RNA可不可以在65度下剧烈振荡用CTAB法提植物RNA时,开始的一步要将液氮研磨的粉末放在65度的CTAB提取液中10分钟,再加氯仿异戊醇洗涤,然后可以剧烈振荡以促进洗涤效果吗?
默先生0231
可以涡旋震荡.
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标题: CTAB法个人总结
摘要: 　　总RNA提取方法的步骤基本相似，主要包括以下几个基本步骤：一是彻底破碎果实细胞的细胞壁；二是使核蛋白复合体中的蛋白质充分变性，实现核蛋白与核酸的分离；三是抑制内源和外源RNA酶的活性，防止RNA受污染而
　　总RNA提取方法的步骤基本相似，主要包括以下几个基本步骤：一是彻底破碎果实细胞的细胞壁；二是使核蛋白复合体中的蛋白质充分变性，实现核蛋白与核酸的分离；三是抑制内源和外源RNA酶的活性，防止RNA受污染而降解，这是能否成功获得高质量RNA的关键步骤；四是将RNA与DNA、蛋白质、多酚、多糖等物质分离；五是检测RNA的质量。
酚类物质很容易被氧化成褐色的醌类物质，醌类物质与 RNA不可逆的结合，不仅会使RNA的活性丧失，而且在苯酚和氯仿抽提时还会使RNA丢失。
　　常见的去除多糖的方法有低浓度乙醇沉淀法、醋酸钾沉淀法、氯化锂沉淀法、提高缓冲液的氯化钠浓度等。
在用苯酚、苯酚：氯仿进行抽提后，加入1/15体积3 mol/L NaAc ( pH 5.2 ) 和1/5体积的无水乙醇混匀,并在冰浴上静置2 h，可促进多糖沉淀而不聚沉RNA分子；最后在弃除多糖沉淀的上清液中加入终浓度为0.3 mo1/L的NaAc和3倍体积的无水乙醇，并于-70℃下放置3 h后过夜，即可获得高质量的RNA。
　　RNA的沉淀方法很多，如LiC1、异丙醇、NaAc和无水乙醇等。但是前者所得的RNA的产率比后两种方法高很多，且纯度好，没有DNA污染，不需要进行去除DNA的纯化操作，减少了RNA降解的几率；LiC1沉淀大片段RNA的效果好，更适于进行后续的分子生物学试验；而异丙醇沉淀获得的沉淀体积大，导致了多糖和酚类物质的共沉淀作用；1/10体积3 mol/L的NaAc和2.5倍体积的无水乙醇所得的RNA产率较低，且和异丙醇沉淀一样存在基因组DNA的污染，后续的纯化操作提高了RNA提取的成本且增加了降解的机会。
　　CTAB作为离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使RNA得以游离出来，较其他几种更能有效去除多糖和酚类等物质。
　　&-巯基乙醇是一种强还原剂，可以抑制多酚的氧化和酶的水解，释放出细胞中的RNA。可以降低酶类(尤其是氧化酶类)的活性（通过打断多酚氧化酶的二硫键使之失活），还可以抑制RNA酶的活性。
PVP是酚类化合物的螯合剂，可与多酚化合物形成复合体，使之不被氧化成醌类物质，有效地防止其与RNA的结合，提高RNA的完整性。
低浓度乙醇可以去除多糖。上清液中加入的无水乙醇可使 RNA沉淀。75％乙醇避免RNA中因含有LiCl而影响反转录的效果。
异硫氰酸胍可以抑制RNA酶、防止RNA的降解。异硫氰酸胍作为强变性剂使核酸一蛋白结构发生变化，并有效解离与核酸的复合体， 与&-巯基乙醇共同对RNase产生强烈的抑制作用，这样能破裂细胞并迅速释放核酸。
LiC1选择性沉淀RNA，沉淀过夜可以有效地去除多糖，进一步除去RNA中的DNA污染。LiCl还可以沉淀剩余的酚类物质。
螯合二价金属离子，抑制RNA酶的活性，防止RNA降解。
-HCl不仅起缓冲作用，还可防止RNA降解。
NaC1溶液可提供缓冲反应环境。
苯酚和氯仿等有机溶剂的提去除蛋白质、多糖和酚类等杂质。苯酚和氯仿等有机溶剂能使蛋白质变性并使抽提液分相，由于RNA溶于水相，因此经离心后即可从抽提液中去除细胞碎片和大部分蛋白质。苯酚在低pH的情况下能促进水相中的蛋白和向有机相分配，从而最大限度的除去总RNA中的蛋白和。
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江苏农业科学 2009年第6期
杉木总 RNA3种提取方法的比较研究
蒋向辉 ，余朝文 ，郝博飞 ，张礼华
1．怀化学院生物工程系，湖南怀化 ．怀化市生物育种与加工技术实验室，湖南怀化 418008
摘要：通过 3种杉木总RNA提取方法的比较试验，找到了一种适用于杉木总RNA提取的新方法。用该方法提取
杉木幼茎总RNA具有正常的光谱吸收，D260 ／D 。 比值为 1．90～2．03，D
比值为2．84―4．04，经琼脂糖
电泳后，28S和 18SRNA条带清晰，提取的RNA可用于RT―PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建 ，同时该方法还适
用于青蒿总RNA的提取。
关键词：杉木；总RNA；提取方法；比较
中图分类号：Q789
文献标志码：A
文章编号： 81―02
在植物材料 cDNA文库建立、Nouthern印迹杂交中均需
1．2 方 法
要高质 量 的 RNA。杉 木
CunninghamialanceolataLamb．
1．2．1 TRIZOL法 TRIZOL试剂购 自Invitrogen公司，其
Hook 组织由于具有坚硬的细胞壁，细胞 内含有大量的多糖、 RNA提取方法参照试剂说明书，得到的总 RNA溶于 5O l
胶质和酚类等次生物质
，并且 RNase含量较高，分离的
DEPC溶液中。
RNA易降解 ，给 RNA的提取和分离带来了许多困难。有关
1．2．2 异硫氰酸胍 一酚法 试剂盒购 自长沙安 比奥生物技
植物 RNA提取方法的研究报道多为草 本植物，而杉木总
术有限公司，其 RNA提取方法参照试剂说明书，得到的总
RNA提取的有关报道较少 。用传统的方法提取杉木组织
RNA溶于50txlDEPC溶液中。
中的RNA，通常获得的 RNA产量低，且易降解，不宜用作体
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