CaMKⅡα-Cre转基因小鼠模型的建立
Cre/LoxP系统介导的条件性基因敲除技术(conditional gene knockout)是目前基因功能研究中最重要的技术之一,它克服了传统基因敲除技术存在的诸多弊端。在神经系统研究方面,该技术的运用可使基因敲除仅发生在大脑的某个亚区或发育过程的某个阶段,从而有利于对大脑基因功能进行精细研究。对于神经系统条件性基因敲除而言,组织特异性启动子的选择至关重要。研究表明,CaMKⅡα基因的表达具有较强时空特异性,符合制备前脑神经细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠的要求。神经细胞特异性Cre表达载体(PCCEⅠ)已在前期研究工作中构建成功。本项研究是利用线性化的PCCEⅠ载体通过原核显微注射的方法制备CaMKⅡα- Cre转基因小鼠,并对小鼠体内各组织中Cre基因的表达进行检测,从而建立前脑神经细胞特异性表达Cre的转基因小鼠,为进一步制备条件性ADAM10基因敲除小鼠奠定基础,有助于对阿尔茨海默病发病机制进行研究。通过原核&
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肺癌是威胁人类健康的第一大肿瘤性疾病[1]。根据肺癌临床表现不同一般可以将其分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。其中,NSCLC约占80%,根据其病理特征分为三类:腺癌(20%～40%),鳞状细胞癌(20%～40%),大细胞癌(10%～20%)[2]。虽然肺腺癌的发病率较高,但因其细胞来源及肿瘤进程均不明确,使得针对肺腺癌的临床前研究更加困难。因此建立一种高度模拟人类肺腺癌发生的动物模型是十分有必要的。近期研究人员利用重组腺病毒载体表达Cre重组酶诱导K-ras G12D在小鼠肺部表达,建立了一种新型的小鼠肺腺癌模型[3],该小鼠模型可以很好模拟人类肺癌散发性发生的特征,然而,使用腺病毒载体的诱发方式建模并不稳定,并且使用大量病毒诱发基因突变为瞬时过程,也不能模拟小鼠体内肿瘤慢性自发的过程。本研究的目的就是利用转基因小鼠杂交的方式建立一种慢性自发肺部肿瘤的小鼠模型。1材料和方法1.1 SPC-CRE表达载体的...&
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研究背景和目的人Cripto-1(CR-1),又称畸胎癌衍生生长因子-1(teratocarcinoma-derived growth factor-1, TDGF-1),是表皮生长因子-Cripto-FRL-Criptic(EGF-CFC)家族成员之一,属于转化生长细胞TGF-β蛋白家族及Nodal蛋白质的共同受体,编码一种含188个氨基酸的生长因子样和/或共受体样的胞外糖蛋白,主要功能是激活胚胎发育和细胞转化中的多条信号通路。CR-1于早期胚胎上高表达,成体阶段仅肺、肾、脑、睾丸、卵巢和脾脏等上有低水平表达；在人肿瘤如乳腺癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌和鼻咽癌等中CR-1高表达,因此CR-1被认为是癌胚基因。通常,确定某个基因是否是瘤基因最可靠和最经典的策略和方法是,在转基因小鼠体内过表达该基因,并进而观察病理改变。目前,已建立了乳腺特异表达人CR-1基因的转基因小鼠,并观察到乳腺癌的发生；由于该模型人CR...&
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缺氧诱导因子一la(hypoxia一inducible factor-l，HIF一l)是细胞在缺氧等条件下稳定表达的具有转录活性的核蛋白，它能够与靶基因调控序列中的HRE相结合，诱导靶基因的表达变化，介导机体对缺氧、缺血产生适应性反应。目前已确定的HIF一1靶基因近50种l’]，其中包括EPo[2]、转铁蛋白、vEeF等一系列功能重要的蛋白质。HIF一1是由a亚基和p亚基组成的异源二聚体，HIF一lp在一般情况下很稳定，对HIF一1的调节通常发生在HIF一la。氧浓度是调节HIF一la蛋白水平和功能的重要因素，在常氧条件下，HIF一la亚基被蛋白酶所降解;缺氧时，HIF一la降解减少，HIF一la蛋白水平提高，促转录活性增加l3]。为更好地研究HIF一la在体内的功能及相应生物学机制，研究者建立了HIF一la条件性敲除小鼠模型，但遗憾的是在全身l4]、血管内皮[5]以及软骨细胞l6]敲除HIF一la基因的小鼠在胚胎期或出生后即死...&
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干扰素是一种当机体受到相应诱导物刺激后由细胞分泌的具有抗病毒活性的蛋白质。干扰素通过诱导细胞内产生有酶活性的抗病毒蛋白,间接地抑制病毒复制而具有抗病毒作用;干扰素还有抗肿瘤和免疫调节作用。一般而言,当细胞受到病毒或双链RNA的刺激时就会产生IFN-α和IFN- ?。但在不同的生物体内的不同组织器官的细胞中干扰素的产生量都是不同的。大多数临床治疗中使用的干扰素都是通过基因工程产生的。前期的生物治疗研究证明,IFN-α为后来的很多新的生物治疗药物的发展铺平了道路。本研究用PvuI酶切IRES-neo-IFN质粒,回收并纯化目的基因,通过受精卵显微注射技术,将其导入到昆明小鼠受精卵的雄原核中,约注射了864枚受精卵,将823枚存活的受精卵移植到33只假孕雌鼠的输卵管壶腹部内,其中有15只怀孕,顺利出生并存活的仔鼠有31只,通过特异性引物PCR法和Southern杂交法检测出4只阳性转基因小鼠。原代转基因小鼠与正常的昆明小鼠交配,出生后...&
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目的扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy, DCM)以左心室或双心室扩张和心功能减退为特征,其发病原因与病毒感染、自身免疫、酒精中毒、妊娠、家族遗传等因素有关,其人群发病率约为1/2500,占所有心肌病的60%。迄今缺乏有效治疗,是心血管疾病的重要死因。为寻找安全高效的治疗DCM的药物,我们把作用于不同靶点的中药单体人参皂甙Rbl (Ginsenoside-Rbl, Rbl)和磷酸川芎嗪(Tetramethylpyrazine phosphate, TMPP)联合应用,以本室建立的cTnTR141w扩张型心肌病转基因小鼠为模型,研究本中药单体复方对DCM的治疗效果并探讨其作用机理。方法对2.5月龄的cTnTR141w转基因小鼠进行心脏超声检查,计算左心室收缩末期内径(the left ventricular end-systole diameter, LVESD)的平均值和95%的可信区间。我们将95%的可...&
(本文共69页)
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传真：010-DJ-1L166P转基因小鼠模型的建立--《第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编》2009年
DJ-1L166P转基因小鼠模型的建立
【摘要】：目的探讨DJ-1 L166P突变基因在帕金森病发生中的作用。方法利用TRLzol试剂一步法提取SH-SY5Y细胞的总RNA,采用RT-PCR试剂盒反转录获得细胞的cDNA,特异引物扩增DJ-1片段,将氨基酸编码166位亮氨酸突变为脯氨酸,构建pcDNA3.1-myc-his-DJ-1L166P真核表达载体,利用显微注射的方法将DJ-1 L166P基因片段(约3.9kb)导入BDF1受精卵雄原核中并移植到同期受孕的假孕母鼠输卵管中,对产出仔鼠的鼠尾组织DNA进行PCR、southern检测,对southern鉴定阳性的转基因小鼠进行RT-PCR、western表达检测。结果共产生20只子代小鼠,经PCR和southern鉴定结果表明1号和7号为转基因阳性小鼠,两只转基因小鼠RT-PCR检测结果显示:1号小鼠RT-PCR检测大脑、小脑、肝、肺、肾、睾丸有不同程度的表达并高于正常C57BL/6小鼠,7号小鼠RT-PCR检测只有肝、肺组织表达亦高于正常C57BL/6小鼠,实验结果统计学分析1号转基因小鼠的大脑与正常C57BL/6小鼠比较具有显著性差异(P0.05),western检测结果表明1号小鼠大脑有His标签的表达。结论成功获得1只DJ-1 L166P基因突变转基因小鼠,为课题的下一步实验研究打下良好的基础。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R742.5【正文快照】：
DJ-1L166P转基因小鼠模型的建立@张梅英!110001 沈阳$中国医科大学实验动物部
@吴红联!110001 沈阳$中国医科大学实验动物部
@蔺美娜!110001 沈阳$中国医科大学实验动物部
@李兆阳!110001 沈阳$中国医科大学实验动物部
@杨葳!110001 沈阳$中国医科大学实验动
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