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肿瘤血管靶向肽gx1的受体筛选及初步鉴定
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肿瘤血管靶向肽gx1的受体筛选及初步鉴定
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3秒自动关闭窗口天棘胶囊对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用研究 - 新闻中心 - 成都百草中医药应用开发有限责任公司
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& 天棘胶囊对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用研究
天棘胶囊对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用研究
摘要：[目的]探讨天棘胶囊（tj）对氧化损伤的人脐静脉血管内皮细胞的保护作用及机制。 [方法] 采用mtt比色法检测不同浓度的tj对内皮细胞增殖的影响，观察tj对h2o2氧化损伤内皮细胞的保护作用，并测定细胞内丙二醛（mda）含量，超氧化物歧化酶（sod）、谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）和一氧化氮合酶（nos）活性，乳酸脱氢酶（ldh）释放率及一氧化氮（no）生成量。 [结果] &400&g/ml的tj作用48h未见细胞毒性，并具有促进细胞增殖的作用。受试浓度范围的tj可促进受损的内皮细胞修复，同时降低mda含量、ldh释放率并提高sod、gsh-px、nos活性。[结论] 天棘胶囊能减轻h2o2对人脐静脉血管内皮细胞的氧化损伤，具有良好的抗氧化保护作用。
关键词：血管内皮细胞；过氧化氢；天棘胶囊；抗氧化
study on protective effect of tianji capsule against vascular endothelial cells injury induced by hydrogen peroxide
ma hai-ying, chen jin-yao, zhang li-shi
（department of nutrition and food hygiene, west china school of public health, sichuan university, chengdu 610041, china）
abstract& objective: &to study the protective effects of tianji capsule (tj) on the oxidatively injured vascular endothelial cells and its mechanism. &methods: to evaluate the cytotoxicity from tj and to establish oxidatively injured cell model, normal human umbilical vascular endothelial cells (huvec) respectively incubated with 5～400&g/ml tj for 4h-48h or 0.025～5mmol/l h2o2 for 30 min, the proliferating rate of cells was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (mtt) assay. to evaluate the protective effect of tj on huvec injury induced by h2o2, huvec was divided into control, model, tj and coq10 treatment group. huvec was incubated with 37.5, 75, 150 and 300&g/ml tj or 100&g/ml coq10 for 24h, and then h2o2 0.1 mmol/l(final concentration) was added to huvec in the model group, tj and coq10 treatment groups for 30 min. the proliferating condition of huvec was evaluated by the od values detected by mtt assay, and the levels of mda and no, the activities of sod, gsh-px and nos, the releasing rate of ldh in huvec were measured. &result: tj of 400&g/ml had no cytotoxicity on huvec at 48h, and by contraries, it can promote huvec proliferation. tj with different concentrations and coq10 with given concentrations increased the repair of injured huvec and increased the ratio of sod, gsh-px, nos activities and the concentration of no, decreased the level of mda and releasing percentage rate of ldh. &conclusion: tj can prevent huvec from the oxidative injury induced by hydrogen peroxide.
key words: anti-oxidative effect
心脑血管疾病是严重危害人类健康的常见疾病，动脉粥样硬化作为心脑血管疾病的主要病理基础而受到人们的高度关注。目前大量资料认为血管内皮细胞（vec）损伤及其功能异常是动脉粥样硬化病变形成的始动环节【1】。导致vec受损的原因很多，生物体内各种氧化-还原反应产生的羟基自由基(&oh)、超氧阴离子(o-2&)、过氧化氢(h2o2)等自由基和过氧化产物的累积是其主要原因【2-4】。
本研究所用的天棘胶囊(tj)是我国国家食品药品监督管理局批准的具有增强免疫力和缓解体力疲劳的保健食品，其主要成分为沙棘籽油和红景天提取物。除增强免疫力和缓解体力疲劳功能外，沙棘和红景天还具有清除体内自由基、延缓衰老、抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、抗缺氧、抗心肌缺血再灌注损伤、增强心血管系统功能等多方面的保健作用【5-9】。本研究使用h2o2诱导体外培养的人脐静脉血管内皮细胞损伤模型，观察tj的保护作用并探讨可能的作用机制，为tj保健功能的进一步拓展提供依据。
1 材料与方法
1.1 细胞系：人脐静脉血管内皮细胞（huvec）细胞株，购自四川大学华西移植与免疫实验室，由atcc引进。
1.2& 受试物：天棘胶囊（tj）内容物由成都百草中医药开发应用有限责任公司提供。辅酶q10（coq10）购自北京嘉康源科技发展有限公司。均用丙酮溶解，羧甲基纤维素混悬。
1.3& 试剂：rpmi-1640培养液、胰蛋白酶、新生小牛血清购自成都哈利公司，30% h2o2、羧甲基纤维素、丙酮购自成都科龙化工试剂厂，二甲桠枫（dmso）、四甲基偶氮唑蓝（mtt）为sigma公司产品。丙二醛（mda）含量、超氧化物歧化酶（sod）活力、谷胱甘肽过氧化物（gsh-px）活力、一氧化氮合酶（tnos和inos）活力、一氧化氮（no）、乳酸脱氢酶（ldh）测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
1.4& 仪器：二氧化碳培养箱、超净工作台、低速离心机、倒置显微镜、酶标仪、恒温振荡培养箱、分光光度计、高压灭菌器、纯水仪、冰箱等。
1.5.1& huvec的培养：冻存细胞复苏后，置于含10%小牛血清的rpmi-1640培养液中，于37℃、5%co2 细胞培养箱中培养。
1.5.2& mtt比色法：按文献【10】 报道的方法进行。增殖率=（实验组a值／对照组a值）&100%。
1.5.3& tj对内皮细胞的影响：8&104个/ml密度的huvec细胞接种于96孔板中，每孔100&l，培养24h后，弃上清，加入100&l含浓度分别为5、10、25、50、100、200、300、400 &g/mltj的培养液，分别在处理4h、12h、24h、48h后，mtt比色法测定各孔吸光度。
1.5.4& h2o2对内皮细胞损伤实验：1.2&105 个/ml密度的huvec细胞接种于96孔板中，每孔100&l。培养24h后，弃上清，加入100&l含浓度分别为0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2、5 mmol/l h2o2的培养液，处理30min后，mtt比色法测定各孔吸光度。
1.5.5& tj对h2o2 损伤内皮细胞的保护作用：8&104 个/ml密度的huvec细胞接种于96孔板中，每孔100&l，培养24h后，弃上清。分为空白对照组、损伤模型组、coq10对照组和tj处理组。空白对照组和损伤模型组使用常规培养液培养。coq10对照组和tj处理组分别用终浓度为100&g/ml的coq10和37.5（ll组）、75（l组）、150（m组）、300（h组）&g/ml的tj悬液预处理24h后，弃上清，pbs冲洗1～2次。除空白对照组外，各孔加入含0.1 mmol/l h2o2的培养液，处理30min后，mtt比色法测定各孔吸光度。
1.5.6& mda、sod、gsh-px、nos、no、ldh测定：8&104个/ml密度的huvec细胞接种于24孔板中，每孔1ml，培养24h后，吸去上清。分组和处理方法同1.5.5。h2o2处理30min后，吸取各孔上清液用于细胞外ldh的测定，pbs冲洗1～2次，收获细胞、裂解后离心，取上清液，按相应试剂盒的操作说明测定细胞内各指标。
1.6& 数据处理和统计分析：使用spss 16.0统计软件分析。
2.1 tj对huvec增殖的影响：见表1。在本实验剂量范围（5～400&g/ml）和处理时间（4～48h）内，tj对huvec无细胞毒性。除5&g/ml组以及50&g/ml （48h）外，各浓度各时点的tj内容物均可促进细胞增殖，并有较好的剂量－反应关系。综合来看，以24h的促进增殖率较高，故本实验选择处理时间为24h。
表1 不同浓度的tj对huvec细胞增殖的影响（n=6， &s）
0.228&0.004
0.402&0.013
0.772&0.009
2.054&0.039
0.227&0.003*
0.439&0.038*
0.807&0.009
2.155&0.029
0.252&0.015*
0.446&0.002*
0.830&0.009*
2.217&0.009*
0.260&0.009*
0.476&0.010*
0.848&0.021*
2.184&0.033*
0.261&0.003*
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「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞
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&一说到做细胞培养，写「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞论文，可谓是压力很大，步步惊心的节奏。都说细胞很娇贵，很难培养。其实，只有你细心、耐心、摸清楚它的&脾气&。了解其该用哪种培养液去培养更合适，培养「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞就轻松许多。我司细胞不仅提供操作指导，技术服务，还帮您细致化，针对不同细胞的特点推荐不同的解决方案。「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞细胞学名：人脐静脉血管内皮细胞；HUVEC组织来源：脐静脉血管内皮细胞培养条件：F12K10%FBS「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞形态：贴壁；绕は赴出处：该细胞可用于血管内皮修复损伤的研究。【规格】500000cells/瓶【运输方式】冻存的细胞干冰运输，复苏的细胞冰袋运输。双11来了，「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞提前预定更优惠。细胞复苏我们严格按照&快速溶解&原则,提高细胞存活率。传代比例高，购买「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞，我们从试剂、包被器皿、冻存原代细胞、新鲜原代细胞、原代细胞的分子学实验等提供全程服务。Cs-(001)-006621抗人IgM小鼠杂交瘤细胞，3C6，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006622抗人IgG小鼠杂交瘤细胞，2C4，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006623小鼠杂交瘤细胞，B6y H4，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006624小鼠杂交瘤细胞，W6/32，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006625小鼠杂交瘤细胞，16DC9，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006626小鼠杂交瘤细胞，D61-18,IgA，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006627小鼠杂交瘤细胞，19GD6，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006628小鼠杂交瘤细胞，D10-G/u，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006629小鼠杂交瘤细胞，16AC5，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006630小鼠杂交瘤细胞，10EF10，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006631小鼠杂交瘤细胞，D47-u，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006632小鼠杂交瘤细胞，D10-1A/u，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006633小鼠杂交瘤细胞，19DF10，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006634小鼠杂交瘤细胞，D61-NEW，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006635小鼠杂交瘤细胞，I41，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006636小鼠杂交瘤细胞，D47-AF,IgA，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006637小鼠杂交瘤细胞，16DC9-A，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006638小鼠杂交瘤细胞，T33-22A，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006639小鼠杂交瘤细胞，16CD11-G，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006640小鼠杂交瘤细胞，16BB5，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006641小鼠杂交瘤细胞，16CF7，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006642小鼠杂交瘤细胞，16CD11-A，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006643小鼠杂交瘤细胞，I41-AG，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006644小鼠杂交瘤细胞，19HC5，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006645小鼠杂交瘤细胞，16CF7-A5，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006646小鼠杂交瘤细胞，4E-BP1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006647小鼠杂交瘤细胞，ABL2，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006648小鼠杂交瘤细胞，Akt2，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006649小鼠杂交瘤细胞，Akt3，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006650小鼠杂交瘤细胞，AMACR，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006651小鼠杂交瘤细胞，APOA1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006652小鼠杂交瘤细胞，APOA5，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006653小鼠杂交瘤细胞，ApoM，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006654小鼠杂交瘤细胞，APP，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006655小鼠杂交瘤细胞，AURKB，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006656小鼠杂交瘤细胞，BCL-10，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006657小鼠杂交瘤细胞，BLK，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006658小鼠杂交瘤细胞，BNP1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006659小鼠杂交瘤细胞，BNP2，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006660小鼠杂交瘤细胞，BNP3，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006661小鼠杂交瘤细胞，BRAF，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006662小鼠杂交瘤细胞，BSA，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006663小鼠杂交瘤细胞，BTK，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006664小鼠杂交瘤细胞，Calcyclin，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006665小鼠杂交瘤细胞，Calreticulin，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006666小鼠杂交瘤细胞，cAMP，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006667小鼠杂交瘤细胞，CANX，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006668小鼠杂交瘤细胞，CD10，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006669小鼠杂交瘤细胞，CD14，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006670小鼠杂交瘤细胞，CD19，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006671小鼠杂交瘤细胞，CD20，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006672小鼠杂交瘤细胞，CD3，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006673小鼠杂交瘤细胞，CD4，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006674小鼠杂交瘤细胞，CD8，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006675小鼠杂交瘤细胞，CHK1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006676小鼠杂交瘤细胞，CHUK，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)「HUVEC细胞」人脐静脉血管内皮细胞-006677小鼠杂交瘤细胞，CIB1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006678小鼠杂交瘤细胞，CK1，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006679小鼠杂交瘤细胞，C-Kit，规格：&5&100000cells/瓶Cs-(001)-006680小鼠杂交瘤细胞，Clenbuterol，规格：&5&100000cells/瓶&
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