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我办事向来雷厉风行，进之以猛。节目开播以后，最挂心的就是收听率。在决定做明品说之前，朋友提醒我，『好好做节目，但别报太大希望，希望越大，失望越大。作为一个新节目，也没有人推，没有人炒，如果播了一两个月，收听率不好的话，就放弃止损吧。如果还行，甚至超出预期再往下做。再想微信公众号的事情』。我认为朋友说的有道理。于是，在最开始的一段时间，我每天都揪心于节目收听率。当时我自己对自己说，『如果每集节目就有几十个人听，一两百人听，那就算了，别逗了。不是那块金刚钻别给自己揽瓷器活儿。』那怎样算是过一大关了呢？我心目中给自己设的底线是全网加起来20W的收听量。订阅收藏量，我是不敢想的。如果节目做完，我都没到20W的收听量，就证明不达标，从此不再异想天开，这辈子也再不做节目了。如果20W收听量这个进门砖拍响了，才有资格想别的。截止到上周三，明品说已经播出了50集（第一季一共会做90集到100集），播出正巧过半。收听量刚好到了20W。订阅收藏量，两个平台没有数据，剩下三个平台正向7K迈进。如果单说音频节目本身，我已经提前一半儿时间就达到了自己的心理预期。换句话说，即使现在出了一个什么意外，我再也做不了音频节目这件事儿了，我也甘心了。因为我这辈子尝试过了，而且我成功的达到了我给自己设定的目标。这就值了。但是，还没来得及为自己骄傲，打击就来了。当音频这边开始驾轻就熟，我开始着手于微信公众号。我天真的以为，最起码，加公众号的粉丝也应该和订阅收藏我节目的人数差不多吧？事实证明，那纯粹是想多了。公众号的表现是沉寂的，甚至可以称作是『死寂』的。经常几天都没有1个人来加。有一段儿时间，公众号停留在十几个人，那十几个人里，除了4个人是听众，其他人都是亲朋好友。后来一度卡在三十几人，五十几人，无非就是亲朋好友叫来了更多的亲朋好友。我自己从未主动号召过亲朋好友来加我的公众号。不仅仅是因为我有我的骄傲、自尊。更重要的是，我心里明白，我建设这个公众号的『初心』是为了提供更多品牌学相关知识给需要的人们的。而不是为了让七大姑八大姨前来围观的。但当做了两个活动，还是无人问津，还是卡在五十来个人的时候，我也坐不住了。我甚至后悔我错过了一个500块钱1W僵尸粉的促销活动。有一天，我做了一个抢答活动，希望听了我今天节目的听众们，在公众号里发表他们对于一个品牌知识的看法。文章推送出去以后，我才猛然意识到，我的公众号因为原创文章太少，粉丝太少，都还不够格在文章下面写留言。我强作镇定的紧急处理了这件事情，通知大家在对话框里留言。但我内心深处十分懊恼。那一刻，我才真正认识到，我的公众号是多么的幼小，多么的脆弱，多么的不堪一击。我开始反反复复的想要买僵尸粉，恨不得跟每个亲朋好友说，赶紧把你们的亲朋好友都叫过来加公众号。可我心里清楚，这又能有什么用呢？如果真这样做了，不就违背了我的初心了吗？理智告诉我，多出原创的文章会成为一条出路。这条路一定很艰难，但这条路最实在。于是我开始让两个朋友先后帮我做了一段儿微信的小编，她们两个人协助我创作了一些文章。每次创作完，她们会发给我，往往需要我改动很多，方能发送。我不知道我要发多少原创，才能开通原创保护。但我反复跟她们强调，做原创文章，打好基础，才有未来。突然有一天，我收到了微信的通知，【明媚品牌说】取得了原创保护的资格，明品说的文章自此可以在下面写留言了，微信号里还能编辑页面模板了。我马上对两个朋友宣布了这个突如其来的好消息。我对她们说，只要坚持下去，明品说的未来会很好的。你们现在已经看到了20W的收听量，我们还会有更多个20W，只要努力，我们是会有一天在微信上拥有20W真实活跃的用户的，我们也会有10W+的文章阅读量的。。。。。。在短暂的喜悦与自信了一周之后，我的两个朋友因为各自本职工作繁忙，还有谋生打拼的原因，暂时离开了明品说。她们都对我表示抱歉，对不能帮我一起把明品说做好做大表示遗憾。我并没有觉得是她们对不起我，帮我是情分，不帮我也是本分。如果非要说不好意思，那也是我对她们不好意思，对粉丝不好意思。这场分离是难受的，难以承受的。但我不能说什么，也做不了什么。我想，这不是一场分离，而是一次剥离，生活狠狠的剥掉我所有粉饰，考验我究竟还有什么干货，什么本事。我想，这是受了腿伤的人要离开双拐，锻炼独立行走的疼痛。要忍住，要向前，要迈大步。我想，这是现实狠狠的鞭策，未来的明品说必须要有能留得住我想要的人才的资本。失去了左膀右臂的滋味儿是难受的。但更难受的是，无论是做活动，还是做文章推广。还是利用微博精准投放，大V转发去引流。。。。都不见成效。热钱一投进去，看得见的是阅读量，看不见的是转发、评论留言和用户增长。我开始了带着困惑去寻求答案之路。有幸与帮推客的两位老师攀谈。在道明了明品说现在的状况以后。两位老师都特别真诚、热情、友善的鼓励了我。这之后是很珍贵实在的观点——『跨平台的粉丝，真的是很难转化的。为今之计，最好不要指望音频节目那里的用户会自己转化到微信上。做微信公众号，就从微信公众号本身出发，做好每一篇文章，加强每一篇文章的传播，从微信平台本身吸收用户』。所以，明品说的现状是这样的，微信与音频节目中间有一条大河波浪宽。东岸与西岸是两个共同存在的世界。如何才能让两岸互通呢？于我而言，恐怕没有任何捷径，只能一个字一个字的写好每一篇文章，一次一次的录好每一段儿音频。只有跟自己死磕，想尽方法为用户带来更多的价值，让两岸的用户先分别发展起来，活跃起来。当有一天，两岸的人越来越多，两岸的景色越来越繁华，他们自然而然会产生一脚迈到河对岸去看一看的冲动。说来容易，做来难。这是多少财务成本、精力成本、时间成本、脑力成本啊？而我是一个白天还有一份全职工作的人。但这些都可以克服，只要坚持下去。但坚持很难。难，不是在于要坚持。而是在于没有人可以告诉我，你需要坚持多久就可以到达一个什么样的水平，拥有一个什么样的未来。跑一场马拉松，很多很多人都能做到。夸父逐日，做到的人就没有许多了。如果给坚持做明品说，找一个期限，那这个期限是没有任何温度的——『永恒』。必须持之以恒。从小到大，我一直是一个没有恒心的人。于我而言，进之以猛，易；持之以恒，难！有多难？太难了。。。。那种面对不知道要坚持多久才能追到太阳的无力感，让我深深恐惧，感到窒息，压力爆棚，难以安眠。但我已经下定决心，再难也要持之以恒。因为我明白，走到这一步，不是因为有希望、有关注、有人捧才去坚持。而是因为只有坚持，才能有人捧、有关注、有希望。说到这里，好像小鸡炖蘑菇，水放多了。。。怎么都是鸡汤味儿呢？真是无颜以对。。。。。最后希望能和有经验的、有共同爱好、追求的人多交流。希望得到大家的指点与支持。最后的最后，真心的非常感谢每一位帮助过和正在帮我做明品说的朋友。谢谢！","updated":"T06:16:41.000Z","canComment":false,"commentPermission":"anyone","commentCount":4,"collapsedCount":0,"likeCount":4,"state":"published","isLiked":false,"slug":"","isTitleImageFullScreen":false,"rating":"none","titleImage":"/2d1d51c509c0efeac0a99_r.jpg","links":{"comments":"/api/posts//comments"},"reviewers":[],"topics":[{"url":"/topic/","id":"","name":"微信公众号运营"},{"url":"/topic/","id":"","name":"自媒体"},{"url":"/topic/","id":"","name":"音频"}],"adminClosedComment":false,"titleImageSize":{"width":900,"height":500},"href":"/api/posts/","excerptTitle":"","tipjarState":"inactivated","annotationAction":[],"sourceUrl":"","pageCommentsCount":4,"hasPublishingDraft":false,"snapshotUrl":"","publishedTime":"T14:16:41+08:00","url":"/p/","lastestLikers":[{"bio":null,"isFollowing":false,"hash":"fd12688f44bdb86e2a405","uid":710100,"isOrg":false,"slug":"bei-zhi-ruo-shui","isFollowed":false,"description":"","name":"悲智若水","profileUrl":"/people/bei-zhi-ruo-shui","avatar":{"id":"da8e974dc","template":"/{id}_{size}.jpg"},"isOrgWhiteList":false},{"bio":null,"isFollowing":false,"hash":"f6ac0ac21cfb1c4a1f88b7dc31288cbc","uid":32,"isOrg":false,"slug":"yu-shuai-97","isFollowed":false,"description":"","name":"于帅","profileUrl":"/people/yu-shuai-97","avatar":{"id":"da8e974dc","template":"/{id}_{size}.jpg"},"isOrgWhiteList":false},{"bio":null,"isFollowing":false,"hash":"de89f1ff47dca85081eca26","uid":927400,"isOrg":false,"slug":"dai-liang-34","isFollowed":false,"description":"","name":"Falmal","profileUrl":"/people/dai-liang-34","avatar":{"id":"f3fb51f65dc7cad071d889b7c7af39ef","template":"/{id}_{size}.jpg"},"isOrgWhiteList":false},{"bio":"知乎相声话题最多赞同者*-*","isFollowing":false,"hash":"96ca65fb44f52e5f369a","uid":00,"isOrg":false,"slug":"xia-hua-85","isFollowed":false,"description":"","name":"夏花","profileUrl":"/people/xia-hua-85","avatar":{"id":"2d012ac2c","template":"/{id}_{size}.jpg"},"isOrgWhiteList":false}],"summary":"今天，明媚只想谈谈做自媒体这件事以来的心路历程。作为反鸡汤美少女战士，本文将为您呈现一本没什么技术干货的流水账和一锅热乎乎新鲜100%的小鸡炖蘑菇。 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标题: western 湿转恒流好还是恒压好？
摘要: [western 湿转恒流好还是恒压好？] western 湿转恒流好还是恒压好啊，我做western一直用的是恒压，转两个膜后考染胶总是一个有残余蛋白条带一个没有，是不是恒压不好啊，这两种方法哪个好啊？[email][ email] 关键词:[条带]……
western 湿转恒流好还是恒压好啊，我做western一直用的是恒压，转两个膜后考染胶总是一个有残余蛋白条带一个没有，是不是恒压不好啊，这两种方法哪个好啊？[email][/email]
1、湿转一般恒流恒压都可以，没有优劣，BIO-RAD 说明书上如恒流，转膜一般350mA 70min,恒压 100V 90min 2、应该不是恒压或恒流的关系，你这种情况很可能是你的滤膜、凝胶夹或你的膜气泡没有赶净等原因造成，注意检查下滤膜，如已经变薄，需要换张
我的蛋白分子量是43KD，需要什么转膜条件阿
如果一直有个不行，那么可能有个电转装置或其配置东西出了问题，和两种方法无关。
蛋白分子量是43KD恒流，转膜一般350mA 70min,恒压 100V 90min 足够
我今天转膜恒压80V 120min ，转膜后丽春红染色还行，可是转膜电流不到100 mA ，难道我的转膜电流太小么？是否有问题呢？我是同时转了两张膜，用的是PVDF膜
蛋白分子量是42KD和15KD,转膜用恒压80V,2h可否?
蛋白分子量是42KD和15KD,转膜用恒压80V,2h可否?没有问题。其实转膜不一定非要很完全才能进行WB的后续步骤，立春红染过后看到有条带就可以，后面一样可以反应。你湿转时是两个膜并排（可以说串联吧）放置在两个电极之间的么？那样势必不能两个转的完全一样，我做过，总是一个多一个少，好像是靠近阴极的那个转的快些。
我的目的蛋白２００ＫＤ左右，请问什么样的湿转条件比较好啊？多谢．
to bacteria_virus 我是在一张膜上先转,然后在孵育时再把膜剪开,分别加一抗.
我一般湿转都喜欢用恒压,一般是30-40V过夜转,60V 3-4h,100V 1h.其中我最喜欢过夜转.
我的目的蛋白２００ＫＤ左右，请问高手半干转和湿转的条件各为怎样为宜？多谢．顶！请高手指点。
在下的经验:蛋白分子量是43KD, 110V,
30-40 min 足够; ２００ＫＤ左右，25-30 V OVERNIGHT
to bacteria_virus 我是在一张膜上先转,然后在孵育时再把膜剪开,分别加一抗.完全可以啊
我的蛋白分子量是10kd，请问用什么样的转膜条件比较好啊，谢谢
在下的经验:蛋白分子量是43KD, 110V, 30-40 min 足够; ２００ＫＤ左右，25-30 V OVERNIGHT非常感谢！
我的目的蛋白是26KD 和17KD 请问如果用半干转的话,分别应该是什么条件下转? 另外我听说转膜也跟膜的孔径有关系?我用的是NC,是不是转漏了？我前两次分别用250mV 3h和12V 1.5h试过,但是没有目的条带.是没转上还是转过了? 我用半干转.目前总是检测不出我的目的条带,很是着急. 恳请高手指教!!!谢谢!!
再请教一个问题: 我已经发光过的NC膜,能不能用TBST洗了之后,接着再次加我的另外一种一抗,接着western检测另一种蛋白?上面说过了,我的目的蛋白是26KD 和17KD 两个.还是需要处理一下??如果需要处理应该是什么液?配方是什么? 请大家帮忙,不胜感激!!
再请教一个问题: 我已经发光过的NC膜,能不能用TBST洗了之后,接着再次加我的另外一种一抗,接着western检测另一种蛋白?上面说过了,我的目的蛋白是26KD 和17KD 两个.还是需要处理一下??如果需要处理应该是什么液?配方是什么? 请大家帮忙,不胜感激!!应该用抗体洗脱液处理后，再加另一种一抗才行。抗体洗脱液的配方(15ml体积)：β－巯基乙醇 0.11ml 10%SDS 3.0ml 1.26mol/L Tris(pH 6.8) 0.75ml DDW 11.14ml
我也转43kD的，80V恒压1h，电流一般在160左右。
再请教一个问题: 我已经发光过的NC膜,能不能用TBST洗了之后,接着再次加我的另外一种一抗,接着western检测另一种蛋白?上面说过了,我的目的蛋白是26KD 和17KD 两个.还是需要处理一下??如果需要处理应该是什么液?配方是什么? 请大家帮忙,不胜感激!!不用洗脱液也行的.可以用TBST洗后,再封闭过夜,加另外的抗体.我这么做过,是可以的!
你好：我的BIO-RAD 半干转膜，上面写着电压不能超过25V啊，为什么你们所说的电压有那么大啊？
我做过分子量是44KD的，采用湿转，恒流400mA，转1小时，效果不错。
我做过分子量是44KD的，采用湿转，恒流400mA，转1小时，效果不错。
转膜转的不好，建议换一下glycine试试，很多国产的glycine都有问题。其实多转或少转十几分钟问题不大。
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电话：021-乌有反哺之恩，羊有跪乳之义。长辈对子辈的爱永远是不求回报的，但现实却往往是“树欲静而风不止，子欲养而亲不待”。当我们拥有时，很难用心去体会其中的一点一滴；失去后才知道：亲情难再。在爱这个永恒的话题中，珍视与感恩常常是最容易被我们忽略的。请你以“感恩”为话题，（1）自拟题目，写一篇有真情实感的文章。（除诗歌外，文体不限）（2）不少于600字。（3）文章不得出现真实的人名和校名。
乌有反哺之恩，羊有跪乳之义。长辈对子辈的爱永远是不求回报的，但现实却往往是“树欲静而风不止，子欲养而亲不待”。当我们拥有时，很难用心去体会其中的一点一滴；失去后才知道：亲情难再。在爱这个永恒的话题中，珍视与感恩常常是最容易被我们忽略的。请你以“感恩”为话题，（1）自拟题目，写一篇有真情实感的文章。（除诗歌外，文体不限）（2）不少于600字。（3）文章不得出现真实的人名和校名。
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试题：乌有反哺之恩，羊有跪乳之义。长辈对子辈的爱永远是不求回报的，但现实却往往是“树欲静而风不止，子欲养而亲不待”。当我们拥有时，很难用心去体会其中的一点一滴；失去后才知道：亲情难再。在爱这个永恒的话题中，珍视与感恩常常是最容易被我们忽略的。请你以“感恩”为话题，（1）自拟题目，写一篇有真情实感的文章。（除诗歌外，文体不限）（2）不少于600字。（3）文章不得出现真实的人名和校名。
试题地址：/shiti/135138
这道试题主要考察你对知识点""的考点理解，关于知识点解析请看
请给下列词语归类。
褒义词：__________________________________________________________________________
贬义词：__________________________________________________________________________
在正方体ABCD-A1B1C1D1中，已知AC=2
，则这个正方体内切球的体积为（　　）
than the girl.
—Could you tell me ________?—Ｏf course, last night.
A．how you came to our school.
B．when you reached our school.
C．when you reach our school.
D．when did you reach our school.
．—________the population of Shandong Province?—I can't say exactly, but I know it ________ about 80 million.
A．What's; has large population
B．H has the population of
C．H has a large population
D．What's; has a population of
在广州亚运会田径比赛男子110米栏决赛里，中国飞人刘翔以13秒09摘得金牌，实现了亚运会110米栏三连冠，他的成绩同时也刷新了亚运会纪录．关于比赛的下列说法中正确的是（　　）
A．在110 m栏比赛中，选手通过的路程就是位移
B．13秒09是刘翔夺冠的时刻
C．刘翔比赛中的平均速度约是8.4 m/s
D．刘翔冲过终点线时的速度一定等于8.4 m/s
该知识易错题
该知识点相似题}