一例特殊的疑似狂犬病死亡病例的实验室检测和确诊
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|个人分类:|系统分类:|关键词:狂犬病,荧光抗体（FA）试验；ELISA；RT-PCR,检测,确诊,麻痹型,标准
2008245461464
作者：明平刚1，徐葛林1，严家新（通讯作者）1，吴 杰1，任长庆2，董平国2
& FAELISA-RT-PCR
& FAELISART-PCRRT-PCRMega3.1Ⅰ
& WHOFART-PCR FA
FAELISART-PCR
&&&&&&&&&&&&&
40%Guillain-Barre
FART-PCR FA
1.1.1 & 2007525520075718
20075221542007525
1.2.1 &FAELISA
1.2.2 &0.3g&10110&l
1.2.3 &RT-PCR
1.2.4 &DNANMEGA3.1neighbor-joining(NJ)NGenBank
2.2ELISA& ELISAELISA
ELISAA4500.061ELISAA4502.091
2.3 病毒分离：将死者脑组织样品接种1日龄乳鼠后，所接种的乳鼠于12天后出现拱背、松毛、麻痹等狂犬病发病症状，出现症状至死亡为1-3天。处死发病乳鼠，取其脑组织分离得到狂犬病毒，命名为CQH07。
2.4 RT-PCR& RT-PCRRT-PCR1500 bp
&N1-363MEGA3.1GenebankNJCQH075CTN
WHOIII咬伤或抓伤，或被可疑的疯动物的唾液污染粘膜，暴露后预防除了包括正确的伤口处理和使用狂犬病疫苗以外，还包括使用抗狂犬病血清（免疫球蛋白）。从本病例的病史资料来看，从狂犬病暴露后的处治方法方面考虑，造成本病例死亡的主要原因是&
目前，与狂犬病相关的实验室检测方法主要有以下四类,其中以前三种方法较常用：
一，抗原检测，包括荧光抗体（FA）法检测抗原和快速狂犬病酶联免疫吸附法（ELISA）检测抗原；
二，核酸检测，即RT-PCR法扩增并鉴定狂犬病毒核酸；
三，病毒分离，包括细胞培养分离病毒和乳鼠接种分离病毒；
四，抗体检测，包括特异性抗体检测和中和抗体检测。　　
认为FA技术&是狂犬病诊断的金标准，但其准确度依赖于检查人员的专业经验、荧光标记抗狂犬病病毒抗体的质量以及荧光显微镜的质量&。
在本病例中，我们对该死亡病人的脑组织样品首先进行了抗原检测和核酸检测，抗原检测（FA和ELISA）显示为阴性，而核酸检测（RT-PCR）却显示为阳性。在这种情况下，我们进一步采用了第四种方法即乳鼠的颅内病毒分离法。将病人脑组织悬液接种乳鼠后，乳鼠发病。在随后对乳鼠脑组织的检测中，上述抗原和核酸检测的三种方法检测的结果均为阳性。
分析此病例，综合病史资料和全部实验室检测的结果，首先可以确定该病例为狂犬病死亡病例，这可以从以下几个方面来判断：
1，从流行病史上看，有被犬咬伤的经历；2，从发病和死亡时间上看，被咬后15天发病，发病后3天死亡，符合狂犬病发病的临床诊断标准[1]；3，从实验室检测结果上看，病毒分离和随后的抗原检测以及RT-PCR检测的结果均可以证实为狂犬病毒感染；4，对该病毒分离株的N基因序列与相关街毒株和疫苗株的系统进化树分析表明，Ⅰ与早先在同一地区分离的街毒株有较密切的亲缘关系但又不完全相同，进一步确证有狂犬病病毒存在同时排除了实验室污染的可能。
但是，此病例又有它特殊的地方，从发病到死亡的时间较短（仅为3天），临床症状不是特别典型，同时显示有肺部感染的症状。我们推测可能是患者肺部并发的细菌感染或其他病毒感染加速了此狂犬病病人死亡的进程。由于死者脑组织中狂犬病毒繁殖时间偏短，病毒的拷贝数可能偏低，结果导致用常规抗原检测方法未能检测出抗原，而检测灵敏度更高的RT-PCR方法却可能检测到极微量的狂犬病毒核酸。另一种解释是病人脑组织的各个部分病毒复制的数量可能有差别，特别是在病毒复制的时间较短的情况下，对病毒感染在脑中的数量分布规律尚了解不多，取样的随机误差也可能造成检测结果的差别。所以在检测结果为阴性时，多次取样、重复检测可能进一步降低漏检的发生率。当然，由于与本病例类似的复杂病例在国内还未见报道，可能还需要更多的病例来证明上述诊断原则的合理性。
我们对本病例的综合诊断结论是，该病例可确诊为狂犬病死亡病例，造成患者死亡的决定因素是狂犬病，但并发的肺部感染可能加快了死亡的进程。WHO认为，FA技术是狂犬病诊断的金标准；但本病例说明，对荧光抗体（FA）法阴性的样品也应持慎重态度，病毒基因组的RT-PCR检测法和病毒分离方法可能较FA法和ELISA法更灵敏。在某些复杂情况下，只有多种检测方法的联合运用和综合分析才能得到狂犬病检测的更可靠的结论。
由于狂犬病是一种致死性疾病，一旦发病，100%死亡，所以狂犬病的诊断结果往往关系重大，必须持特别慎重的态度。本实验室根据以往的大量临床检测实验的经验，目前已初步建立了疑似狂犬病脑组织样品实验室检测的常规程序：首先对疑似狂犬病脑组织样品进行FA和ELISA试验（这两项试验通常可在半天内完成），若FA和ELISA试验结果均为阳性，则可以判定为狂犬病，可在当天发出检测报告；若这两种试验的结果有一种或两种均为阴性时，则对疑似狂犬病脑组织继续进行RT-PCR试验和/或病毒分离试验。只有当后两种方法的检测结果也均为阴性时，才作出狂犬病毒阴性的结论。
对疑似狂犬病脑组织样品进行FA和ELISA试验结果均为阳性的病例，我们通常在当天就作出确诊狂犬病的结论并发出检测报告。对于这类样品，因狂犬病病毒分子流行病学科研工作的需要，我们在发出检测报告后，会对全部样品继续进行大量的检测和分析工作，包括病毒分离、RT-PCR、病毒基因序列测定和分析等。全面回顾这些后续检测的结果，迄今未发现有需要更改当初发出的检测报告的情况。
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没有被动物咬伤、抓伤或经粘膜感染就不会被感染上。
人被患狂犬病的动物咬伤、抓伤或经粘膜感染均可引起狂犬病，在特定条件下也可以通过呼吸道气溶胶传染。
狂犬病毒不耐热，在50℃时1小时，100℃时2分钟即可灭活；对酸、碱、新洁尔灭、福尔马林等消毒药物敏感；70%酒精、0.01%碘液和1%-2%的肥皂水亦能使病毒灭活。
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北京检验检疫局张鹤晓研究员主持相关信息成功并通过了鉴定。用传统的检测方法，检测时间至少应2天，而该技术将TaqMan快速荧光RT-PCR检测技术用于动物源性狂犬病病毒的快速检测，4个小时就能得到检测结果，为及时发现携带狂犬病病毒的犬猫争取了时间。同时，这种检测方法可检测样品中极微量的病毒。与传统的普通RT-PCR检测方法相比较，该方法的灵敏度可提高100倍左右。此外，这种检测方法还克服了传统检测方法中对犬猫脑组织切片实施检测导致的方法繁杂、灵敏性差的弊端。
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　感染者发病时呈高度兴奋状态，并伴有发热、头痛、恐怖不安、惊风怕声、肢体发麻、吞咽困难，一旦喝水即引起严重痉挛等症状，出现恐水现象，故又称“恐水症” 3-5日后，病人转入麻痹、昏迷状态，最后呼吸、循环衰竭而死。
人被狂犬咬伤，应立即清洗伤口，可用20%肥皂水、去垢剂、含胺化合物或清水充分洗涤。清洗后，尽快注射狂犬病毒免疫血清。
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北京检验检疫局张鹤晓研究员主持研发成功并通过了鉴定。用传统的检测方法，检测时间至少应2天，而该技术将TaqMan快速荧光RT-PCR检测技术用于动物源性狂犬病病毒的快速检测，4个小时就能得到检测结果，为及时发现携带狂犬病病毒的犬猫争取了时间。同时，这种检测方法可检测样品中极微量的病毒。与传统的普通RT-PCR检测方法相比较，该方法的灵敏度可提高100倍左右。此外，这种检测方法还克服了传统检测方法中对犬猫脑组织切片实施检测导致的方法繁杂、灵敏性差的弊端。
没有被动物咬伤、抓伤或经粘膜感染就不会被感染上。
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这个不是我熟悉的地区助你判断有没有传染狂犬病的可能性
助你判断有没有传染狂犬病的可能性
我的博客原先想是涉及医疗文化多个方面的，但现在成为狂犬病咨询专业户，被恐狂读者的问询所紧密包围，而且问者的问题答案显而易见，完全可以通过阅读解决的，但他们就是不愿动脑筋，认真阅读和思考，只求别人下判断。多数问者甚至不提自己居住的地点和环境，动物饲养的方式和动物的状态，令人无法提出意见。但是，尽管你的问题可能有特殊性，但是如果你仔细阅读这些材料，相信大都能够解决。
狂犬病传染的基本前提
首先必须明确以下要点：
狂犬病是患狂犬病动物的唾液（或神经组织）中的狂犬病毒，通过咬伤的伤口或粘膜进入人体使人传染的。传染的途径主要是咬伤，抓伤很少。
②&&狗猫得狂犬病也是由患狂犬病的动物传染的，所以不曾被其他患病动物咬伤过的宠物，是不会传染狂犬病的。
③&&在长期没有发生狂犬病的城市小区里，只要养主负责任对动物管理很好，一般不会传染狂犬病。
应当了解的狂犬病的基本知识
在我国，狂犬病几乎都发生在农村乡镇，或小城镇和城乡结合部，特别是在南方的省、区。而较大一些城市（不包括其所属郊县）多少年来几乎都没有报告过狂犬病。
狗猫传播狂犬病主要是咬伤引起的。如果在上述①的背景下，被自家或邻居的无病或健康狗猫舔舐或唾液沾染，没有意义。抓伤轻度未出血或浅表抓伤者，可局部涂2.5%碘酒（家庭应备的非处方药，药店出售）。重度抓伤出血较多者，除立即冲洗外，去医院就诊。
健康的狗不带狂犬病毒。患狂犬病的动物除了外观变化外，如毛无光泽、显得较脏，流口水，并有行为异常，如原是温驯的动物变得有攻击性，粘人的变得与人疏离，都容易观察到。被确诊或可疑狂犬病的动物抓伤或舔毛舐破损皮肤或粘膜，才需要作为暴露处理。
抚摸患狂犬病的狗猫或者接触其血液、尿或粪便都不构成暴露，无须采取预防措施。
4. 狂犬病毒在环境中迅速灭活，迄今没有确证接触动物唾液的污染物，吃下污染的食物或饮水传染狂犬病的例子。
狂犬病不会通过空气传播，哪怕你与流浪狗或患狂犬病的狗近距离接触。国外有在密闭的实验室里操作高浓度的狂犬病毒材料和进入大量蝙蝠栖息的洞里传染狂犬病的报告，但这只是个别的特例，与你无关。
蝙蝠传染狂犬病主要发生在美洲，每年人的病例报告很少，亚洲即使有也极少。据报告我国也检出蝙蝠感染，没有病例报告。所以不必担心，除非你确实被蝙蝠咬伤，需要暴露处理。
除非病人的器官移植，否则人的狂犬病不会传染给健康人。多年前非洲一个国家报告3例护理病人的亲属密切接触后患病，但可靠性遭受质疑，学界没有当回事。
你接触的狗猫有没有患狂犬病的可能性？
下列情况下的动物咬伤可以参考：
① 大城市内的家养狗猫；
② 狗猫的来历清楚，饲养在家，不散放在外流浪；
③&这狗猫不曾接触过疑似狂犬病的狗，或无被来历不明的狗咬伤过；
④&动物无生病的表现或行为异常，被咬事出有因，如强拉硬拽、戏弄、动物护食、护子或被弄疼；
⑤& 动物接种过有效的狂犬病疫苗；
⑥& 疾病控制中心告知近年当地未发生狂犬病；
⑦&&咬伤已10天以上，狗猫健康如常。
第①-⑤条在被咬或接触的当时即可知道，有这5条即可完全放心（如果不知道是否接种疫苗也不必紧张），加上疾病控制中心告知当地没有狂犬病，则可安心。如果有第⑦条，不论有无①-⑤条，都可以放心，排除传染狂犬病可能性。
希望大家举一反三，如有疑问建议向当地疾病控制中心和医院传染科进行咨询或就诊。
今后凡在上述解说内容可以找到答案的，不再回答问题。
已投稿到：
以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。→ 防疫站的物品上会有狂犬病毒等病毒吗？
防疫站的物品上会有狂犬病毒等病毒吗？
来自内蒙古
健康咨询描述：
我去防疫站打狂犬疫苗，里面有不少人打狂犬疫苗。然后我手碰了手把手，还有防疫站医生的桌子和手。然后额头有一个痘痘，我给挠破了，会不会感染狂犬病啊？&我担心之前有狂犬病人碰到防疫站的东西，防疫站有狂犬病毒残留在物品上，我碰到了防疫站物品上，关键是打针的那个工作室。、然后挠破痘痘会把病毒带进去:
想得到的帮助：
想知道接触到防疫站打针室里面的桌子，医生的手，手把手等，在挠破脸上的痘痘会感染狂犬病毒或者HIV之类的吗？
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