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川乌HPLC指纹图谱的研究_林华
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高效液相测定紫花高乌头中乌头碱的含量
&&&&&&摘要：乌头碱是存在于川乌、草乌、附子等植物中的主要有毒成份。口服纯乌头碱0.2mg即可中毒，3&5mg可致死。民间常用草乌、川乌等植物来泡制药酒。&&&&&&目的测定紫花高乌头中乌头碱的含量，为蒙药紫花高乌头中乌头碱的含量提供检测方法，制定质控标准。方法采用法，Kromasil（250mm&4.6mm，5&m），甲醇?水?三乙胺（71∶29∶0.1）为流动相，流速为1.0ml/min；检测波长235nm。结果乌头碱浓度在29.85～149.25&g/ml范围之间与峰面积线性关系良好，r=0.9997。乌头碱平均回收率为96.52%，RSD=1.19%。结论采用高效液相色谱法测定紫花高乌头中乌头碱的含量，具有分离效果好、简便、结果准确等优点。&&&&&&「关键词」紫花高乌头乌头碱高效液相色谱法紫花高乌头为毛茛科植物紫花高乌头AconitumexcelsumRrichb.的全草，蒙药名为宝日-泵嘎，收载于《中华医学百科全书》（蒙医分卷）《认药白晶鉴》《无误蒙药鉴》中，具有止咳、清肺之功效，主治流感、肺感、肺热、瘟疫等作用［1］，其中乌头碱既是其有效成分，也是其毒性成分。《中国药典》［2］采用比色法检查乌头碱的含量，而本研究建立了以高效液相色谱测定紫花高乌头中乌头碱含量的方法，以控制蒙药材紫花高乌头的质量。&&&&&&1器材1.1仪器依利特UV-230 高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）:UV-230 紫外-可见检测器、P230/P230p高压恒流泵、EC2000色谱工作站。&&&&&&1.2材料紫花高乌头采自内蒙古赤峰市克什克腾旗大局子林场、赤峰市克什克腾旗红山子乡、赤峰市宁城县，经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教授鉴定为毛茛科植物紫花高乌头AconitumexcelsumRrichb.的全草。方法学考察中均采用赤峰市克什克腾旗大局子林场所采集到的样品。乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号308）；甲醇为色谱纯，磷酸、盐酸等试剂均为分析纯，水为双蒸水。&&&&&&2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Kromasil（250mm&4.6mm，5&m），流动相为甲醇?水?三乙胺（71∶29∶0.1）；流速为1.0ml/min；检测波长235nm；进样量20&l。以此条件，乌头碱能与其它成分达到较好分离效果。结果见图1～2。&&&&&&2.2对照品溶液的配制取乌头碱对照品5.9mg，精密称定，置10ml容量瓶中，然后加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含乌头碱0.597mg）。&&&&&&2.3供试品溶液的制备取本品10g，过60目筛，精密称定，加氨试液4ml，苯50ml，超声30min，用酸水（2%盐酸）萃取两次，20ml/次，酸水调pH值为9，用氯仿萃取2次，20ml/次，合并氯仿液，低温减压挥干，残渣用甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中，摇匀，即得。&&&&&&2.4标准曲线的制备精密吸取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5ml对照品溶液分别置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别吸取20&l注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以对照品溶液浓度为横坐标，对照品峰面积为纵坐标，进行线性回归，标准线性回归方程为Y=18.269X-25.583，r=0.9997。实验表明，乌头碱浓度在29.85～149.25&g/ml范围内呈良好的线性关系。&&&&&&2.5精密度实验取供试品溶液，重复进样5次，记录峰面积并计算，结果乌头碱的平均含量为0.0695mg/g，RSD为0.86%。&&&&&&2.6稳定性实验取紫花高乌头供试品溶液在0，1，2，3，4，5，6，9h分别进样20&l，记录峰面积，结果RSD为1.43%，表明乌头碱在9h内保持稳定。&&&&&&2.7重复性实验取赤峰市克什克腾旗大局子林场供试品5份，各约1g，精密称定，分别按样品提取方法提取、测定，结果乌头碱品均含量为0.0671mg/g，RSD为1.78%。&&&&&&2.8加样回收率实验取赤峰市克什克腾旗大局子林场供试品5份，各约5g，精密称定，分别加入乌头碱标准品溶液（0.351mg/ml）1ml，按供试品溶液的方法处理并测定含量，计算加样回收率。。乌头碱平均回收率为96.52%，RSD为1.19%。结果表明本方法准确可靠。&&&&&&2.9样品含量测定取3个批次的样品各两份，每份约10g，精密称定，按&2.3&项下操作，取20&l注入高效色谱仪，以色谱条件测定，计算乌头碱的含量。&&&&&&3讨论中药成分的提取多采用冷浸渗流法、煎煮法、有机溶剂加热回流提取法，但提取的效果不尽相同。曾采用苯加氨试液浸泡，放置过夜的方法，对紫花高乌头进行提取，但效果不甚理想。本实验采用在碱性条件下用苯超声提取，提取液滤过后低温减压挥干。残渣加甲醇溶解后进行色谱分析的方法，本法与上述其它方法比较提取较完全，而且操作简便。同时，采用超声提取即防止成分遇热易分解，又大大提高了提取效率。有作者曾对紫花高乌头根中的二萜生物碱进行了提取与鉴定［3，4］，而采用高效液相色谱法对紫花高乌头中的乌头碱进行测定，尚未见报道。本研究同时建立了蒙药材紫花高乌头的质量控制标准。实验结果显示，采用高效液相色谱法测定乌头碱的含量，结果准确，重复性好，为蒙医药的临床应用提供了更为有效的检测方法。&&&&&&
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关于编辑出版《广东省中药饮片炮制规范》的通知
发布日期：
〕125号文件《关于编辑出版〈广东省中药饮片炮制规范〉及&广东省中药材标准&（第二册）的复函》），授权由我所组织实施此项编辑出版工作。&&&年版一部撰写。）品名为正名，出处以最早记载本名的药学专著为准，如《中国药典》、《中药大辞典》或《中药志》、《中药辞海》等中所记载的药材名称为准，药学专著中未收载的品种名称，则按本省传统习用的名称。）以正名为辞目，之后是饮片炮制品名称，然后是饮片炮制品的汉语拼音名。）以省局颁发该品种的批准文号，在正名辞目之后的右上角。 水分适用于不含或少含挥发性成分的药材的水分测定。适用于含有挥发性成分的药材的水分测定。适用于含有挥发性成分的贵重药材的水分测定。适用于贵重药材的含水量测定。斤=16两=500g。钱=31.25g；1钱=10分 =3.125g；1分=10厘=0.3125g等。注明了贮藏时的要求,其他未注明要求的品种,均系指必须放置于适宜的条件，如：通风干燥处,防霉、防虫蛀、鼠咬等。&&&&&&&&&&&&&& 系是指一般情况下不宜内服使用；凡注明“慎用”的,系指一般情况下虽可内服使用，但应慎重。注意项下所述禁忌和副作用，为主要禁忌和副作用。属中医用药一般常规禁忌，在标准正文中从略。所有图谱要求清晰、真实。性味与归经、功能与主治、用法与用量、贮藏、注意或附注等项内容。 来源与名称,包括科、种、属、药用部位等。以《中国药典》、《国家标准》等法定标准及《中药大辞典》、《中药志》、《中药辞海》等药学专著和最新的、相关的文献资料综合整理编写。炮制品的品质优劣标志。） 说明标准中所鉴别的药材炮制品的显微特征的稳定、专属情况。） 说明理化鉴别和薄层色谱鉴别的专属性及操作注意事项等。） 耐用性试验考察情况说明，并作出评价。） 最后对未列入标准正文的薄层色谱鉴别研究内容、操作逐一加以说明及附上研究试验图谱。） 如采用特殊显色剂时，应写明配制方法；如显色需要在一定时间内观察时，应写明规定观察的时间；如所用展开剂为以不同比例配成的多种溶剂混合溶液时，溶剂的排列顺序应以极性小的在前、极性大的在后的形式书写；当展开剂的比例数字均为整数时，应采用最小公倍数。如“三氯甲烷-甲醇-水（65:35:10）”应写成“三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）”；如展开剂为分层的溶液时，则应说明使用的是哪层溶液。） 薄层色谱日程鉴别的彩色照片（或彩色扫描图）要求：图谱中应有供试品、对照品或对照药材，图谱中不加注文字或符号，编辑文本时在图像外空白处标记溶剂前沿和供试品、对照品或对照药材、等编号。薄层图谱规格要求：高7.5cm、宽5.5cm。色谱成像和记录应采用数码相机或数码摄像设备记录色谱图像，并存储为bmp格式、jpg格式的文件。） 其他鉴别法成分检查 ） 说明制定浸出物或提取物测定项的理由及实测数据。 ） 说明浸出物或提取物所选用的溶剂和方法、限度制定的依据。） 各种浸出和提取条件对浸出量和提取量的影响及变化情况等。） 对已建立的色谱含量测定法和测定指标说明选择依据及目前国内外的研究情况。） 说明仪器名称（包括检测器种类，色谱柱填料、粒度及长度等）、样品来源及批号、对照品来源及批号、所使用试剂情况。） 方法学验证按中国药典2005年版一部附录XⅧ& A《中药质量标准分析方法验证指导原则》的内容，即为：准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性试验。） 样品测定及所有实验考察数据均要求列表表示，并提供限度制定依据） 对未列入质量标准正文的测定方法及操作逐一说明理由并附上研究试验图谱。） 含量测定项的书写格式因测定方法不同而异。书写内容要求准确叙述各项的具体操作，文字简明扼要，层次清楚。如果所用的方法已收载于《中国药典》附录中，应引用附录。如果标准中的含量测定项为两个或两个以上时，应在每项之前加注被测药味或被测成分的名称。） 提供等色谱图要求：色谱图应包括供试品、对照品和阴性对照。均采用工作站记录色谱图，并存储为bmp格式的文件。除特殊情况外，一般在色谱图上除标明对照品的代号或保留时间外，其他峰的保留时间可不在图中标注，色谱图座标须标注清楚。编辑文本时在图像外空白处标记测定成分和供试品来源及批号、被测色谱峰的保留时间、分离度和理论板数。图谱要求：对照品及样品的被测峰高度应在1/3～2/3之间。） 用法一般指煎服，但某些药物宜先煎、后下、冲服、吞服或外用等，也可在此项内加以说明。） 用量系指成人一日的常用量，儿童用量根据情况递减。） 用量的单位规范统一使用中华人民共和国法定计量单位，以“克”表示，其他非法定计量单位，应按规定折算成法定的计量单位。例如：1斤=16两=500g。钱=31.25g；1钱=10分 =3.125g；1分=10厘=0.3125g；） 如某些特殊药物实际的临床用量超过一般的常用量时，可在各品种的各论项下加入“附注”进行说明。注明了贮藏时的要求,其他未注明要求的品种,均系指必须放置于适宜的清洁的容器内,加盖，置通风干燥处,防霉、防虫伤鼠咬。容器的外面均应贴上标签，避免误取或混淆。 为部分实物拍摄图片，由广东省药品检验所根据实物拍摄，每幅彩图均标注中文名和药材拉丁名。）说明中药炮制的目的）细述中药炮制的方法 ） 说明药材炮制中应注意的问题） 说明对炮制场所和用具的要求品名目次、批准文号、页码等内容。）收载毒、剧药剂量与用法，中药汤剂煎法，相反、相畏药物以及其他的配伍禁忌等。）收载本规范在起草中使用的对照品和对照药材。炮制品首字的笔画数顺序排列于该药材的中文名称之下。&&&&&号文，由广东省药品检验所牵头组织编辑出版《广东省中药饮片炮制规范》。 年版一部提出的“中药质量标准分析方法验证指导原则”和《中药新药研究的技术要求》所规定的项目进行，质量标准中需验证的分析方法包括鉴别、检查（杂质或纯度检查）和含量测定三类。对每一类方法要求验证的项目和目的要求都有所不同。 ）形状的观察）大小的观察粒种子紧密排成一行，以毫米刻度尺测量后求其平均值。）色泽的观察）表面特征的观察供试品一般不作预处理,如折断面不易观察到纹理,可削平后再进行观察。）检查炮制品气味时,可直接嗅闻,或在折断,破碎或搓抒时进行,必要时可用热水湿润后检查。）检查炮制品味感时,可取少量直接口尝,或加水浸泡后尝浸出液。有毒药材如需尝味时，应注意防止中毒。）基本要求和TLC或在一个项目中采用不同的测定组合，如HPLC/UV二极管阵列，HPLC/MS，GC/MS等。 ）显微鉴别显微鉴别法的“临时制片技术”有关规定执行。年版P478中有关规定执行。分别按现行版《中国药典》一部附录Ⅱ C显微鉴别法三中的木质化、木栓化、纤维素和硅质化细胞壁的显色鉴别要求进行。显微鉴别法四中的淀粉粒、糊粉粒、脂肪油、挥发油、树脂、菊糖、黏液、草酸钙结晶、碳酸钙结晶和硅质的显色鉴别要求进行。标定其用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜、目镜和镜筒长度时，目镜测量尺每一小格所代表的长度。应先以甘油醋酸试液装片观察淀粉粒、菊糖等，然后再以水合氯醛试液装片观察其他显微特征，最后加热透化或滴加其他试液进行观察，每个步骤的观察结果应作详细记录。～2次，置于70%～90%乙醇中，备用。: 晶纤维（偏光镜）黄柏显微特征（× OLYMPUS& CX-41）一般理化鉴别并写出其化学反应机理。）光谱鉴别在特定的波长（或波长范围）照射下,有最大吸收峰或显特定颜色荧光；或利用药材中某成分的特征基团、（或特征成份）与某种试剂反应后, 在特定的光谱波长照射下,显特定颜色荧光的性质来作鉴别的的方法。年版一部P160)）下观察，显浅蓝紫色或亮绿色的荧光，通常环周部分较明亮。年版一部P81)，加三氯甲烷5ml，振摇，浸渍30分钟，滤过，取滤液点于滤纸上，干后置紫外灯（254nm）下观察，显猩红色至淡猩红色的荧光。年版一部P27)，加乙醚10ml与氨试液0.5ml，振摇10分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，加0.25mol/L硫酸液20ml，振摇提取，分取酸液适量，用水稀释后照紫外-可见分光光度法(附录Ⅴ A)测定，在231nm的波长处有最大吸收。）薄层色谱鉴别& & 或对照药材) 溶液制备的耐用性试验考察。重复制备多份, 根据层析的结果进行考察。应根据具体情况至少变更时间、温度条件制得供试品溶液，考察层析的结果。、2、6、24小时点样，考察层析的。&（或MACKER）高效硅胶板；
～50μm的硅胶G、 以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证均匀、平整和光滑。×10cm或10cm×20cm，如所使用的薄层板需要特殊处理或化学改性的，可采用改性剂浸渍预制板，或与固定相混合铺制等方法制备。、e 两种薄层板考察主斑点的分离度和拖尾情况。并提供实验的照片。，点间距离8～10mm；● 条带状点样，条带宽4～8mm，条带间距离不少于5mm。～15mm；高效板基线距底边8～10mm；左右边距均为12～15mm；μl)μl上下浮动，考察主斑点的分离度。～4μl； ～6μl。& 若需预平衡的展开，可在缸中加入适量的展开剂，密闭15～30分钟，待溶剂蒸气平衡后，迅速放入薄层板，立即密闭，展开。若需预饱和的展开，可在展开缸的内侧放置与展开缸内径同样大小的滤纸，密闭15～30分钟展开，待溶剂蒸气平衡后，迅速放入薄层板，立即密闭，展开。℃～10℃（冰箱）和室温的温度条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况；％ 和 75％的湿度条件下展开，考察主斑点的分离度和拖尾情况。为宜。Ⅳ 展距～8cm；普通预制板展矩为8cm；自制手铺板展矩为8～15cm。&& 紫外灯下检视荧光色谱，或采用适宜显色剂喷雾后检视荧光色谱。紫外灯下检视荧光淬灭色谱。&& 格式.jpg格式的文件。:取本品粉末0.5g，加乙酸乙酯20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。&&&&&&&&&&&&&& 取补骨脂素和异补骨脂素对照品，加乙酸 乙酯制成每1ml含2mg的混合溶（1）手铺硅胶G板）进口高效硅胶G板）进口高效硅胶G板&&&&&&&&&&&& 3ul正己烷－乙酸乙酯（4：1）％氢氧化钾甲醇溶液紫外光灯（365nm）展开前预饱和20分&&&&&&&&&&&&&& ?71%&&手铺硅胶G板、产地①； 2、产地②； 3、产地③； 4、产地④；&&&&&&&&&&& 5、产地⑤； 6、产地⑥； 7、产地⑦； 8、补骨脂素和异补骨脂素对照&?71%进口高效硅胶G板、产地①； 2、产地②； 3、产地③； 4、产地④； 5、产地⑤；6、产地⑥； 7、产地⑦； 8、补骨脂素和异补骨脂素对照）高效液相色谱鉴别及气相色谱鉴别应通过附加一种专属的鉴别试验或指纹图谱来达到总体的专属性要求。则可通过采用色谱的组合,如：HPLC和TLC的组合，或在一个项目中采用不同的测定组合，如：HPLC/UV二极管阵列、HPLC/MS或GC/MS来确认其可能存在的成分。 根不同厂牌的色谱柱，调整流动相比例、柱温等条件等,出具系统适用性试验适用的色谱图，每根柱子平行测定2份以上，计算不同色谱柱的RSD%，考察不同色谱柱的分离度和峰面积响应值的变化情况。根不同厂牌的色谱柱进行考察，调整柱温、进样体积条件等，出具系统适用性适用的色谱图，每根柱子平行测定2份以上，计算不同色谱柱的RSD%，考察不同色谱柱的分离度和峰面积响应值的变化情况。 & 重复制备多份，根据进样检测的分离度和色谱峰的变化情况进行考察。应根据具体情况至少变更时间、温度条件制得不同的供试品溶液，考察分离度和色谱峰的变化情况。。、2、6、24小时进样，考察分离度和色谱峰的变化情况，并计算RSD%。以评价所制得的供试品溶液及对照品溶液的稳定性。预柱滤过净化处理后才能进样进行检测的话,则需应用不同厂家、批号、填料的成型柱进行考核，并详细记录考核结果。）一般应有水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属和砷盐的检查项。各种检查法的具体规范操作及要求可参考《中国药品检验标准操作规范》2005年版。）因品种具体情况另行规定的检查，要说明原因和列出具体数据及限度确定依据。）应注意方法选择的正确性，并写明方法选择的理由。）对含毒性药的品种，应制定已知毒性成分的限量检查。同时应进行方法学验证。）当需要对供试品进行分离和纯化处理时，应先叙述供试品的处理过程，再引用附录，书写时应注意二者之间的文字衔接。）对重金属、砷盐等有害物质的考察，必须至少十批样品数据，视考察结果考虑是否列入正文。一般情况下，重金属限度制订在百万分之二十以下，低于百万分之十以下可不列入正文；砷盐限度制订在百万分十以下，低于百万分之二以下可不列入正文。）浸出物或提取物测定法）浸出物或提取物测定法注意事项年版一部附录X& A和《中国药品检验标准操作规范》2005年版509页进行。）浸出物测定法的选择按要求能通过二号筛,并且需混合均匀。& 份样品同时测定,并且2份的平均相对偏差应少于5%。样品要求和结果计算与水溶性浸出物一致。按要求能通过四号筛,并且需混合均匀。小时）。份样品同时测定,并且2份的平均相对偏差应少于5%。应扣除由平行操作而测得水分的量。）基本要求羟甲基糠醛等。倍后停止测定。）容量法～20ml。滴定液相当于被测成分（用分子式表示）的滴定度（采用四位有效数字）。）光谱法。～0.7之间为宜，吸光度读数在此范围误差较小，制定配制合适的读数浓度。±10）%以内。～800nm范围内波长扫描图谱。年版有关规定进行。）应与对照品一致，同时要求比移值（Rf）在0.3～0.7之间。。；准确度考察，回收率（N≥6）一般要求在95%～105%， RSD%≤5%；精密度考察，重复性试验（N≥6）直接扫描，其RSD%≤3.0%，如需显色后扫描，RSD%≤5.0%。℃～10℃（冰箱）和室温的分离度和拖尾情况；相对湿度在20%和75%时的分离度和拖尾情况。、1、2、4、6、8小时扫描测定，考察变化情况。。“测定法”项的内容包括供试品溶液的制备、测定和计算。当柱温不同于室温时，应标明柱温。外，其余检测器的相关系数应≥0.999；准确度考察，回收率一般要求为95%～105%,RSD%（N≥6）≤3%；精密度考察，重复性（N≥6）RSD%≤3%。种梯度。种时间梯度。。采用成型固相萃取柱应注明品牌必要时增加系统适用性试验。也可以通过柱回收进行考察和评价。值变化的考察。根不同商品规格的色谱柱进行考察，注意每根色谱柱应调整流动相至满足系统适用性实验后测定，测定同一批样品（溶液）的含量，样品至少平行2份，每份进样2针，对照品可取1－2份，提供不同柱分离的色谱图（计算理论板数、分离度及拖尾因子），分别计算样品的含量和柱间的相对标准偏差。℃～30℃）和40℃，记录色谱峰分离情况的变化。小时的稳定性，计算RSD%，一般不得过2%。。；准确度考察，回收率一般要求为95%～105%,RSD%（N≥6）≤3%；精密度考察，重复性（N≥6）RSD%≤3%。根不同商品规格的色谱柱进行考察，出具系统适用性适用的（调整柱温、进样体积等条件）色谱图，及含量测定数据（每次测定平行2份），计算不同色谱柱的RSD%。小时的稳定性，计算RSD%，一般不得过2%。或对照药材) 溶液制备方法的耐用性和所制得的溶液的稳定性及展开环境条件的考察结果及评价等内容。年版一部附录XⅧ A中药质量标准分析方法验证指导原则。即：先后顺序分别为准确度、精密度、专属性、线性、范围、耐用性。）准确度表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。份样品（供试品取样减半，1：1加入对照品）；份（一般为质量标准中供试品取样量的一半），按三种比例加入对照品，设计 3种加样浓度。中间浓度加入量应按1：1比例，高低浓度可选0.5：1、1.5：1的比例。加入的对照品的量要适当，一般不得少于或多于供试品中含有量的1倍（即在1：2和2：1）之间；种不同取样量的供试品，每个取样量各3份，建议结合范围的考察设计成3种浓度。中间浓度应在选定的中间点上，取其半量再按1：1比例加入对照品，其他两个浓度可以选择范围的最高、最低点进行测定；个不同浓度9份样品（样品浓度减半，按0.8：1、1：1、1：1.2的比例加入对照品）。个浓度共9份样品（三个不同浓度，每个不同浓度分别制备3份供试液）测定。＝C－A/B×100%为供试品所含被测成分量）计算值，以及回收率（%）的相对标准偏差（RSD%）或可信限。份供试品测定含量，用6个测定结果进行评价；个不同浓度9份供试品测定含量（3个不同浓度分高中低，每个不同浓度分别制备3份供试品溶液），用9个测定结果进行评价。人用同一设备或同一人用3台不同设备，对同一批（或同一份）样品测定含量。计算不同操作者或不同设备的相对标准偏差。目测无相应斑点为判定标准。）中一般干扰峰面积在5％以下可认为干扰可忽略不计。倍信噪比的浓度，即为检测限。倍信噪比的浓度，重复进样5～6次，计算峰面积的相对标准偏差，规定TLCS＜3%，HPLC/GC＜2%，若偏差太大，应重新配制合适浓度的对照品溶液，进样，计算相对标准偏差。此浓度即为定量限。要求至少5个梯度以上；倍，应大于范围中的高低限浓度区间，计算相关系数。～70%，范围的高限为含量限度上限的130%～150%。考察方法的准确度。～70%至含量限度的 2～5倍以上。考察方法的准确度。份测定数据，计算高低点的相对标准偏差，并满足以下规定TLCS≤5%，HPLC/GC≤3%。：1比例加入对照品后达到所规定的考察浓度。在操作过程中除取样量和进样量可改变外，一般不得改动实验操作中的规定如溶剂体积、提取时间、萃取次数等。如实验结果证明的范围区域不合适，应根据样品情况改变考察区域或改变标准中样品的前处理条件，使适合日后样品可能的含量范围。如以后发现考察范围过小可通过实验数据扩大。 种梯度。根不同商品规格的色谱柱；注意每根色谱柱应调整流动相至满足系统适用性实验后测定，测定同一批样品（溶液）的含量，样品至少平行2份，每份进样2针，对照品可取1－2份，提供不同柱分离的色谱图（计算理论板数、分离度及拖尾因子），分别计算样品的含量和柱间的相对标准偏差。小时，计算不同考察时间峰面积（含量）的RSD值，一般不得过2％。℃。值的影响要求进行考察。针。根不同商品规格的色谱柱进行考察，出具系统适用性适用的（调整柱温、进样体积等条件）色谱图，及含量测定数据（每次测定平行2份），计算不同色谱柱的RSD%。小时的稳定性，计算RSD%，一般不得过2%。种不同品牌的薄层板斑点的分离情况，预制板和自制板均可；～10℃）和一个室温；％）和一个低湿（20％）的影响；&&为了统一复核的要求，规范质量标准的内容，保证检测方法的重现性及限度标准的可行性，规范复核意见的撰写，特制定本指导原则和技术要求。一、标准复核指导原则标准复核除了也应遵循标准起草的“科学、规范、实用”这一总的指导原则外，同时还应突出地遵守以下的原则。（一）复核样品的符合性原则单一品种的复核样品应符合包括3个不同产地的要求，多来源品种应尽可能包含不同基源的药材的要求。（二）标准物质的溯源性原则“标准物质的溯源性”是指标准物质必须使用可溯源的有证物质。实验用的对照品、对照药材或基准物质应为中检所或国家标准物质中心提供的；如为新增的对照品或对照药材应要求起草单位提供相应的研究资料和对照品、对照药材原料，经复核单位组织鉴定或核实后供复核实验使用。（三）实验方法的评价原则复核单位应重点对质量标准中设定的项目和指标的合理性和检验方法的科学性、可行性、以及质量标准的可控性等方面作出评价、以确保药材的内在质量和使用的安全和有效。（四）文字格式的规范原则1、复核单位应严格审查质量标准及起草说明书写的文字格式规范情况，按《国家药品标准工作手册》（中药材标准编写细则）要求，提供完整的质量标准和起草说明（彩色图谱必须用高分辩率纸打印）与复核意见（包括电子文档）。2、报送的显微图、薄层图谱、HPLC或GC色谱图必须规范，显微图和薄层图谱应统一采用数码相机或数码摄像设备摄制，并存储为bmp格式或jpg格式的文件同时标注放大倍数。二、标准复核技术要求（一）名称&&& 应注意核对药材饮片的中文名、汉语拼音、拉丁药名和别名。（二）炮制&应注意核对饮片加工、炮制的完整工艺方法，如浸泡或浸润、炮炙、切制、干燥的工艺等。（三）性状应注意考察药材炮制后的样品的性状与标准草案中描述的是否符合，，包括形状、大小、色泽、表面特征、质地、断面（包括折断面和切断面）特征及气味等的描述是否完整。（四）鉴别应注意复核所建立的鉴别方法是否具专属性、重现性，是否灵敏度高和操作简便。1、显微鉴别（1）应注意显微特征是否易见、稳定、并且专属、易于检出。（2）应注意“临时制片技术” 、显微所用的仪器、用具、试液及操作方法和报送显微图是否符合《广东省中药饮片炮制规范起草指导原则和技术要求》中的有关规定。2、一般理化鉴别应注意考察各类沉淀反应、颜色反应或荧光颜色反应、气体反应等的反应灵敏度、反应的适宜条件。专属性不高的、需特殊试剂和试药或可以用其他鉴别方法取代的，应建议删除。3、光谱鉴别（1）应注意考察所建立的光谱鉴别能否满足专属性的要求，否则，应增加专属性强的色谱鉴别。（2）考察供试品、试剂（试药）的取用量、浓度等是否合适；提取、纯化或显色处理的条件是否合适；鉴别参数（峰位或峰谷波长值、吸收度比值）是否确定合理。4、薄层色谱鉴别（1）重点考察比较采用以下两种薄层板对样品和对照品色谱的分离效果。① 进口的MN高效硅胶板；② 自制手铺板：除特殊情况外，要求采用固定相粒度为10～50μm的硅胶G、 以0.2%羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂，机械涂铺制备，保证薄层板的均匀、平整和光滑。（2）注意展开剂的更换① 应注意通过展开剂的更换,使比移值(Rf值)符合要求，在0.3～0.7的范围内。② 应注意更替展开剂中毒性较大的溶剂。如苯、三氯甲烷等。（3）应注意方法学验证中耐用性条件的考察结果应注意分析供试品溶液及对照品(或对照药材) 溶液制备、溶液稳定性和展开环境条件等方面的耐用性试验考察的结果，用以评价及选取合适的制备方法和能保证分离效果的合适的温度、湿度条件进行展开。保证层析方法的可操作性和重现性, （4）对采用对照药材对照的，应要求检测样品与对照药材的主要特征斑点相一致。必要时，应采用对照品和对照药材双重对照。（5）注意实验结果的规范表述 按《广东省中药饮片炮制规范起草工作指导原则和技术要求》中的“薄层色谱鉴别实例”的表述方式规范表述鉴别结果。正确表述所使用的薄层板的规格、牌子、点样量及点样方式、展开剂、展开方式、显色条件、检视方式、注意事项，斑点的颜色和数量（必要时）等的信息。5、高效液相色谱、气相色谱鉴别均应注意复核考察供试品制备方法是否简便合理，供试液进样量、色谱条件（含色谱柱种类、柱温、流速、梯度、流动相组成及比例、检测器类型和参数）是否合适，专属性和分离度能否达到要求。（五）检查1．应注意考察水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐等需制定限度的项目其限度制定依据的合理性。2．应注意考察所选择方法和实验条件的正确性。 （六）浸出物或提取物1、应注意考察样品的取样量、溶剂及使用量、浸渍方法（冷浸法、热浸法）、浸渍时间、干燥方式等到是否适宜。2、应注意考察选择溶剂和限度制定依据的合理性。3、每份测定结果与平均值的的偏差应在±1%以内。（七）含量测定1、应注意复核方法的专属性和分离度能否达到要求及所选择测定的指标和限度制定依据的合理性2．当选择容量法、分光光度法、色谱法等其他含量测定法时应注意根据药材所含成分的特性，选择合适的方法，并注意通过必要的方法学验证实验，证明所确定的方法的合理性。3．一般测定试验的相对标准平均偏差（RSD）原则上不大于3%，薄层扫描法可允许不大于5%，容量法则只允许不大于1%。三、撰写复核意见基本要求应规范，完整，并包括足够的信息（一）名称应有规范的名称及情况说明。（二）炮制应对炮制的工艺方法进行说明。（三）性状应有符合实物的特征描述及情况的说明。（四）鉴别应有方法的专属性、可行性的说明，耐用性考察实验的结果与评价。对于不足之处应提出改进的意见和建议。（五）检查应有项目设定足够性、项目的可行性和操作方法的合理性的说明。（六）含量测定应有项目设定足够性、项目的可行性和操作方法的合理性的说明。（七）对标准全面的评价1、对所起草质量标准的规范性、合理性作出全面的评价，特别是对含量测定方法学验证的项目、内容、方法等作出正确的、合理的评价。2、最后给出结论性的意见。如综上，质量标准中检验方法基本可行；或者是，综上，建议继续提高完善质量标准，增加或改进XXX鉴别或含量测定项等。&&&←
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