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益母草流浸膏及其原药材质量控制方法研究
【摘要】：本研究以益母草流浸膏及其原料药唇形科益母草属植物益母草干燥的全草为研究对象,采用现代分析技术,分别从指纹图谱、多成分含量测定等方面对其质量标准进行了提高,并利用建立的方法,对不同生长期的益母草进行成分分析,以期指导种植益母草的最佳采收期。目的：(1)建立益母草流浸膏的指纹图谱方法；(2)建立益母草流浸膏多指标成分含量测定方法；(3)建立益母草相应的指纹图谱方法；(4)建立益母草相关成分含量测定方法； (5)探索不同生长期童子益母草化学成分动态变化规律。方法：(1)采用柱层析,溶剂萃取等方法对益母草流浸膏中主要成分进行提取分离,并利用色谱、光谱和质谱等方法确定主要成分；通过色谱条件优化,建立益母草流浸膏HPLC指纹图谱。 (2)建立同时测定益母草流浸膏中对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱三个成分的含量测定方法。 (3)采用溶剂萃取法对益母草药材中极性较大部分成分进行提取分离,建立与益母草流浸膏相适应的益母草HPLC指纹图谱。(4)建立同时测定益母草中对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱三个成分的含量测定方法。(5)比较分析了童子益母草不同生长期的三种成分的动态变化。结果： (1)用水饱和的正丁醇萃取益母草流浸膏,通过高效液相色谱法并结合光谱和液质联用技术进行分析,对其中三个含量较高的成分进行了指认,分别为对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱；首次建立了益母草流浸膏特征成分的HPLC指纹图谱,得到共有峰6个,指认了其中3个。测定结果显示,所收集样品与标准指纹图谱均有良好的相似度。(2)利用益母草流浸膏HPLC指纹图谱的方法,同时测定其中已指认的三种成分的含量,对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱分别在进样量3.952-790.4ng (r=1.0000)、10.427-2085.4ng (r=1.0000)和6.983-1396.6ng (r=0.9999)范围内呈良好的线性关系；对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱的平均回收率分别为98.6%(RSD =1.5%)、97.8%(RSD=2.0%)、97.9%(RSD= 1.8%).(3)首次建立了益母草中与流浸膏中相关特征成分的HPLC指纹图谱,得到共有峰6个,指认了其中3个,与益母草流浸膏指纹图谱相关性良好。测定结果显示,所收集样品与标准图谱亦均有较好的相似度。(4)利用益母草HPLC指纹图谱方法,首次建立了同时测定益母草中三个相关成分含量的HPLC测定方法,对羟基苯甲酸、丁香酸和盐酸益母草碱的平均回收率分别为99.0%(RSD=1.5%)、99.5%(RSD=0.7%)、98.6%(RSD=1.3%)。通过比较外观和含量结果,含叶比例高的样品盐酸益母草碱含量较高,含茎比例高的样品丁香酸含量较高。益母草流浸膏与原料药相比,三种成分含量均呈比例下降,损耗率约在50%。(5)三种成分在童子益母草不同生长期呈动态变化：在2.5个月到3.5个月之间,三种成分含量大幅度上升,在3.5个月到4.5个月之间小幅度下降,然后到5.5个月又上升,之后含量渐渐下降。从每株的含量情况来看,在5.5个月左右童子益母草单株植株内的三种活性成分的含量均达到最高。结论：(1)建立了益母草流浸膏HPLC指纹图谱,特征性明显,方法简便,重复性好,可为该流浸膏作为提取物使用和作为中成药原料药使用提供有效的鉴别依据；(2)建立了益母草流浸膏中多指标含量测定方法,可同时控制指纹图谱中3个成分的含量,方法简便、准确,可为综合评价和控制产品质量提供依据；(3)建立的益母草药材HPLC指纹图谱,与益母草流浸膏相关性好,可为流浸膏采购合格原料药提供依据；(4)建立的益母草药材多指标含量测定方法,可为益母草流浸膏原料药的质量评价提供依据；(5)童子益母草不同生长期3个成分动态变化比较结果,可为益母草药材的种植、采收提供依据。
【关键词】：
【学位授予单位】：浙江中医药大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：R286.0;O657.7【目录】：
中文摘要6-8ABSTRACT8-11前言11-13第一章 益母草流浸膏HPLC指纹图谱研究13-35 (一)、仪器、试剂及试药14
1. 实验仪器14
2. 试剂试药14
3. 对照品14 (二)、益母草流浸膏指纹图谱的建立14-31
1. 样品的收集14-15
2. 提取条件的确定15-19
3. 色谱条件优化19-20
4. 参照峰的选择20-21
5. 实验方法的确定21
6. 共有峰(mark 峰)的确定21-22
7. 方法学验证22-24
8. 标准指纹图谱的生成24-25
9. 耐用性考察25-29
10. 样品测定29-30
11. 相关性试验30-31 (三)、益母草流浸膏指纹图谱色谱峰的指认31-34 (四)、小结34-35第二章 益母草流浸膏中主要成分的定量分析35-47 (一)、HPLC法同时测定益母草流浸膏中3个成分的含量35-45
1. 实验方法35-41
2. 方法学验证41-45
3. 样品含量测定45 (二)、小结45-47第三章 益母草指纹图谱研究47-65 (一)、仪器、试剂及试药47-48
1. 实验仪器47
2. 试剂试药47-48
3. 对照品48 (二)、益母草指纹图谱的建立48-62
1. 样品的收集48-50
2. 提取条件的确定[29]50-52
3. 色谱条件优化(检测波长、流动相)52
4. 参照峰的选择52
5. 实验方法的确定52-53
6. 共有峰(mark 峰)的确定53-55
7. 方法学验证55-56
8. 标准指纹图谱的生成56-57
9. 耐用性考察57-59
10. 样品测定59-61
11. 相关性试验61-62 (三)、益母草指纹图谱色谱峰的指认62-63 (四)、小结63-65第四章 益母草中相应成分的定量分析65-75 (一)、HPLC法同时测定益母草中3个成分的含量65-70
1. 实验方法65-66
2. 方法学验证66-69
3. 样品含量测定69-70 (二)、不同生长期益母草3个成分含量变化探讨70-72
1. 童子益母草开发利用现状70
2. 样品收集70
3. 实验方法及结果70-72 (三)、小结72-75结论75-76参考文献76-78致谢78-80文献综述80-90 参考文献87-90
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