L-精氨酸激活离体永生化肝细胞LO_2内源凝血八因子外源表达机制及信号通路的研究--《重庆医科大学》2014年硕士论文
L-精氨酸激活离体永生化肝细胞LO_2内源凝血八因子外源表达机制及信号通路的研究
【摘要】：目的利用L-精氨酸加入人离体肝细胞L02培养基中，使得L02中内源凝血因子VIII（coagulation factor VIII,FVIII）重新表达，进而研究L-精氨酸激活L02中内源FVIII重表达的调控机制和信号通路。
方法将L02分为加药组，对照组，抑制剂组和空白抑制剂组，加药组加入L-精氨酸（终浓度为15mM）,对照组用同体积的灭菌水取代L-精氨酸培养，抑制剂组在加入L-精氨酸前3小时加入L-NAME（终浓度为100mM），空白抑制剂组则只加入终浓度为100mM的L-NAME,分别培养12h、24h、36h、48h和60h。用RT-PCR方法检测L02中人FVIII基因、iNOS基因、HNF1A基因、HNF4A基因、C/EBP alpha基因、NF-kappaB基因、I-kappaB alpha基因、CREB基因和sGC alpha3基因的转录水平，Western blot检测L02中人FVIII、常规I-kappaB和磷酸化I-kappaB的表达情况，PKA磷酸化检测试剂盒检测实验体系中PKA磷酸化变化水平，双虫荧光素酶（dual luciferase）实验检测FVIII启动子上游调控序列的转录活性，MSP (methylation special pcr)实验检测FVIII启动子上游调控序列的甲基化水平。
结果RT-PCR显示，加药组L02中人FVIIImRNA的转录，对照组、抑制剂组和空白抑制剂组均无人FVIIImRNA的转录，加药组iNOS、HNF4A、NF-kappaB、I-kappaB alpha和CREB的转录水平均有上升，HNF1A、sGC alpha3和C/EBP alpha转录水平均下降，对照组、抑制剂组和空白抑制剂组这些基因转录水平均无明显变化;Western blot显示加入L-精氨酸后，磷酸化I-kappaB表达量明显增加，其他组别则无此变化； PKA检测试剂盒显示加药组PKA磷酸化水平明显增加，其他组别无明显变化；双虫荧光素酶实验显示加药组人FVIII启动子上游调控序列的转录活性明显增加；MSP实验显示FVIII启动子上游调控序列的甲基化水平发生明显降低，去甲基化水平明显增加。
结论L-精氨酸一方面通过NO-cGMP-PKG信号通路进而激活MAPK信号通路，导致人FVIII基因启动子上游调控相关的转录因子表达发生变化从而激活人离体肝细胞中内源人FVIII的表达，另一方面L-精氨酸通过NO胁迫诱导人FVIII基因启动子上游调控序列的去甲基化从而激活下游人FVIII的表达。
【关键词】：
【学位授予单位】：重庆医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：R554.1【目录】：
英汉缩略语名词对照5-7摘要7-9ABSTRACT9-12前言12-15第一部分 L-精氨酸激活 L02 细胞中凝血因子 FVIII 的机制和信号通路15-41 1 实验材料15-21 2 实验方法21-31 3 结果31-38 4 讨论38-41第二部分 L-精氨酸激活 L02 细胞中凝血因子 FVIII 的表观遗传学研究41-45 1 实验材料41 2 实验方法41-43 3 结果43-44 4 讨论44-45第三部分 真核质粒 pGL3-F8 的构建与鉴定45-48 1 实验材料45 2 实验方法45-46 3 结果46-47 4 讨论47-48全文总结48-51参考文献51-59文献综述59-65致谢65-66攻读硕士研究生期间发表的学术论文66-67
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【参考文献】
中国期刊全文数据库
李兴武;[J];蚌埠医学院学报;2003年01期
周忠江,叶海燕,吴赛珠,孟素荣;[J];第一军医大学学报;1999年06期
周忠江,孟素荣,吴赛珠,周可祥,叶海燕;[J];第一军医大学学报;2000年03期
宋景春;[J];国外医学(分子生物学分册);1999年03期
陈瑗,周玫;[J];生命的化学;1999年01期
章丹丹;刘俊;Ferid M卞卡;;[J];现代生物医学进展;2007年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库
刘利本;平家奇;李佳佳;刘妍;王韵篪;张雪梅;;[J];安徽农业科学;2010年17期
陈敏;冯立;杨季国;程东庆;;[J];浙江中医药大学学报;2009年03期
刘嘉馨;钟锐;王红;郑立恒;郑忠伟;杨群身;;[J];中国输血杂志;2008年07期
宋晓晶;张栋;马慧敏;王淑友;李顺月;;[J];中华中医药杂志;2011年09期
任艳丽;高冬梅;;[J];中国地方病防治杂志;2006年06期
王庆志,戴景兴,韩培立,原林;[J];第一军医大学学报;2004年08期
徐雷艇,王美美;[J];中华风湿病学杂志;2003年05期
袁海;[J];国外医学.泌尿系统分册;2004年02期
陈小霞;苏首勋;王全锋;李举跃;马永志;;[J];工业卫生与职业病;2011年01期
赵阳,徐霞;[J];广州医药;2005年04期
中国博士学位论文全文数据库
徐雪晶;[D];华中科技大学;2010年
刘乃刚;[D];北京中医药大学;2011年
范延红;[D];第四军医大学;2002年
李金贵;[D];中国农业大学;2001年
毕秀丽;[D];沈阳药科大学;2005年
臧莹安;[D];南京农业大学;2006年
何军;[D];华中科技大学;2007年
陈欣戬;[D];福建医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库
李会恩;[D];成都中医药大学;2010年
刘利本;[D];延边大学;2011年
刘羽燕;[D];华中科技大学;2009年
朱丽;[D];南京医科大学;2001年
孙素群;[D];第三军医大学;2002年
刘志元;[D];山西大学;2004年
徐雷艇;[D];东南大学;2004年
陈蓉;[D];苏州大学;2005年
卓丽玲;[D];四川农业大学;2005年
郑立颖;[D];甘肃农业大学;2006年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库
莫振兆,王立毅,彭晓东,孙杰,吴金波;[J];广东医学;1999年02期
董为人;[J];国外医学.输血及血液学分册;1997年03期
李辉,李俭春,江时森,唐朝枢;[J];金陵医院学报;1994年01期
马新亮;臧益民;;[J];心血管病学进展;1989年02期
汪洁,孙眉月,陈黎勤,余钟声,俞锡林;[J];中华儿科杂志;1998年12期
黄颖秋，萧树东，张德中，莫剑忠，彭延申;[J];中华肝脏病杂志;1998年02期
王成彬,童红莉,沈文梅,田亚平,汪德清,蒋赐恩,谷峰;[J];中华医学检验杂志;1997年03期
王成彬,田亚平,沈文梅,江朝光,汪德清,蒋赐恩,王彩云,格日乐;[J];中华医学检验杂志;1997年05期
黄铁群,林耀广,陈勇,朱元珏,罗慰慈;[J];中国医学科学院学报;2000年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库
陈铎葆,贺明盟,张雷;[J];锦州医学院学报;2001年03期
庄岩,王文治;[J];中华普通外科杂志;1999年05期
高锐;刘凌霄;;[J];山东医药;2014年21期
王斌;黄进;叶志能;;[J];氨基酸和生物资源;2007年03期
罗旭松,岑瑛;[J];中国修复重建外科杂志;1997年02期
符布清,樊燕蓉,裴芸,陈进贵,倪庆桂;[J];现代预防医学;1999年01期
林列坤;邓小燕;赵阳;;[J];检验医学与临床;2010年21期
刘晓雷,崔华东;[J];中国分子心脏病学杂志;2002年06期
刘俊达;;[J];国外医学情报;1995年22期
罗海吉，何志谦，邱仞之，孙峻松;[J];营养学报;1996年04期
中国重要会议论文全文数据库
黄琳;蒋宗勇;林映才;郑春田;王丽;汪仕奎;高开国;杨雪芬;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年
游金明;瞿明仁;叶帅;黎观红;潘珂;;[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
谭碧娥;肖昊;曾黎明;王婧;李光燃;印遇龙;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年
吴信;印遇龙;伍国耀;;[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年
聂新志;蒋宗勇;林映才;郑春田;周桂莲;陈芳;;[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
骆雪;张春勇;李美荃;安清聪;陈克嶙;郭荣富;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年
续倩;蒋宗勇;林映才;郑春田;汪仕奎;王丽;杨雪芬;高开国;;[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十一次全国动物营养学术研讨会论文集[C];2012年
吴信;高运苓;袁晓雪;周锡红;耿梅梅;黄瑞林;印遇龙;吴信;高运苓;;[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会“回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集[C];2009年
黄琳;蒋宗勇;林映才;席鹏彬;马现永;;[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
高开国;蒋宗勇;;[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库
高新;[N];中国化工报;2007年
郭安定;[N];医药养生保健报;2005年
成舸　武力;[N];中国畜牧兽医报;2014年
晓明;[N];中国医药报;2008年
胡宇芬;[N];湖南日报;2009年
刘莹;[N];医药养生保健报;2006年
麦国荣;[N];中国医药报;2002年
海红;[N];医药经济报;2004年
;[N];中国高新技术产业导报;2002年
徐铮奎;[N];中国化工报;2001年
中国博士学位论文全文数据库
曾黎明;[D];湖南农业大学;2012年
赵颜忠;[D];中南大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库
韦云威;[D];济南大学;2014年
马慧娟;[D];河北医科大学;2003年
张峥艳;[D];苏州大学;2013年
朱重阳;[D];重庆医科大学;2012年
温泉;[D];重庆医科大学;2014年
袁文金;[D];汕头大学;2003年
卢妍;[D];江南大学;2014年
陶帅;[D];江南大学;2011年
李岩;[D];中国医科大学;2002年
郭志辉;[D];天津医科大学;2006年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号基因编辑技术定点修复凝血因子9突变治疗血友病
　　日,《EMBO Molecular Medicine》杂志在线发表了华东师范大学生命科学学院上海市调控生物学重点实验室刘明耀、李大力课题组与海南医学院附属医院马艳琳课题组等研究人员利用CRISPR/Cas9基因编辑技术定点修复成年B型血友病小鼠模型中F9基因突变，缓解凝血功能障碍的研究。论文题目为：CRISPR/Cas9‐mediated somatic correction of a novel coagulator factor IX gene mutation ameliorates hemophilia in mouse。
　　B型血友病是X染色体连锁的遗传性血液系统疾病，主要是由于编码凝血因子9（FIX）的F9基因发生突变导致凝血功能障碍。目前主要依靠不断补充外源FIX达到缓解和治疗的效果，不但费用高昂，而且与大多数遗传疾病一样无法根治。B型血友病根据FIX活性不同可以分为轻度、中度和重度三类。重症B型血友病患者体内FIX的活性低于正常人的1%，常出现严重的自发出血；中度患者FIX活性为正常人的1-5%，通常由小创伤导致出血。理论上来说只要将患者FIX活性提高到正常人的1%以上就会极大缓解病人的凝血障碍，因此血友病模型一直是基因治疗的经典模型，通过导入外源基因的方式开展了一系列临床研究，取得了重要进展。通过外源病毒导入F9 cDNA的方法存在潜在风险，是否能通过原位修复突变基因达到治疗效果还没有相关报道。
　　刘明耀、李大力研究组通过与海南医学院合作，在一个B型血友病家系中发现了FIX的新型Y371D突变（小鼠中对应氨基酸位点为381），通过Cas9技术构建了模拟人类突变的F9Y381D等3种具有不同凝血活性的B型血友病小鼠模型。随后，通过尾静脉注射将Cas9/sgRNA及对应的同源重组修复模板导入成年F9Y381D小鼠体内，成功地在0.56-2.84%的肝细胞中完全修复F9基因突变，显著缩短活化部分凝血活酶时间（aPTT），极大提高了断尾失血实验中F9Y381D血友病小鼠的存活率。在国际上率先证明了通过Cas9基因编辑技术原位修复F9基因突变治疗B型血友病的可行性，也为基因编辑技术应用于单基因遗传病的治疗提供了有力的实验支持。本研究从致病基因的发现，到动物模型验证，再到基因治疗，为Cas9基因编辑技术在精准医学中的应用提供了一个经典范例。该课题是刘明耀、李大力课题组在《Nature Biotechnology》和《Nucleic Acids Research》等杂志发表的一系列基因编辑相关研究的延续，为转化医学研究提供了重要参考。
　　该课题由华东师范大学、海南医学院附属医院、上海市奉贤区中心医院以及上海邦耀生物科技有限公司合作完成，华东师范大学博士生关玉婷和海南医学院附属医院马艳琳博士为论文第一作者，马艳琳、刘明耀和李大力为论文共同通讯作者，该研究获得了科技部、自然科学基金委和上海市相关基金的支持。
（若分享按钮出现问题，请先登录校园网关） 上传我的文档
 下载
 收藏
该文档贡献者很忙，什么也没留下。
 下载此文档
正在努力加载中...
基因修饰的人脐带间充质干细胞介导人凝血因子Ⅸ的体内外表达.pdf
下载积分：1000
内容提示：基因修饰的人脐带间充质干细胞介导人凝血因子Ⅸ的体内外表达.pdf
文档格式：PDF|
浏览次数：0|
上传日期： 12:55:25|
文档星级：
该用户还上传了这些文档
基因修饰的人脐带间充质干细胞介导人凝血因子Ⅸ的体内
官方公共微信与人凝血因子Ⅷ相关的文献报道
医学百科提醒您不要相信网上药品邮购信息！
百科词条： （最后修订于 22:12:44）[共4068字]摘要：人凝血因子Ⅷ药典标准品名中文名人凝血因子Ⅷ汉语拼音RenNingxueyinziⅧ英文名HumanCoagulationFactorⅧ定义、组成及用途本品系由健康人血浆，经分离、提纯，并经病毒去除和灭活处理、冻干制成。含适宜稳定剂，不含防腐剂和抗生素。1&基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水，器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。生产过程中不得加入防腐剂或抗生素。2&制造2.1&原料血浆2.1.1&血浆的采集和质量应符合“血液制品生产用人血浆”的规定。2.1.2&血浆应无凝块、无纤维蛋白析出，非脂血，无溶血。2.2&原液2.2.1&采用经批准的生产工艺由冷沉淀分离制备。2.2.2&经纯化、超滤、除菌过滤即为人凝血因子Ⅷ原液。2.2.3&原液检定按3.1项进行。2.3&半成品2.3.1&配制按成品规格配制，并加入适宜稳定剂。2.3.2&半成品检定按3.2项进行。2.4&成品2.4.1&分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2&分......&&&
相关文献：&随着国家经济的发展，医疗水平的进步，社会保障体系的健全，我国大陆地区甲型血友病发病率正呈大幅上升趋势，用药需求也随之逐年增加。但目前我国生产人凝血因子Ⅷ产品的能力却远远满足不了患者的需求。今年两会期间，全国人大代表军事医学科学院生物工程研究所所长陈薇将提出&保障血友病患者用药，推动价拨冷沉淀工作的建议。甲型血友病是以出血倾向为主要表现的一种疾病，患者往往因关节及深部肌肉发冻干人凝血因子Ⅷ浓制剂制造及检定规程　　本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的新鲜血浆分离、提纯、冻干并经病毒灭活制成。主要成份为人凝血因子Ⅷ及少量纤维蛋白原，含适量枸橼酸钠，不含防腐剂。本品对缺秒人凝血因子Ⅷ所致的凝血机能缺陷具有纠正作用，专供防治甲型血友病患者的出血症状。　　1制造　　1.1制造要求　　1.1.1对血浆的要求　　1.1.1.1所用之血浆来源应符合《原料血浆采集（单采血浆术）规程》要求《中华血液学杂志》2007年第28卷第9期血友病A是一种单基因遗传病，基因治疗有可能根治本病，因此，近二十年来国内外在血友病A基因治疗的研究方面做了大量工作，取得了一定进展，但总的效果并不理想，焦点是凝血因子Ⅷ（FⅧ）的表达量低作者：日中国医药报5欧洲药品监管局（EMEA）日前对患者和医疗专业人员发出警告表示，一些曾经用过重组人凝血因子Ⅷ治疗A型血友病的患者产生了针对此治疗的抗体，结果导致这些患者的出血不能得到有效控制。EMEA表示，在严重的血友病患者体内抗体产生的风险高于那些中度或轻度的血友病患者。如果患者以前未接受过凝血因子的治疗，则注射凝血因子产生抗体可以看作是免疫系统对外源性蛋白的自然应答，但是在多学杂志》2007年第28卷第9期血友病A是一种单基因遗传病，基因治疗有可能根治本病，因此，近二十年来国内外在血友病A基因治疗的研究方面做了大量工作，取得了一定进展，但总的效果并不理想，焦点是凝血因子Ⅷ（FⅧ）的表达量低，表达持续时间短。所以，研究FⅧ基因表达的调控，以提高其表达水平，延长表达时间，是当前和今后血友病A基因治疗研究的重点和方向。中国研究者观察了白细胞介素6（IL-6）在体外对人FⅧ炎病毒、伪狂犬病毒、脑心肌炎病毒、人类免疫缺陷病毒，人血白蛋白采用巴氏消毒法，狂犬病人免疫球蛋白采用低pH常温孵放法，静注人免疫球蛋白、静注人乙肝免疫球蛋白采用低pH/巴氏消毒法；人纤维蛋白原、人凝血因子Ⅷ采用有机溶剂/去污剂与干热法灭活病毒的验证资料，统计3批样品多个取样点的残余病毒滴度均值、标准差与变异系数，制作灭活病毒动力曲线图并进行分析。结果人血白蛋白巴氏灭活VSV与Sindbis病毒，H性感染的疗效。北京天坛生物制品股份有限公司组织胺人免疫球蛋白用于病毒性感染、预防麻疹和传染性肝炎。上海生物制品研究所人胎盘血白蛋白治疗创伤性、出血性休克、严重烧伤及低蛋白血症。上海生物制品研究所人凝血因子Ⅷ防治甲型血友病的出血症状。华兰生物工程有限公司人凝血酶原复合物主要用于治疗先天性和获得性凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ缺乏症。海莱士血制品有限公司、华兰生物工程有限公司狂犬病人血白蛋白用于狂犬病的防治。发展生物制药。以泰邦、中泰、泛特尔等企业为依托，引进优强企业，发展胎盘多肽注射液、人凝血酶原复合物、乙型肝炎人免疫球蛋白、人神经生长因子注射液等生物制品。推动人纤维蛋白原临床研究和申报生产，开展人凝血因子Ⅷ、炭疽免疫球蛋白（一类新药）的创新研究和产业化。开展药物设计筛选、药效及安全性评价、药代动力学等关键技术攻关，突破药物合成、结晶纯化、剂型工艺等产业化技术。大力开发预防、诊断重大传染病的新型疫苗日SOURCE:EmergencyMedicineJournal医学空间（）10月30日消息—近期发表在《EmergencyMedicineJournal》上的一篇文章指出，对于重组活化人活化凝血因子Ⅶ（rFVIIa）在急诊情况的应用，急诊科医生应该对此进行权重分析。rFVIIa因作为强有力的止血药在大出血以及危及生命的出血中备受关注。rFVIIa最初被美国FDA近日已批准一种新的重组Ⅷ因子Xyntha，该产品不含人或者动物组织成分。Xyntha主要用于控制和预防A型血友病的出血和术后预防性应用。它采用无白蛋白的方法和纳米过滤技术生产，是唯一的在生产过程中用完全合成提纯方法的Ⅷ因子产品，据FDA称，这种技术有望进一步减少从该产品中感染疾病的风险。以前所有重组Ⅷ因子产品的纯化方法，因采用了来源于鼠细胞系的单克隆抗体，故理论上存在感染的可能。然而，日中华血液学杂志2006Vol.27No.3P.170-1727（北京）为了建立凝血因子Ⅷ(FⅧ)基因内含子22的ⅩbaⅠ多态位点高特异的基因连锁分析法，并应用于血友病A(HA)家系中孕妇携带者检测及产前基因诊断。研究者用长距离PCR特异性扩增206个无血缘关系个体中FⅧ基因内含子226.2kb片段并进行ⅩbaⅠ酶切，计算ⅩbaⅠ多态性位点的基因频率和多态信息量；用内含子22日中国药网33一项具有自主知识产权的重大科研成果“表达凝血Ⅷ因子新的重组质粒”日前在石家庄牛满江实验室诞生。据介绍,实验室科研人员在世界著名生物学家牛满江院士的率领下,经过艰苦攻关,近日成功研究出表达凝血Ⅷ因子的一种新的重组质粒,这为生产治疗血友病的药物“基因重组人的凝血Ⅷ因子”奠定了基础。在不久的将来,我国的血友病患者有望用上价廉质优的国产药。该科研项目在国内是首创,在世界激因子、注射用重组人干扰素α2b、冻干鼠表皮生长因子、外用冻干重组人表皮生长因子、注射用重组链激酶、注射用重组人白介素-2、注射用重组人生长激素、注射用A群链球菌、注射用重组人干扰素α2b、冻干人凝血因子VⅢ、冻干人纤维蛋白原、间苯三酚口服冻干片等冻干药品获准上市。截止2000年2月，美国FDA已批准的生物技术药共计76个。冷冻干燥技术最早于1813年由英国人Wollaston发明。1909年S友病治疗用药——贝赋、任捷新品上市会在北京举行，世界血友病联盟（WFH）成员的六家国内血友病治疗中心代表及全国多位位该领域医学专家共同出席。作为目前为止全球唯一上市的重组人凝血因子Ⅸ产品——贝赋和拥有更先进工艺的重组人凝血因子Ⅷ产品——任捷，这两个产品在中国的同时上市将为中国的血友病患者在按需治疗、预防治疗和手术的过程中提供快速有效的止血和安全的治疗方案。　　九成血友病患者可能被漏诊　　血友病属无中国人用药经验，只能根据国外上市情况推荐用量、剂量范围及用药间隔，难免产生不良反应，“我们是招募中国人做临床受试者，一旦研发成功，将缓解原研药昂贵且供不应求的情况。”　　凝血七因子（注射用重组人凝血因子VIIa）的原研药是丹麦诺和诺德公司的“诺其”，2010年开始进入中国市场，虽然产品价格高昂（规格为1.2mg（60KIU）/支的诺其价格约7000元），但依旧满足不了市场需求。目前尚无国内企业中华血液学杂志2004Vol.25No.9P.513-518为了评价携带人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的重组AAV2病毒(rAAV2/hFⅨ)肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效，中南大学学者用rAAV2/hFⅨ体外转导BHK-21、C2C12细胞后,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果转导24h后在细胞上清中即可检测到h浆采集后，应在6小时内冻结，置-20℃以下保存,保存效期应不超过2年。三?血浆贮存除另有规定外，血浆采集后，应在6小时内快速冻结，置-20℃以下保存，保存期自血浆采集之日起应不超过3年。用于分离人凝血因子VIII的血浆，保存期自血浆采集之日起应不超过1年。联系人：郭中平联系方式：Fax：010-E-mail：.cn二〇〇八年八月十三日抄送：国家入市场后，将比同类进口药价格低十倍以上。未来，该药物市场空间将超百亿。据了解，我国血友病患者使用的药物可分为血液制品类和基因类两种，2005年，我国将血液制品类药物纳入甲类目录，2009年，重组人凝血因子（基因工程类药物）被纳入医保乙类目录。但现实问题是，血液制品药物急缺而基因类药物又用不起。一直以来，基因工程类药物均为进口药物，像拜科奇这样的进口药，即便是60%比例的报销，一瓶500单位/毫升日中华血液学杂志2004Vol.25No.9P.513-518为了评价携带人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)基因的重组AAV2病毒(rAAV2/hFⅨ)肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效，中南大学学者用rAAV2/hFⅨ体外转导BHK-21、C2C12细胞后,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果转导24h后在传病史。临床诊断：（1）肛瘘；（2）血友病？日患者因需再次手术，请中国医学科学院天津血液学研究所专家会诊：经过该所系列凝血检查，诊断为甲型血友病，予以凝血因子Ⅷ试验治疗，输注人凝血因子Ⅷ（商品名:康斯平；华兰生物工程股份有限公司生产；批准文号：国药准字S0IU后5min，抽静脉血检测凝血因子Ⅷ活性；结果：输前，凝血因子Ⅷ活性测定为3.2%（参考值50%～拜耳公司日前宣布开始启动一项Ⅲ期干预性试验，该项研究旨在评价用于血友病A治疗的试验用化合物BAY94-9027。设计PROTECTⅧ（通过直接聚乙二醇化的长效rFⅧ来预防血友病A患者）旨在考察重组人凝血因子Ⅷ（rFⅧ）BAY94-9027是否能延长预防出血的持续时间以及在预防性使用时是否能降低输注频率，同时是否还具有治疗急性出血事件的能力。设计BAY94-9027旨在延长rFⅧ的循环半衰期，并同时况：使用哌拉西林钠/舒巴坦消炎、抗血友病球蛋白Ⅷ因子使用，红细胞悬液。自手术后第4天～手术后10天20～200ml&咖啡样脓液引出。肛门通气手术后48h。因手术前使用冷沉淀14个单位（相当于2800IU凝血因子Ⅷ），手术后每12h使用冷沉淀6个单位。测定FⅧ：C，1～4天42.6～49.03。以后每12h使用5个单位（有时与冻干人凝血因子Ⅷ交替使用），测定FⅧ：C15.94～28.9激因子、注射用重组人干扰素α2b、冻干鼠表皮生长因子、外用冻干重组人表皮生长因子、注射用重组链激酶、注射用重组人白介素-2、注射用重组人生长激素、注射用A群链球菌、注射用重组人干扰素α2b、冻干人凝血因子VⅢ、冻干人纤维蛋白原、间苯三酚口服冻干片等冻干药品获准上市。截止2000年2月，美国FDA已批准的生物技术药共计76个。冷冻干燥技术最早于1813年由英国人Wollaston发明。1909年S因绵羊，羊奶里含的抗胰蛋白酶可以控制人体组织生长。1996年，以色列科学家培育出一头叫“吉蒂”的山羊，含有人体血清蛋白基因，可以治疗烧伤、休克和术后的血液损失。中国的转基因羊分泌的乳汁含有活性的人凝血因子LX蛋白，可以治疗血友病。2005年，上海遗传研究所培育出含有人体血清蛋白的转基因试管牛。　　昆虫抗生素　　我国科学家近日从家蝇体内提取出了抗病毒活性蛋白，并有望将其继续分离、纯化出“昆虫抗生素我国这一领域的研究处于国际前沿，为我国畜牧业发展、胚胎和生殖工程以及人类遗传病的防治作出了积极贡献。在转基因动物/生物反应器这一国家重大研究项目中，他与同事们一起成功地研制出我国第一头乳汁中表达人凝血因子IX蛋白的转基因山羊和整合了人血清白蛋白基因的转基因牛。以上成果被两院院士先后评选为1998年和1999年中国科技十大进展之一。　　曾溢滔教授在国内外已发表学术论文400多篇，主编了6部专著，申因绵羊，羊奶里含的抗胰蛋白酶可以控制人体组织生长。1996年，以色列科学家培育出一头叫“吉蒂”的山羊，含有人体血清蛋白基因，可以治疗烧伤、休克和术后的血液损失。中国的转基因羊分泌的乳汁含有活性的人凝血因子LX蛋白，可以治疗血友病。2005年，上海遗传研究所培育出含有人体血清蛋白的转基因试管牛。　　昆虫抗生素　　我国科学家近日从家蝇体内提取出了抗病毒活性蛋白，并有望将其继续分离、纯化出“昆虫抗生素的公牛耳皮细胞成功克隆出了6头牛犊。2001年，杨向中的克隆牛通过自然繁殖，产下健康牛犊。2004年，杨向中二代克隆牛实验获得成功，这也是世界上大动物再克隆实验的首个成功案例。他还完成了世界首例人凝血因子-9和乳铁蛋白双转基因克隆猪、世界首例克隆牛胚胎干细胞系、世界首例使用终极分化的血球颗粒细胞克隆小鼠等多项高水平研究。杨向中在最后的几年时间里，致力于推动治疗性克隆的研究，希望随着克隆技术的发展有大幅提高。”曾溢滔说，这样生产的药物蛋白，成本仅为基因工程的万分之一。而这些珍贵的药物蛋白的市场售价，往往高达1克数千甚至几万美元——实现产业化，将为更多病人带来福音。日，带有人凝血因子IX基因整合的转基因羊在曾溢滔的“动物药厂”诞生；日，能在乳汁中分泌人白蛋白的转基因牛“滔滔”诞生。这两个消息，轰动了中国乃至世界医学界。维持一个拥有500头羊、数百头牛，以及济的不一样！　　院士档案　　曾溢滔，广东顺德人，1939年5月生，1957年毕业于广东省仲恺农业学校，1966年研究生毕业于复旦大学遗传学研究所，1994年当选为中国工程院医药卫生工程学部首批院士。　　在转基因动物/生物反应起这一国家重大研究项目中，他和同事们成功研制出我国第一头乳汁中表达人凝血因子IX蛋白的转基因山羊和整合了人血清蛋白基因的转基因牛，被评为1999年中国科技十大进展之一。作者：5%～30%为宜。还可以用三腔管压迫止血，有效率在90%。同时采取药物治疗，静脉应用生长抑素，垂体加压素，抑酸药物及质子泵制剂等。（2）改善凝血机制，降低再出血率发生：现代医学研究证明，肝硬化病人凝血因子合成障碍，脾功能亢进可使得人体凝血机制发生变化：①血小板在脾脏滞留并破坏增多，可引起血小板数量及功能发生异常［3］。②内源性和外源性凝血途径受影响，肝脏合成凝血因子血浆浓度活性降低，同时抗凝活性【摘要】目的人凝血因子(coagulationfactorⅩⅢ，FⅩⅢ)是参与凝血过程的最后一个凝血因子，又称纤维蛋白稳定因子(fibrinstabilizingfactor)。它可使松弛的纤维蛋白单体发生交联而变得紧密而坚固。遗传性FⅩⅢ缺陷症是一种罕见的常染色体隐性遗传病，发病率约1/2000000。其临床特点为：以脐带出血最常见；外伤后延迟性血肿形成，女性患者易反复流产，男性患者有不育等。随着我国成分输血技术的发展，新鲜冰冻血浆及冷沉淀的制备和应用随之被推广。冷沉淀是从新鲜冰冻血浆中提取冷沉淀物，是主要的FⅧ制剂，已是中心血站和血液中心供应临床的主要血液成分之一。　　新鲜冰冻血浆作为冷沉淀的原料来源，也作为主要血液成分，确保其中的FⅧ∶C水平至关重要，是质控标准之一，目前国内要求FⅧ∶C浓度0.7IU/ml。FⅧ是不稳定的凝血因子，其生物半衰期为8～12h，于56℃中30min即浓、粘、聚的特点，使血液粘稠血流速度缓慢，当血红蛋白增多至220~250g/L，血流速度明显缓慢，由此而引起乳酸及其他酸性物质在血液内堆积。ChohanI.S认为[2]高原地区的人凝血因子Ⅹ、Ⅻ及Ⅴ、Ⅷ均升高，凝血时间和凝血酶原时间缩短，红细胞压积升高，血液处于高凝状态，从而造成周围深静脉、肝、肾、肺、脑等多脏器血栓形成。上矢状窦是脑静脉窦血栓中最常见的发生部位,其临床表现无特异性，单凭合并获得性血友病A的临床、实验室资料及治疗进行分析，并进行文献复习。结果患者为25岁女性患者，SLE病史5年，此次以腹痛为主诉，实验室检查活化部分凝血活酶时间(APTT，135.3s)明显延长，因子Ⅷ促凝活性(FⅧ:C，0.9%)减低，因子Ⅷ抑制物滴度26.1U/ml(Bethesda法)，B超及核磁共振均发现子宫后血肿，治疗上给予激素、因子Ⅷ制品、大剂量丙种球蛋白等，临床症状及实验室指标明显好5日入院。患者在14岁时四肢皮肤瘙痒，同时出现皮疹，诊断为皮炎。2个月后右手臂发生血肿。以后右臂与右腿反复发生血肿，每年发作2～4次。每次发作前或发作时均有皮疹加剧。用激素治疗有效，未输过血浆或因子Ⅷ浓缩物。近1年来患者不规则地服用地塞米松与环磷酰胺，已自行停药1个月余。入院前4天患者又出现右腿肿胀疼痛并逐渐加剧，不能活动。既往史：14岁以前无出血倾向。家族史：患者的父母为姨表兄妹，但无出血现象基因诊断与基因治疗是基因工程在医学领域发展的一个重要方面。1991年美国向一患先天性免疫缺陷病（遗传性腺苷脱氨酶ADA基因缺陷）的女孩体内导入重组的ADA基因。获得成功。我国也在1994年用导入人凝血因子IX基因的方法成功治疗了乙型血友病的患者。在我国用作基因诊断的试剂盒已有近百种之多。基因诊断和基因治疗正在发展之中。　　这时期基因工程的迅速进步得益于许多分子生物学新技术的不断涌现。包括：核酸的基因诊断与基因治疗是基因工程在医学领域发展的一个重要方面。1991年美国向一患先天性免疫缺陷病（遗传性腺苷脱氨酶ADA基因缺陷）的女孩体内导入重组的ADA基因，获得成功。我国也在1994年用导入人凝血因子Ⅸ基因的方法成功治疗了乙型血友病的患者。在我国用作基因诊断的试剂盒已有近百种之多。基因诊断和基因治疗正在发展之中。　　这时期基因工程的迅速进步得益于许多分子生物学新技术的不断涌现。包括：核酸的化，位于马里的人福非洲药厂已正式投产运营;公司的国际化业务进入快速发展阶段。报告期内，公司在研化学一类新药注射用磷丙泊酚钠、化学一类新药注射用苯磺酸瑞马唑仑、化学三类新药咪达唑仑口服溶液、生物制品人凝血因子VIII等先后获得临床试验批件，盐酸美金刚片ANDA申请获得美国FDA批准，其他在研项目按计划稳步推进，整体研发水平不断提高。为加强研发实力，2015年公司引进海外专家7人，医药专业博士11人;激因子、注射用重组人干扰素α2b、冻干鼠表皮生长因子、外用冻干重组人表皮生长因子、注射用重组链激酶、注射用重组人白介素-2、注射用重组人生长激素、注射用A群链球菌、注射用重组人干扰素α2b、冻干人凝血因子VⅢ、冻干人纤维蛋白原、间苯三酚口服冻干片等冻干药品获准上市。截止2000年2月，美国FDA已批准的生物技术药共计76个。　　冷冻干燥技术最早于1813年由英国人Wollaston发明。1909肌的高效专一性表达。Cox等用这两个增强子使Dystrophin在肌肉的表达量增强50倍，完全纠正了mdr鼠肌肉病理变化，而且无付作用，最近，Yao等用2分MCK增强子（-）使人凝血因子IX在肌母细胞中得到高效表达。　　3、乳腺专一性表达　　在乳腺中专一性表达的基因有β酪蛋白，乳清酸蛋白，鼠乳腺肿瘤病毒，三都调控区中的负调控片段决定他们仅在乳腺组织中表达。　　4、黑色素瘤专一性日临床耳鼻咽喉科杂志2005年第21期5（玉溪）为了检测喉鳞状细胞癌(LSCC)中环氧化酶-2(COX-2)、兔抗人Ⅷ因子(FⅧ)的表达，探讨LSCC中COX-2的表达情况与微血管密度(MVD)的关系。研究者利用免疫组织化学SABC法检测42例LSCC及其癌旁正常组织中COX-2、FⅧ的表达，分析其与LSCC的临床病理、淋巴结转移、MVD等的关系。结果LSCC组织中COX-2（ESC）向肝细胞分化的培养体系，通过表观遗传学修饰及多种诱导因子联合贯续应用，获得了更加接近于成熟肝细胞的胚胎干细胞源性肝细胞，并进一步证实所获得的胚胎干细胞源性肝细胞具有在体外合成并分泌凝血因子Ⅷ、Ⅸ的能力。这种共表达凝血因子Ⅷ、Ⅸ的胚胎干细胞源性肝细胞，或可为血友病替代疗法提供新型“种子”细胞来源。研究结果发表在最新一期《中国药理学报》上。　　血友病是目前临床上最常见的先天性凝血障碍性疾病值应为5.6～6.6。　　溶液的透光度　　取本品1.0g，加水20ml溶解后，照分光光度法（附录ⅣA），在430nm的波长处测定透光率，不得低于98.0％。　　氯化物　取本品1.0g，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液7.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.007％）。　　硫酸盐　　取本品2.5g，依法检查（附录ⅧB），与标准硫酸钾溶液1.5ml制成的对照液比较，不得更浓（0.006％）。血友病是一种凝血功能障碍性疾病，患者难以靠自身机能止血，多年来其治疗方法主要是补充用人血浆制取的凝血因子Ⅷ，但这可能导致患者经由该血液制品感染肝炎病毒等病原体。为了显著降低这种感染风险并减少对献血的依赖，德国拜耳公司正努力推广一种利用转基因细胞和蔗糖等制成的新药。拜耳公司发布的新闻公报说，其科研人员利用转基因技术培育出一种仓鼠肾脏细胞，在无菌容器中用特制营养液对其培养后，该细胞便能合成凝血因子Ⅷ日新华网新华网北京11月11日电血友病是一种凝血功能障碍性疾病，患者难以靠自身机能止血，多年来其治疗方法主要是补充用人血浆制取的凝血因子Ⅷ，但这可能导致患者经由该血液制品感染肝炎病毒等病原体。为了显著降低这种感染风险并减少对献血的依赖，德国拜耳公司正努力推广一种利用转基因细胞和蔗糖等制成的新药。　　拜耳公司发布的新闻公报说，其科研人员利用转基因技术培育出一种仓鼠肾脏细胞，在无皂化值（附录ⅦH）为25～35。　　羟值　本品的羟值（附录ⅦH）为22～38。检查　　溶液的澄清度与颜色　　取本品1.0g，加水20ml溶解后，溶液应澄清无色；如显色，与黄色6号标准比色液（附录ⅨA）比较，不得更深。　　炽灼残渣　不得过0.3％（附录ⅧN）。　　重金属　取本品2.0g，依法检查（附录ⅧH第三法），含重金属不得过百万分之十。类别表面活性剂。贮藏密闭，在阴凉干燥处保存。作者：自动采集5。　　氯化物　取本品0.10g，加热水30ml，在水浴中加热10分钟，趁热滤过，残渣用热水15ml洗涤4次，合并滤液与洗液于100ml量瓶中，放冷，加水稀释至刻度，摇匀；取10ml，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.20％）。　　干燥失重　　取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过8.0％（附录ⅧL）。　　炽灼残渣　　取本品1.0g，依法检查（为无色的半透明结晶、白色颗粒或白色结晶性粉末；无臭，味极酸；在干燥空气中微有风化性；水溶液显酸性反应。　　本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶，在乙醚中略溶。检查　　硫酸盐　　取本品1.0g，依法（附录ⅧB）检查，与标准硫酸钾溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.03％）。　　草酸盐　　取本品1.0g，加水10ml溶解后，加氨试液中和，加氯化钙试液2ml，在室温放置30分钟，不得发生浑浊。　无臭，味微酸；有引湿性；水溶液显酸性反应。　　本品与水、乙醇或乙醚能任意混合，在氯仿中不溶。　　相对密度本品的相对密度（附录ⅥA）为1.20～1.21。检查　　氯化物　取本品3.0g，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.002％)。　　硫酸盐　　取本品2.0g，依法检查（附录ⅧB），与标准硫酸钾溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.010％)。法测定（中国药典1995年版二部附录ⅥH），pH值应为1.5～3.0。溶液的澄清度取本品1.0g，加水10ml溶解后，溶液应澄清、无色。硫酸盐取本品0.60g，依法检查（中国药典1995年版二部附录ⅧB），与标准硫酸钾溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.05%）。有关物质取本品，加甲醇制成每1ml中含20mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，如甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液作为5。　　氯化物　取本品0.10g，加热水30ml，在水浴中加热10分钟，趁热滤过，残渣用热水15ml洗涤4次，合并滤液与洗液于100ml量瓶中，放冷，加水稀释至刻度，摇匀；取10ml，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液2.0ml制成的对照液比较，不得更浓（0.20％）。　　干燥失重　　取本品，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过8.0％（附录ⅧL）。　　炽灼残渣　　取本品1.0g，依法检查（
特别提示：本文内容为开放式编辑模式，仅供初步参考，难免存在疏漏、错误等情况，请您核实后再引用。对于用药、诊疗等医学专业内容，建议您直接咨询医生，以免错误用药或延误病情，本站内容不构成对您的任何建议、指导。
关于医学百科 | 隐私政策 | 免责声明
链接及网站事务请与Email:联系
编辑QQ群：8511895 （不接受疾病咨询）}