implanting CT26.WT cells in a 10 microl PBS blister
subcapsularly into the paramedian area of the lower surface of the
left liver lobe, using a 32-gauge needle and closing the puncture site
with acrylic glue.
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肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul，不同细胞密度有所区别（5-10M个细胞不等），有的细胞还需要加入基质胶。这样的细胞液会比较黏稠。注射的时候，用棉签抵住注射点，慢慢推针，正常可以看见肝脏上鼓起一个小包，退针后用棉签按压或者使用生物胶水（OB胶）防止液体外漏。肿瘤一般注射在左叶，没见过官方解释，我想是因为左叶最大而且位置容易暴露吧。
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回答楼上：我们麻醉裸鼠用的是1%戊巴比妥钠，腹腔注射麻醉，剂量是体重（g）×8ul/g，一般10分钟左右就不动了，麻醉1小时应该没问题.。基本上不会麻醉死。
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肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul，不同细胞密度有所区别（5-10M个细胞不等），有的细胞还需要加入基质胶。这样的细胞液会比较黏稠。注射的时候，用棉签抵住注射点，慢慢推针，正常可以看见肝脏上鼓起一个小包，退针后用棉签按压或者使用生物胶水（OB胶）防止液体外漏。肿瘤一般注射在左叶，没见过官方解释，我想是因为左叶最大而且位置容易暴露吧。
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bighead1985 肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul， ...太感谢了，指点一下少走好多弯路。按你的方法确实不会漏出了，看来国内的有的文献不大可信，以后果有问题再来问你
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bighead1985 肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul， ...另上外你做的时候要把肝左叶都暴露出来，用镊子夹吗，还是剖开露出一点就可以用注射器穿？
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我们是把左叶完全游离出来暴露，但不能用金属镊子。我们的做法是腹中线左侧，肋骨下缘下5毫米处横切口，约5-10毫米长，用干棉签把左叶挑出来。横切很容易暴露肝脏，但是容易开线，对缝合要求高。
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bighead1985 我们是把左叶完全游离出来暴露，但不能用金属镊子。我们的做法是腹中线左侧，肋骨下缘下5毫米处横切口，约 ...好的，非常感谢，我试试，以前用镊子夹总夹破
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不要用金属，只可以用棉签，游离好肝叶后，尽量直视下贴着包膜下进针，可以反复扇形面注射，边退边打。也可以用30G的针头门脉直接注射
一般300没问题经脾注射后直接切脾 这是最没难度的备用方案
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caijuncl 不要用金属，只可以用棉签，游离好肝叶后，尽量直视下贴着包膜下进针，可以反复扇形面注射，边退边打。也 ...好的，我试试
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bighead1985 肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul， ...皮下种的话一般种多少体积？
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Becklittle 皮下种的话一般种多少体积？200ul。有的肝癌细胞PBS重悬就可以，有的需要1:1加入基质胶。
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bighead1985 200ul。有的肝癌细胞PBS重悬就可以，有的需要1:1加入基质胶。好的，我皮下种hct116。大约多久能长
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Becklittle 好的，我皮下种hct116。大约多久能长 HCT116是结肠癌细胞系，我同事做过。5million 细胞 200ul PBS/mouse. 7天看见小瘤块，大约150mm3，10天内可以分组。28天超过1500mm3，需要安乐死。
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bighead1985 肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul， ...我这次预实验，用hepg2肝内注射裸鼠，现在两周了，我从表面看还没看到有肿块，也摸不出来，这样是正常的吗？不知道长没长。一般多久能剖开后肉眼可见的结节？像现在这个情况我是再等等呢，还是剖开看看
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Becklittle 我这次预实验，用hepg2肝内注射裸鼠，现在两周了，我从表面看还没看到有肿块，也摸不出来，这样是正常的吗？不知道长没长。一般多久能剖开后肉眼可见的结节？像现在这个情况我是再等等呢，还是剖开看看我们之前用HepG2细胞，皮下成瘤就很慢，加基质胶，也要大约3周才刚刚到200mm3。转染荧光素酶后原位注射，在体实时观测，但是不成瘤，细胞在两个星期后死完（荧光消失）。你的细胞在皮下做过生长曲线吗，速度怎么样？我们原位成功的肝癌细胞是Bel-7404和Hep3B。根据经验，如果表面可以看见或者摸到肿块的话，原位肿瘤已经很大了，如果没有仪器检测，可能还是开腹比较好。一般注射后3-4周吧。
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留个邮箱吧，我们公司是专业做肿瘤动物模型的。美国anticancer公司
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bighead1985
HCT116是结肠癌细胞系，我同事做过。5million 细胞 200ul PBS/mouse. 7天看见小瘤块，大约150mm3，10天内可以分组。28天超过1500mm3，需要安乐死。我用hct116种植皮下，5million
200ul ，5周多的鼠，现在已经第6天了，15只仅有几只长了，而且也只有2mm直径。还有希望长吗？是不是那些没长的也就不会再长了
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bighead1985
HCT116是结肠癌细胞系，我同事做过。5million 细胞 200ul PBS/mouse. 7天看见小瘤块，大约150mm3，10天内可以分组。28天超过1500mm3，需要安乐死。我用hct116种植皮下，5million
200ul ，5周多的鼠，现在已经第6天了，15只仅有几只长了，而且也只有2mm直径。还有希望长吗？是不是那些没长的也就不会再长了可以再等等。
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我近期也准备肝内接种肿瘤细胞，我是新手，从来没有做过，求赐教啊，大谢！！！！
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bighead1985 肝脏不可能在一个点打进去100-200ul液体的，文献应该有误。一般我们造模的时候，只用40ul，不同细胞密度有所区别（5-10M个细胞不等），有的细胞还需要加入基质胶。这样的细胞液会比较黏稠。注射的时候，用棉签抵住注射点，慢慢推针，正常可以看见肝脏上鼓起一个小包，退针后用棉签按压或者使用生物胶水（OB胶）防止液体外漏。肿瘤一般注射在左叶，没见过官方解释，我想是因为左叶最大而且位置容易暴露吧。 请问您的OB胶在那购买的啊，谢谢！
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我们以前使用白云山的，效果可以。最近进了一批3M (1469SB)，还没试，不知效果。
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bighead1985 我们以前使用白云山的，效果可以。最近进了一批3M (1469SB)，还没试，不知效果。好的，谢谢
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我也困惑这个模型，**指导
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duchi 我也困惑这个模型，**指导 就按上面讨论的做，实际情况很好做，成功率很高。小鼠生命力比我们想象的顽强
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谢谢楼上的回复，有情况再来请教！
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bighead1985 我们以前使用白云山的，效果可以。最近进了一批3M (1469SB)，还没试，不知效果。 有这两个的联系方式吗
我在北京找不到哪有卖ob胶的
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您好，我是个实验新手，想请教下实验经验，希望您能不嫌弃我的问题太low。想问下您做实验时，裸鼠麻醉采用哪种方法？计量跟浓度是多少？苏醒时间和小鼠因麻醉死亡率怎样？在做这种模型时，有没有总结一些需要注意的事情？
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回答楼上：我们麻醉裸鼠用的是1%戊巴比妥钠，腹腔注射麻醉，剂量是体重（g）×8ul/g，一般10分钟左右就不动了，麻醉1小时应该没问题.。基本上不会麻醉死。
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他们结论：We conclude that a standardized growth of isolated metastases is
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subcapsularly into the paramedian area of the lower surface of the
left liver lobe, using a 32-gauge needle and closing the puncture site
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我请教各位战友，就是需要32G微量注射器的针头，可是进口太贵了要800元。买了国产上海高鸽的25ul微量注射器可是针头最小才只有25G,大家怎么把针头弄细，是到五金店把针磨细吗？有没有有技巧将针弄细？或者其他办法。
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jilei817 我请教各位战友，就是需要32G微量注射器的针头，可是进口太贵了要800元。买了国产上海高鸽的25ul微量注射器可是针头最小才只有25G,大家怎么把针头弄细，是到五金店把针磨细吗？有没有有技巧将针弄细？或者其他办法。买进口的吧，很好用
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jilei817 分享一篇肝脏原位肿瘤细胞注射的方法学文章他们结论：We conclude that a standardized growth of isolated metastases is
best achieved by implanting CT26.WT cells in a 10 microl PBS blister
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left liver lobe, using a 32-gauge needle and closing the puncture site
with acrylic glue.好文章
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用电凝笔来凝血，效果挺好的。最近我也在做HepG2肝癌细胞原位接种，细胞量是1×107个，每只打70微升，其中有20微升是基质胶，但是出现一个问题就是打的比较深的老鼠基本上都死了，打的比较浅的成肝包膜形式都活着，不知道死亡的原因，请指导下，感激不尽！
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大普洱 用电凝笔来凝血，效果挺好的。最近我也在做HepG2肝癌细胞原位接种，细胞量是1×107个，每只打70微升，其中有20微升是基质胶，但是出现一个问题就是打的比较深的老鼠基本上都死了，打的比较浅的成肝包膜形式都活着，不知道死亡的原因，请指导下，感激不尽！我感觉70多了
你是用什么溶液
要是培养基入血太多
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关于丁香园(ERROR:15) & 访客不能直接访问十人九肝病，一把芹菜煲大枣，用一个好一个，家有肝不好的快存！
十人九肝病，一把芹菜煲大枣，用一个好一个，家有肝不好的快存！
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肝是人体的将军之官，它能调节人体血液，促进新陈代谢、保证人体的免疫和解毒功能。一旦肝脏损伤，容易出现雌激素失调、免疫力下降等症状，还会惹来脂肪肝。肝功能衰竭等疾病。日常生活，应该如何养肝护肝？芹菜红枣煲汤：【做法】：芹菜200～400克，红枣50～100克，煲汤分次服用，或单用芹菜100～150克，洗净捣烂取汁，加蜂蜜适量炖，温服，天天一次，疗程不限。【功效】：该方清热解毒、健脾补血养肝，有利尿、健胃、镇静、降压、低落胆固醇和增进血清总卵白及白卵白，用于脂肪肝、病毒性肝炎患者。肝脏是人体最大的排毒器官，它出现问题时，我们不会察觉到疼痛，但一旦发现问题，可能已是晚期。当身体突然出现上面的症状，就要检查一下肝是不是出了问题。生活中也要注意养肝护肝，下面给大家推荐一款养肝的“法宝”，还能快速解酒哦。“南葛北参”；葛根为豆科植物野葛，是中国南方一些少区的一种常食蔬菜，一般用作煲汤之用。有“千年人参”的美誉。《本草纲目》、《伤寒论》等都对其有记载。由于葛根具备卓越的扩张血管和疏通血液作用，被誉为“血管的天然支架”，又被称之为“护肝宝”！葛根所含葛根素能改善微循环，提高局部微血流量，抑制血小板聚集。葛根具有β-受体阻断效应，抑制肾素-血管紧张素系统，影响血浆儿茶酚胺代谢，改善血管的顺应性，因此具有降压功能。葛根简直就是一种天然的补药，不仅可以帮助我们调节内分泌，美容养颜，而且还能降血糖、降血脂，保护肝脏，保护心脑血管的健康，怎么吃它呢？【做法】：把30克葛根洗净，切成薄片，再把葛根片放入锅中，加水煮沸之后代茶饮。图方便的朋友，可以直接饮这款破壁葛根粉，不需煎熬，更易促进人体易吸收，无s02熏蒸，无硫化物，无添加剂，重金属和农药残留都远低于国家标准。采用独立包装，干净卫生，不返潮，隔绝微生物的二次污染，特别适合没有时间的上班族，放在包里，使用时即冲即饮，一次一袋，标准用量，一撕一冲，方便安全。研究发现，葛根煎剂、醇浸剂能对抗垂体后叶素引起的急性心肌缺血。葛根总黄酮能扩张冠脉血管和脑血管，增加冠脉血流量和脑血流量，降低心肌耗氧量，增加氧供应。不仅如此，葛根对于男人女人来说都是宝！【男人吃葛根，解酒保肝】；长期服用葛根粉可以完全排出肝脏当中的残留毒素，如果是经常喝酒的人士，那么葛根粉就是必备的一种保健品。【女人吃葛根，养肝美颜】；葛根有助于我们肝脏正常代谢，肝气疏泄正常了，气血就不会淤滞。气血畅通，肝脏就不觉得堵，女人的皮肤自然好起来，人也会精神很多。【老人吃葛根，降血通血】；葛根具备卓越的扩张血管和疏通血液作用，改善高血压引起的头晕、眩晕、耳鸣；长期饮用可以降血压、降血脂破壁葛根粉￥68购买我们平时该如何养肝呢？一、午饭后闭目静坐养肝；饭后闭目静坐20分钟，能使血液更多地流向肝脏，供给肝细胞氧和营养成分。患有肝病的人，饭后更应该闭目养神。二、晚饭后慢走；晚饭后散步20分钟到1小时，可促进胃肠蠕动，有助于胃肠消化液的分泌和食物的消化吸收，利于身体健康。不可急步快走，以缓慢、舒适为宜。三、肝有问题的，不要再喝酒了如果实在有推不掉的酒局，记得在酒前酒后喝一杯葛根粉！葛根含大豆甙，它能分解乙醛毒性，阻止酒精对大脑抑制功能的减弱，抑制肠胃对酒精的吸收，促进血液中酒精的代谢和排泄。葛根本身发汗解表的能力很强，就算普通人，喝了之后也很容易出汗。而酒前服用，在饮酒是能加快酒精在体内的代谢，并将其从皮肤由汗液的形式排泄掉。解酒的同时，帮助护肝，长期用，清除你之前肝脏的余毒，老了就不会得肝病死掉了，喝酒的人大多是老了得肝病，是酒场人士所必备的饮品。【喝酒前饮用】：可以在肠胃里形成保护膜；【喝酒中饮用】：可以加速酒精的分解、代谢，促进血液循环；【酒后饮用】：可以有效的缓解头痛、呕吐等不适症状，而对于酒醉不醒的人，用生葛根捣粉泡水饮后便愈。
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