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【求助】请教瞬时转染后CCK-8细胞增殖检测问题（MTT也可以）
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这个帖子发布于4年零152天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
目前我在做一个蛋白分子对细胞增殖影响，设计如下：瞬时转染目的病毒及空载病毒48h后 96孔板加入10ul cck-8 1h后测OD值。目前有几个问题不是很清楚：1、GFP荧光对450nm处测的OD值是否有影响；2、不同病毒转染程度本身是不是对OD值影响较大；3、如何改变这种阴性对照组？有做过MTT或者CCK8在瞬时转染下试验的望能指点一二，谢谢。
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1、GFP荧光对450nm处测的OD值是否有影响；没有太大的影响。2、不同病毒转染程度本身是不是对OD值影响较大；一般采用病毒载体时，需要考虑的是目的细胞的最佳MOI值，既要考虑感染效率，同时也要考虑到过多的病毒可能会影响到细胞的生长状态，因为一般需要先进行感染预实验，确定最佳MOI后再进行正式实验。3、如何改变这种阴性对照组？阴性对照及携带目的基因的病毒组，只需要保证二者感染时的MOI值相同就可以了，即都是最佳MOI值。
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dafang0212 edited on
非常感谢楼上，我试验结果来看确实影响不大。但是我GFP和目的组转染效果都不错，不去做MOI有没有太大影响？
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最好是最佳MOI值附近，稍高点只要细胞生长状态没有收太大的影响的话也没太大关系，但是你的对照组和实验组实际感染时的MOI值必须保持一致，否则很难以说明你的实验结果不是因为病毒加入量不同而导致的。
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楼上说的很正确，那么病毒MOI具体怎么测定啊？看了很多文献，感觉说的很模糊。
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TCID50还是比较复杂，感谢楼上。
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我也想知道MOI怎么定~
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请问楼主，你是在96孔板里转染病毒，还是先在皿里转染之后，再将转染后的细胞加入96孔板的呢？
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1、GFP荧光对450nm处测的OD值是否有影响；没有太大的影响。2、不同病毒转染程度本身是不是对OD值影响较大；一般采用病毒载体时，需要考虑的是目的细胞的最佳MOI值，既要考虑感染效率，同时也要考虑到过多的病毒可能会影响到细胞的生长状态，因为一般需要先进行感染预实验，确定最佳MOI后再进行正式实验。3、如何改变这种阴性对照组？阴性对照及携带目的基因的病毒组，只需要保证二者感染时的MOI值相同就可以了，即都是最佳MOI值。你好 测到最佳MOI之后做MTT还需要做滴度梯度吗 还是用最佳MOI直接做MTT 谢谢
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硕 士 学 位 论 文
人GRP78 miRNA 载体的构建及其对EC109 细胞增殖的影响
Construction of miRNA expression vector of human GRP78
gene and the effect on proliferation of EC109 cells
吴灵飞 教授
汕头大学医学院
2011 年5 月
汕头大学医学院硕士学位论文
构建人 GRP78 miRNA 表达载体，筛选出最佳干扰效果的干扰载体，转染 EC109 细胞，
探讨其对 EC109 细胞增殖的影响。
材料和方法：
1、根据miRNA干扰原理，设计合成4对针对人GRP78的特异性miRNA干扰序列，连接到
pcDNA?6.2-GW/EmGFP-miR表达载体，分别命名为miR78-1、miR78-2、miR78-3、miR78-4，
并通过测序鉴定。
2、把测序正确的干扰质粒利用脂质体Lipofectamine 2000转染HEK293细胞，荧光显
微镜下观察细胞中EGFP表达情况以检测转染效率，通过杀稻瘟菌素筛选2周左右，得到稳
定表达干扰质粒的细胞株，通过RT-PCR检测稳定筛选后HEK293细胞中GRP78 mRNA的表达水
3、将最佳干扰效果的干扰质粒瞬时转染EC109细胞，通过RT-PCR检测转染24h后GRP78
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镜下观察均有绿色荧光蛋白表达。与阴性对照组、
正在加载中，请稍后...CCK-8试剂盒检测贴壁细胞增殖现在还常用吗?具体步骤是什么?
☆你大爷☆iyre
还是比较常用的.但是因为MTT价格相对CCK-8试剂盒更便宜,实验室更较多采用MTT法.CCK-8法更灵敏,而且不用用DMSO溶解,减少接触有毒试剂的机会.96孔板培养细胞,检测时每孔加入10%培养基体积的CCK-8,在细胞培养箱中继续孵育0.5-4个小时,时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,检测波长为450nm.
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为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点：
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