做好免疫组化染色必须注意的问题(5)
导读： （2） 抗体的适应症。 在众多的抗体中，按它们的实际使用范围，把它们分为两个类： 1.适合于冰冻切片，涂片， 细胞培养 片。 2.适合于石蜡切片，冰冻切片，涂片和 细胞培养 片。 （3）选择合适的单克隆或多 克隆 抗
（2） 抗体的适应症。
在众多的抗体中，按它们的实际使用范围，把它们分为两个类：
1.适合于冰冻切片，涂片，细胞培养片。
2.适合于石蜡切片，冰冻切片，涂片和细胞培养片。
（3）选择合适的单克隆或多克隆抗体。
抗体除了分为上述的两个类外，从其克隆的高度讲，也有单克隆和多克隆之分。
1.单克隆抗体，在目前临床常用的抗体当中，大部分都是单克隆抗体。这要归功于生物技术的不断提高。在早些时候，应用于临床的抗体，大多数为多克隆抗体。
2.多克隆抗体，在临床应用的抗体中，还有少部分的抗体为多克隆抗体。
（4）抗体的加入。
这看似很简单的问题，如果处理不好也可导致不同的结果，如果应用自动免疫组织化学染色仪，将程序输入即可，如为手工操作，就必须注意以下的问题：
1.当PBS冲洗完毕后，在加入抗体，如一抗，二抗或三抗。必须将存留于切片上的多余的PBS摔干，但不能让切片干涸，切片干涸，往往可产生非特异性染色，切片上PBS存留过多，将会稀释加入的抗体，影响加入抗体的浓度，同时也将影响最后的结果，如假阴性等。
2.加入的抗体以一滴为佳。
当擦干组织块周边多余的PBS后，切片保持着一定的湿润度，此时加入另外的抗体为最佳时候，滴入抗体以一滴50ml为好，加入后，轻微地摇匀地覆盖于切片上，使最后的结果稳定均衡，不至于有的地方有反应，有的地方无反应。
3.切片没擦好将会影响加入抗体的质量，切片没冲洗干净，没擦试好，当加入抗体后，它可缩于切片的一边，此时你为了使加入的抗体能够完全地覆盖整个切片，便会使劲地加入抗体，此时的结果是，抗体依然滑向一边，或者完全露出，这不光没达到目的，还浪费抗体，正确的做法就是彻底地用PBS冲洗，摔干切片擦干切片周边的PBS，再滴入一滴抗体轻轻摇匀即可。
（5）选择合适的孵育时间。
第一抗体的孵育时间，有较多的使用范围，应用于临床检测抗体的孵育时间。一般室温下孵育在30-60分钟，120分钟，对于研究性质的抗体孵育时间，也可按照上述的时间，但也有人提出于4℃冰箱中过夜孵育，根据我们的经验一般不主张于4℃冰箱中过夜，原因是： 检验地带网
1.长时间的孵育可以使一些非特异性的物质沉淀下来，或者被吸附，造成背景的染色。
2.目前销售的抗体，纯度较高，特异性较强，不需要长时间的孵育，也能够结合得很好　。
3.长时间的孵育，较容易引起切片的脱落，造成染色的失败。
4.长时间的孵育，不利于临床病理报告的发出。
十、连接抗体的选用必须正确，否则可造成假阴性的现象。
免疫组化染色方法较多，如ABC法，SP法和EV二步法等，如果使用的是SP法，或者ABC法，这时就必须要仔细地选择好连接抗体，第一抗体有单克和多克隆炎分，连接抗体则要根据选用的抗体来进行，例如：第一抗体选用的是单克隆鼠抗人**抗体，连接抗体也要选择相应的免抗鼠IgG，这样才能连接上（目前生产厂家已生产出混合型抗体，即既适合于单克隆抗体，也适合于多克隆抗体。使用者不用担心连接不上，随便使用都可，但如果没有订购混合型的试剂盒，就必须注意的型号，使之完全适合所选用的抗体。）孵育的时间可在10分钟，20分钟或者30分钟，一般在室温中进行，如果室温低于20℃以下，则可在37℃的孵育箱中进行。
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什么情况下必须做免疫组化染色分泌性中
来自：山西省 临汾
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提问时间： 19:28
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最佳回答百姓健康网
54018 位专家为您在线解答
病情分析： 您好：免疫组化属于一种特殊染色方法对于较难鉴别的诊断有一定的帮助情况考虑为淋巴结组织增生但也不能完全除外淋巴瘤所以您需要进一步检查建议您做免疫组化进一步确诊以免延误病情期间注意休息及保暖随天气变化增减衣物避免受凉感冒及过度劳累等定期复查希望我的回答带给您帮助
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病情分析：
你好!依据你的描述综合分析考虑;你的这种情况。可能与手术.牙龈炎症等引起！因不能面视,全面了解病情。为进一步查明病因。建议;你去经治医院检查、医生根据你的症状及体征,辅助临床检查。查明病因,针对病因治疗。
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病情分析：
你好，请问您身高一米七。这体重是49斤呐，还是49公斤呐！请您说的详细一点
意见建议：
如果您是49公斤的话，那样就很正式编辑一点儿吧，最好还是在？涨不涨肉多吃点儿以上是对“身高170体重49正常吗”这个问题的建议，希望对您有帮助，祝您健康！
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病情分析：
根据你的描述来看，你的情况考虑还是腰肌劳损导致的异常的。
意见建议：
建议你平时最好适度的休息，不要劳累，睡硬板床，可以做做理疗按摩缓解不适的症状治疗的
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病情分析：
你好，你说的嘴唇厚是正常的生理现象的，不需要特别的处理的
意见建议：
学会坦然面对自己的缺点任何人都不可能是完美的，自信的人也不见得没有缺点，要调整好心态
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病情分析：
您好，出现肥胖，一般是由于不注意饮食，缺乏锻炼引起的，需要及时减肥。
意见建议：
要注意饮食控制，不要吃太油腻食物，多吃新鲜蔬菜和水果，适当锻炼，适当补充微量元素。帮忙解读免疫组化染色结果
帮忙解读免疫组化染色结果
病情描述(发病时间、主要症状等)：
宫颈组织病理诊断，免组染色结果：
P16(-);CEA(-);CK灶状（+）；CK7小灶（+）；ER弱（+）；Vim小灶（+）；HPV（-）
想得到怎样的帮助：
帮忙解读这个结果
曾经治疗情况及是否有过敏、遗传病史：
刚做了宫颈糜烂锥切
医院出诊医生
擅长：妇科炎症
擅长：无痛人流
提问者采纳
因不能面诊，医生的建议及药品推荐仅供参考
染色体是一个裸露的环壮双链dna分子。在真核生物中，当细胞进行分裂期间染色体呈棒壮结构。染色体的数目是随物种而异，但对每一物种而言，染色体的数目是固定的。染色体是由线性双链dna分子同蛋白质形成的复合物，真核生物的核基因就分藏在每条染色体中，所以，染色体是基因的载体，也就是遗传信息的载体。一个细胞里的全部染色体也就包含了这个生物的全部遗传信息。
问慢性宫颈糜烂
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专长：宫颈糜烂
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问题分析：宫颈糜烂如果是进行的手术治疗一般需要2-3个月左右的时间可以康复，要注意2个月内避免性生活意见建议：2个月后可以考虑去医院做下阴道镜检查，如果是已经康复了就可以考虑性生活了，注意恢复期间的卫生
问颈宫糜烂能上环吗
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专长：月经不调、阴道炎、宫颈糜烂、避孕流产、两性健康
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你好宫颈糜烂是需要治疗后才可以带环的， 以免加重宫颈糜烂的情况
问宫糜烂手术二十天了\'有少量血流出\'什么原？宫糜烂手...
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指导意见：考虑是有炎症的情况，可以积极的进行消炎治疗，同时也是要注意做好复查为好的，有利于治疗现在的情况的。
问你好,我想问下轻度宫糜塞药,需要塞多久?本人是过敏性体...
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问题分析：宫颈糜烂是由于宫颈阴道部的鳞状上皮因炎症刺激而脱落，由柱状上皮覆盖所致，是慢性宫颈炎最常见的一种病理改变。意见建议：建议用消糜栓宫颈用药，如有分娩或流产史，每个人都会有轻度炎症可观察不用药也可以
问保妇康栓,容易过敏吗?怎么好些宫茎糜烂的...
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你的情况考虑为药物过敏,宫颈糜烂单纯的药物治疗效果欠佳,可配合物理疗法如微波,线光,波姆光,LEEP刀等,建议去正规医院检查,根据糜烂的程度选择合适的治疗方法.
问宫颈靡烂用药
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你好，从你的描述来看，建议停药观察，遵医嘱用药。
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评价成功！免疫组化染色呈阴性结果的原因
免疫组化染色呈阴性结果的原因有哪些1、抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误。不知抗体是进口的还是国产的工作液，怎么这么高稀释度也没能做出阳性结果?另外，不是抗体浓度越高就越易出现阳性结果，抗原抗体反应有前带和后带效应，必须摸索适当浓度。2、抗原修复不全，对于甲醛固定的组织必须用充分抗原修复来打开抗原表位，以利于与抗体结合;建议微波修复用高火4次*6min试试。有人做过实验，这是恰当的时间和次数。若不行，还可高压修复。3、组织切片本身这种抗原含量低;4、血清封闭时间过长。5、DAB孵育时间过短。6、细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。7、开始做免疫组化，我建议你一定要首先做个阳性对照片，排除抗体等外的方法问题。
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