虎纹捕鸟蛛毒素—1（HWTX—1）镇痛作用的实验研究
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虎纹捕鸟蛛毒素—1（HWTX—1）镇痛作用的实验研究
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虎纹捕鸟蛛毒素—I单残基突一R20A—HWTX—1的化学合成与性质分析
优质期刊推荐两种虎纹捕鸟蛛毒素的结构与功能研究--《湖南师范大学》2003年硕士论文
两种虎纹捕鸟蛛毒素的结构与功能研究
【摘要】：
1：虎纹捕鸟蛛(Ornithochoctonus huwena)是分布在我国西南部山区的一种蜘蛛新种。它的粗毒中含有多种活性成分，其中研究的比较深入的多为神经毒素，如HWTX-Ⅰ，这是一种突触前膜N型钙离子通道阻断剂；毒素HWTX-Ⅳ，它是一种TTX敏感型钠离子通道阻断剂；另外，还从虎纹粗毒中纯化出一种具有凝集活性毒素成分SHL-Ⅰ。
本文报道从虎纹捕鸟蛛(Ornithochoctonus huwena)粗毒中，应用阳离子交换和反相高效液相色谱的方法分离到一种胰蛋白酶抑制剂，命名为Huwentoxin-Ⅺ(HWTX-Ⅺ)。经MALDI-TOF质谱技术鉴定，HWTX-Ⅺ的相对分子质量为6166.2。经DTT还原，进一步用碘乙酰胺修饰其相对分子质量增加到6514.2，根据一个半胱氨酸修饰相对分子质量增加58，我们可以推断HWTX-Ⅺ有三对二硫键。利用Edman降解气相蛋白质测序仪测得HWTX-Ⅺ的一级结构NH2-IDTCRLPSDRGRCKASFERWYFNGRTCAKFIYGGCGGNGNKFPTQEACMKRCAKA-COOH，理论相对分子质量比质谱测得的值多6，由此也可以确定六个半胱氨酸形成了三对二硫键。利用传统的酶促动力学研究方法通过分光光度计测定HWTX-Ⅺ对胰蛋白酶的抑制活性发现HWTX-Ⅺ对胰蛋白酶有很强的抑制作用，完全抑制的摩尔抑制比为1：1。用Lineveaer-Burk作图法得知，该抑制剂属竞争性抑制类型，具ki值为2.938×10~(-8)mol/L(以BAPNA为底物)。用BIAcore X测定该毒素和胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶的生物大分子相互作用，同样发现HWTX-Ⅺ对胰蛋白酶有很强的抑制作用，对胰凝乳蛋白酶也有中等程度的抑制作用，解离常数Kd分别为1.23×10~(-10)mol／L和1.14×10~(-7)mol/L。HWTX-Ⅺ对昆明种小白鼠第四脑室注射表现出较强的活性，其半致死量LD_(50)为256ug／kg。由此可见，HWTX-Ⅺ也是一种哺乳动物中枢神经毒素。
【关键词】：
【学位授予单位】：湖南师范大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2003【分类号】：Q51【目录】：
缩写表(中英文对照)3-4
中文摘要4-6
英文摘要6-8
第一章 前言--蜘蛛多肽神经毒素的研究新进展及Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构与功能研究进展8-24
第二章 虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅺ的分离纯化、一级结构的测定及其生物学功能的研究24-60
2.1 材料、试剂和仪器25-26
2.2 实验方法26-31
2.3 实验结果31-42
2.4 讨论42-43
2.5 进一步研究设想43-60
第三章 HWTX-Ⅻ的分离纯化与一级结构测定60-73
3.1 材料、仪器和试剂60-61
3.2 实验方法61-64
3.3 实验结果与讨论64-70
3.4 进一步研究设想70-73
原创性声明74
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京公网安备75号[每日农经]性情凶猛 虎纹捕鸟蛛赚钱有门道(下)()
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　　金龙康药用动物养殖公司负责人 罗永林
　　虎纹捕鸟蛛，是一种原始蜘蛛，主要分布在我国广西的树林里，因背部的花纹棕黄相间像虎纹而得名。它们个体大，毒性强，依靠两个像镐一样的毒牙生扑捕食，在野外，它们轻而易举地捕捉到蟾蜍蚂蚱甚至是反应灵敏的鸟类。那么在人工养殖环境下，它们又吃些什么呢？
　　罗：喂大麦虫，特别爱吃大麦虫，连皮啊脂肪啊都吃了。你看我拿镊子夹都夹不走。
　　对于一般的捕食性动物，黄粉虫是取代蟋蟀蚂蚱等昆虫的最佳饲料，它们蛋白质含量高，又易于消化。而在罗师傅的养殖场，为什么给虎纹捕鸟蛛喂大麦虫呢？
　　罗：主要黄粉虫太小，不好抓。效果要比大麦虫差一点，黄粉虫市场一斤十几块，大麦虫几十块。
　　虽然价格有悬殊，但是大麦虫的体积是黄粉虫的三到四倍，营养也更丰富。
　　罗：吃黄粉虫吃几条。大麦虫就吃一条。成本和大麦虫基本上悬殊不大。
　　大姐：一个星期喂一次，现在天冷了半个月喂一次，都是我一个人喂，两天就喂完了。
　　罗：是冷血动物，吃的少，一年6毛钱。
　　李：喝水，一个星期喷一次。
　　吃的少，喝的少，这虎纹捕鸟蛛还真好养，不过对于温度的要求，他们可是够苛刻的。
　　罗：温度低于多少我们就要考虑开空调。现在温度是多少？
　　为了方便管理，一般同样年龄的蜘蛛被放在一起饲养，可是王玥发现，都是两年的蜘蛛，这大小差别也太明显了吧！
　　罗：分别公母。
　　不仔细看还真是分不清公母，那您说这雌雄蜘蛛长期过着分居生活怎么繁育后代呢？
　　罗：人工繁育，秋季交配，公蜘蛛发出求爱信号。
　　罗：交配完就要把它们拿走，母蜘蛛这个时候攻击力最强。
　　有时候甚至交配还没完，雄蛛就成了母蜘蛛的腹中餐。有专家认为这也许是因为雌蜘蛛一次受精可以终身产卵，所以交配完也就没有存在的必要了。
　　记者：不过也有人认为，雄蜘蛛的牺牲可以为雌蜘蛛提供更多的营养和遗传基因。真是可怜天下蜘蛛爸爸心！
　　罗：王玥你看！
　　王玥：啊，您怎敢拿在手上啊！
　　这是蜘蛛脱的壳，蜘蛛就是靠脱壳长大的。一年脱壳2次，它脱壳特别完整。被孵化出的小蜘蛛将经历6次蜕皮后长成成年蜘蛛，一般可以活到18——20周岁。既然蜘蛛蜕皮这么完整，那它们吐出的丝也很有特点吧？
　　记者：虎纹捕鸟蛛个头大，可要按照比例，那肯定比一般的蜘蛛吐出的丝要大气一些，最起码得粗不少，当然这是我想象的啊，也没准人家粗中有细呢！
　　还真让王玥猜着了，虎纹捕鸟蛛的丝不仅不粗，而且结的网又细又密，它们表面光滑，像一层透明的薄纸，是目前所知蜘蛛丝中直径最小的纳米级丝纤维。 不过这些丝可不是从嘴巴里吐出来的，而是这个像尾巴一样的小东西。
　　教授：虎纹捕鸟蛛的纺织器更靠尾部一些。
　　是不是有种吞云吐雾的感觉？虎纹捕鸟蛛的蛛丝虽然韧劲儿比不上普通蛛丝，不过还是有很多人看好它的发展前景，来自上海的独立艺术家方威和杨静为了寻找这种蛛丝已经多次来到罗师傅的养殖场。
　　方：第三次来了，也是第一次见到这个艺术品。
　　杨：很兴奋。
　　方：这种丝很细腻、很野性。
　　杨：我们就觉得不太好采集的这个材料是不是可以作为艺术创作的材料。
　　方：我们会放上泥土，做成人物的形状。
　　目前他们已经与罗师傅正式建立了长期合作关系。
　　方：买了一些蛛丝，交了定金，觉得很值。
　　罗：以前都是当做废物成桶成桶的扔了，没有想到竟然能卖到一盘100元的价格，对我们来说，也是意外的收获！
　　这些蛛丝还真是用途不小，不仅如此，虎纹捕鸟蛛在捕获猎物时，除了毒牙以外，蛛丝可是第二大法宝！
　　教授：虎纹捕鸟蛛的蛛丝对于捕捉猎物有辅助作用。
　　没想到这些看似轻薄的蛛丝竟能把蜈蚣缠成一个球的形状！不过既然毒界两大高手蜈蚣和蝎子都不是虎纹捕鸟蛛的对手，那么它的毒性到底有多强大？又是否会对人类的生命构成威胁呢？
　　教授：一个螯牙喷出的毒液就足以让猎物致死，不过对人类的生命不构成威胁。
　　虽说不会致死，但是虎纹捕鸟蛛毕竟是身手矫健的毒虫，如果您没有充分掌握好技术不能控制它们的话，可不要轻易尝试养殖啊！
　　罗：我们没有被咬过，就是因为知道它的厉害，格外注意。
　　虎纹捕鸟蛛的这些毒液，用途可不小！它含有数百种多肽类的毒素，其中神经毒素的价格甚至比黄金还要贵，它目前在市场上的需求量还不是很大，更受大家关注的，是它的药用前景。
　　教授：比方说我们找到的这个毒素，我们发现它有镇痛的活性，这个是乙蛋白抑制剂我们发现他有治疗胰腺炎的功效，如果是开发出药物他确实有效，肯定有很大的市场前景。
　　虽说虎纹捕鸟蛛有毒，不过在越南柬埔寨等地，油炸毒蜘蛛还是当地著名的特色小吃。而主持人柳岩品尝了捕鸟蛛并大赞又香又嫩。
　　王玥记者：那么油炸之后的虎纹捕鸟蛛口感到底如何呢？
　　专家：油炸之后，高温破坏毒
　　油炸捕鸟蛛目前在广东广西的部分饭店里也被当做一道美食在销售。不过，在罗师傅的养殖场里，虎纹捕鸟蛛还另有市场。
　　罗：我们主要是蜘蛛干品。
　　经过这一系列工序以后，蜘蛛干品就可以销售了。不过目前全国各地的中药材市场上只有一些常见的花蜘蛛干品，那么罗师傅的这些虎纹捕鸟蛛干品又卖到哪里呢？
　　罗：主要销往一些肿瘤医院，诊所患者。
　　中医：本草纲目记载蜘蛛可以入药。
　　目前这些蜘蛛干品的市场价格为3800元一公斤，像这样个体较大的蜘蛛一般重5克，可以卖到20元一个。
　　罗：需求量不是特别大，不过有些来求购蜈蚣的看了之后带些样品回去。
　　经销商：第一次见，带点样品回去，要能卖掉肯定买。
　　罗师傅从2008年养殖虎纹捕鸟蛛开始已经陆续投入200万了，很长一段时间都没有销路，直到2012年，一共卖了120公斤蜘蛛干品，才真正见到了收益！ 目前一年的收入大概在70万元左右。
　　罗：镊子桶土每个蜘蛛等设备40元每个蜘蛛，2万只就是80万，不过这些都是一次性的投入，每年的养殖成本在40万，不稳定看以后的走向情况。
　　专家：市场存在局限性。
　　目前我国对虎纹捕鸟蛛的利用还处于探索与尝试初期阶段，对它的需求量并不稳定，据记者调查所知，每年也就140公斤，所以专家建议养殖户一定要谨慎介入虎纹捕鸟蛛的养殖，即使养殖，也要在数量上进行控制，并且要掌握好养殖技术，做好安全防范，提前找好销售市场，谨慎投资！
　　金龙康药用动物养殖公司负责人 罗永林
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虎纹捕鸟蛛毒素的提取及毒力的测定虎纹捕鸟蛛,捕鸟蛛,海南捕鸟蛛,越南捕鸟蛛,捕鸟蛛图鉴
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虎纹捕鸟蛛毒素的提取及毒力的测定
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