请问一下今天在药店用量子弱磁场共...
请问一下今天在药店用量子弱磁场共...
请问一下今天在药店用量子弱磁场共振仪查出''T3T4偏高，是真的吗？
共1条医生回复
因不能面诊，医生的建议仅供参考
职称：主治医师
专长：内科
&&已帮助用户：190250
指导意见：你好根据你的描述可能是因为简单的检查甲状腺功能的情况，结果没有权威性，建议去当地三级甲等公立医院做甲状腺功能五项检查一下明确诊断
那个是假的吗
回复：不如医院的检查更可靠
有可信度吗，还是完全骗人的
回复：大多是忽悠人骗人的不可信
问请问，我用量子弱磁场共振分析仪检测
职称：医生会员
专长：手足癣,传染性软疣,白驳风
&&已帮助用户：404421
你好朋友,根据你的提问,这个应该去医院检查最好的
问你发，我想问一下用量子弱磁场共振仪检测结
职称：医生会员
专长：心血管疾病、肿瘤、高血压
&&已帮助用户：3395
问题分析：量子弱磁场共振检测法是一种新兴的快速、准确、无创波谱检测方法。意见建议：这种量子弱磁场共振分析仪检测结果是否准确可靠尚无确切资料。
问我用量子弱磁场共振分析仪检查的
职称：医师
专长：肾结石,早泄,椎间盘突出
&&已帮助用户：184749
指导意见：你好，最好是不要相信广告，建议您是及早的通过医院早期确诊，根据您的简单描述也是没有办法帮助指导的，必须是以通过医学依据给出诊断，及时为您对症治疗。
问量子弱磁场共振分析仪检查身体准确吗
职称：医生会员
专长：性心理障碍、强迫症等
&&已帮助用户：19408
病情分析： 你好，最好是不要相信广告，早到正规医院检查治疗的，祝你健康
那个外面用的
（量子共振弱磁场分析仪）的检...
职称：医生会员
专长：高血压 老年病 等
&&已帮助用户：2048
病情分析：你好，目前在检测仪器的水准上，还是以正规医疗机构的检测结果比较权威。一般比较大型的医院的检测仪器都是比较先进的，建议您体检或疾病的诊断去正规的医疗机构进行检测。非医疗机构是不具备医学相关辅助检查的资质。
问我在药店用弱磁场弱磁场共振分析仪检查出心肌缺血是真...
职称：医生会员
专长：外科,尤其擅长神经外科等疾病
&&已帮助用户：46084
问题分析：心肌缺血是冠心病的一种。用于治疗心肌缺血的中成药,可以服用复方丹参片,麝香保心丸。意见建议：心肌缺血的食疗饮食宜清淡。多吃一些新鲜蔬菜，水果，黑木耳，豆制品等，可适当吃一些瘦肉、鱼类,尽量少吃过于油腻或高脂肪食物。饭菜不宜过咸,食盐过多会使血压升高。平时宜少食多餐,尤其是晚餐以七八分饱为宜
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西医治疗比较常见的就是服用激素类药物，而且依赖性特别的大...
甲状腺结节是不能自愈的，甲状腺结节分单发和多发，多见于中年人群
甲减不治会影响心血管系统，生殖系统，肌肉与关节系统，消化系统
甲亢的典型症状为高代谢症候群、甲状腺肿大,眼球外突情绪异常激动
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大夫您好？
问：大夫您好？
病情描述：
大夫，您好？请问一下，的尿道炎您熟悉不？我感染一周去的男科医院，大夫给我做的是尿常规和尿培养发现衣原体感染了经过四天的治疗现在尿道口几乎不红了，我想问下这种病可以痊愈吗？光量子加上点滴我也不懂，他说物理治疗加上点滴效果好这样能成功治愈吗，现在我也花了不少钱，我就想治好
患者资料：
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外科 副主任医师
医生擅长：
本人擅长肺癌、食管癌、贲门癌等胸外科疾病的诊断及治疗
医生回复：因不能面诊，医生的建议仅供参考
我感染一周去的男科医院，大夫给我做的是尿常规和尿培养
经过四天的治疗现在尿道口几乎不红了，我想问下这种病可以痊愈吗？
有什么不舒服呢
都怎么治疗的呢？
经过治疗是会痊愈的
光量子加上点滴
我也不懂，他说物理治疗加上点滴效果好
这样能成功治愈吗，现在我也花了不少钱，我就想治好
可以治愈的。放心吧
害怕，天天过着提心吊胆的日子
这又不是什么大病，至于吓成这样嘛
经过治疗很快就会好的
性病啊，我在网上查很严重啊，还总反复
因为不认识所以您肯定不能骗我，我想问一下医生，我治愈后复发的几率大不，我相信你是一个有良知的医生，我现在很难受，无人可倾诉
只要注意卫生，一般都没什么大问题的
头一次遇到这么大的病，还是难以启齿
不知医生们都跟你怎么讲的。你这么心事重
比如治好以后我需要做什么
注意卫生，不要有不洁性生活
我这个人，性欲比较旺盛，治好以后和自己老婆可以吗？
次数有限制吗？
大夫，您看，我的主治大夫今天给我换药了，他说不能总使一种药，要不容易耐药，他这么做是不是挺为我负责的
我最后在打扰一下大夫，我吃饭注意什么，我四天都瘦十斤了，现在看自己都是帅哥了，不敢吃东西，就怕耽误自己治疗
忌食辛辣刺激性食物，多食新鲜蔬菜、水果。就OK了
以后有什么问题可以直接找我；我的工号ＩＤ：***。全天侯为您解答。
蒋大夫祝您身体健康，事业一路高升！
好的。谢谢。
对了，蒋大夫忘问你个问题了？
治愈后。我还用忌口吗？
治愈后问题就不大,自己注意掌握一下就行了.
就是适度，不能总吃是吗？
吃肉没事的
如果再犯还是非淋性尿道炎吗
不要老是想着复发啦
网上看到都是复发了怎么怎么的，所以自己就没信心
你要是没信心,我今天就跟你白聊了；
就是和你聊天，我才一下子有信心了
就这就行.呵呵
以后有什么问题直接来找我就行了
就感觉不那么绝望了，我这个大夫是个好大夫，就是不太愿意说话，所以我有很多问题不了解，就瞎想
我的工号你记着了吗？
我的工号你记着了吗？
我关注你了
以后如果没什么太难得，我就不敢麻烦你，行，打扰了
没事的.有问题就过来
蒋大夫在不？
我前几天咨询过您，我是衣原体弱阳性引起的非淋性尿道炎
现在怎么样了呢
现在感觉没有什么不一样的，想起来时候或者干重活时，有点想尿尿的感觉
但是我打第一天点滴的时候就没有尿频尿急现象了
就是现在尿道口还是有那么一点肿
你现在还在打点滴吗
我是点滴加上物理治疗
今天是第二天吗
打几天吧，效果还是可以的
大夫说明天给我做检查如果可以就让我吃药
费用太贵，我想想问问弱阳性好治吗，因为我特别相信你，所以问问
弱阳性也就是说快痊愈了
我开始就是弱阳性
经过七天治疗了
那你明天检查一下看看结果
如果还是怎么办
继续打针吗？
直接吃药也能有效果吗？
姜大夫，我打的是阿奇加上左氧氟沙星
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擅长：本人擅长内科外科和儿科的常见病多发病，比如，高血压，心脏病...
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擅长：外科手术，中医针灸，推拿，等等
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擅长：从事多年泌尿科工作，对常见病多发病有独特见解...
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量子弱磁场共振分析测量仪测量准确吗？
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指导意见：准确的， 就近到三甲医院进行检查治疗。忌辛辣和油腻的食物，多吃含水份多的水果：橘子、西瓜、水蜜桃等。
问量子弱磁场共振分析仪检查身体准确吗
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病情分析： 你好，最好是不要相信广告，早到正规医院检查治疗的，祝你健康
问请问，我用量子弱磁场共振分析仪检测
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你好朋友,根据你的提问,这个应该去医院检查最好的
问腕式血压测量仪让老年人合适吗？准确度怎么样？
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专长：肺癌,胃癌,乳腺癌,肝癌,肠癌,淋巴瘤,卵巢癌,胸腺瘤,肾癌
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问题分析：您好，腕式血压计比较适合老年人用。建议您购买时，进行水银血压计和腕式电子血压计校对，看是否存在偏差。意见建议：您好，腕式血压计比较适合老年人用。建议您购买时，进行水银血压计和腕式电子血压计校对，看是否存在偏差。谢谢咨询。
问请问脑功能仪有没有进口的，那个品牌比较好？以前经常...
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专长：高血压、糖尿病、心血管疾病
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病情分析： 关于这方面的话问题应该不是出在检测仪上，换句话说进口的也不会有多大的区别，意见建议：建议您还是要多注意一下自己的身体，多多关注一下自己有哪些变化？关于检测仪是否是进口的好些，还是需要您去当地咨询一下，祝您身体健康！
问高血压治疗仪准确吗？
专长：强迫症，抑郁症，焦虑症等
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病情分析：你好，高血压是持续血压过高的疾病，会引起中风、心脏病、血管瘤、肾衰竭等疾病，高血压是一种以动脉压升高为特征，可伴有心脏、血管、脑和肾脏等器官功能性或器质性改变的全身性疾病。意见建议：建议你购买正规的测量仪，可以比较准确的测量血压的，还是要定时到医院去测量。
问家里有老人。高血压。想买一个电子血压测量仪。希望医师能提...
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问题分析：你好，根据你提供的情况，高血压目前的血压计很多，除了医院常用的水银柱血压计是专业用的，现在医院还有手腕式的血压计，目前建议家庭用的血压计一般都是电子的血压计，都是用鱼跃的血压计，要注意告诉老人如何测量血压。意见建议：你好，根据你提供的情况，建议老人每天上午及时测量血压，还要及时服用降压药物，要注意降压药物不能随便调整，要根据大夫的要求进行调整用药，切记多陪陪老人，勿让老人生气，祝你全家健康快乐每一天！
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随着亚健康人群的增加，各种莫名的病症都找上了门，严重时
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现代社会发展节奏快,生存压力大,人的心理压力也很大,但很多
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即送15丁当
【求助】免疫荧光和免疫组化结果不一致，如何继续往下做
页码直达：
这个帖子发布于2年零108天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:30
走过路过的各位老师，麻烦帮我们看看实验中遇到的问题，谢谢！！我们最开始是选取人的肾脏组织的冰冻切片，染目的蛋白，发现主要表达在肾小球上，与足细胞共定位很好，见下图，绿色荧光为目的蛋白，红色荧光为足细胞：所以为了定量统计，又用相同来源（即已做过免疫荧光，确定阳性表达）的石蜡切片做了一批组化，但实验结果与免疫荧光相距甚远，全都是肾小管表达，肾小球几乎看不到。见下图：目前的疑问：1、是否有什么潜在的技术层面的操作问题可以解释两种本质上相同的实验，做出来结果却不一样；2、免疫荧光和免疫组化，如果一种方法做出来的是假阳性，更可能是哪一个。3、下一步如何进一步验证目的蛋白定位的问题。附：我们的免疫荧光步骤：1、选择标本2、丙酮固定5min；3、PBS 5min*3次4、驴（种属与二抗一致）血清封闭抗体，浓度5% 30min；5、加一抗，目的蛋白抗体 1：50;
N14（足细胞） 1:50，4℃过夜。6、PBS 5min*5次7、加二抗，均为 1:50 1-2h8、PBS 5min*5次我们的免疫组化步骤:1.
烤片过夜，75℃，1-3小时2.
脱蜡：二甲苯10min*2——无水乙醇10min*2——95%乙醇10min*23.
PBS浸洗5min*34.
现配3%H2O215min5.
PBS浸洗5min*36.
PH 6.0 1*柠檬酸钠抗原修复液，微波加热沸腾后转中低火30min7.
冷却到室温8.
PBS浸洗5min*39.
羊血清RT封闭20min（5-10%羊血清）10.
倾去多余血清，加一抗（按照说明书推荐1:100、1:200均试验过）。4℃过夜11.
PBS浸洗5min*3，洗去一抗，为避免非特异性染色，要充分洗涤12.
二抗（1：500），RT，2h13.
PBS浸洗5min*314.
DAB法显色15.
ddH2O洗去DAB显色液16.
苏木素复染1.5min，流水冲洗后，浸入ddH2O至返蓝17.
自然风干18.
中心树胶封片谢谢！！！
不知道邀请谁？试试他们
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1、同意上面几位的说法，IHC和IF的片子使用同种样本来进行实验，都用冰切片or蜡切片2、既然IF能检测到信号，IHC没有理由检测不到，后者的敏感度会更高，详细的check一下操作和试剂，不是不相信CRO，有些实验还是自己做比较放心3、还是要问一下ctrl设置了没有，荧光的信号看起来背景很高且小管似乎有表达
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第一：IF的阳性感觉不是很确定，背景的染色也很高，所以确定IF是不是假阳性染色？肾小球有很多毛细血管，故很可能产生较强的假阳性。这里需要做阴性和阳性对照。第二：IHC似乎是阳性，但是肾小管也不是都染色，好像是近曲小管染色？近曲小管因为细胞表面有絮状的刷状缘，所以要确定是不是非特殊染色。你提供的图片倍数不高，不能肯定。个人感觉两个阳性都不是很确定，倒是足细胞的标记肯定是阳性的没问题。所以你还得继续摸索。找阳性对照确定抗体没问题。
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DO your IHC staining by using the same frozen section not paraffin section. You should be able to see the consistent results.
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免疫组化的第一步没看懂，部分操作似乎不太合理。把它的结果换成高清大图，我再看下。
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我更倾向于IF的结果是靠谱的。
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@ 老师您好，组化是写错了，应该是60℃烤片3h，另外要说明的是我们用自己的方法做确实没做出来，不知道哪一步出了问题，所以请外面公司帮忙做的，做出来就是小管表达，免疫荧光是自己做的。我们也在纠结如何优化组化protocol，在想是否是抗原修复出了问题，抗原修复液是否会起到作用？附图：感谢老师!!!
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bio244 DO your IHC staining by using the same frozen section not paraffin section. You should be able to see the consistent results.
谢谢老师！O(∩_∩)O~我们会拿冰冻切片再做一批组化的。
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早上才发现昨天的丁当悬赏居然没有加上，实在抱歉，追加30个丁当，感谢各位老师的帮忙。
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1、同意上面几位的说法，IHC和IF的片子使用同种样本来进行实验，都用冰切片or蜡切片2、既然IF能检测到信号，IHC没有理由检测不到，后者的敏感度会更高，详细的check一下操作和试剂，不是不相信CRO，有些实验还是自己做比较放心3、还是要问一下ctrl设置了没有，荧光的信号看起来背景很高且小管似乎有表达
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第一：IF的阳性感觉不是很确定，背景的染色也很高，所以确定IF是不是假阳性染色？肾小球有很多毛细血管，故很可能产生较强的假阳性。这里需要做阴性和阳性对照。第二：IHC似乎是阳性，但是肾小管也不是都染色，好像是近曲小管染色？近曲小管因为细胞表面有絮状的刷状缘，所以要确定是不是非特殊染色。你提供的图片倍数不高，不能肯定。个人感觉两个阳性都不是很确定，倒是足细胞的标记肯定是阳性的没问题。所以你还得继续摸索。找阳性对照确定抗体没问题。
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qq 1、同意上面几位的说法，IHC和IF的片子使用同种样本来进行实验，都用冰切片or蜡切片2、既然IF能检测到信号，IHC没有理由检测不到，后者的敏感度会更高，详细的check一下操作和试剂，不是不相信CRO，有些实验还是自己做比较放心3、还是要问一下ctrl设置了没有，荧光的信号看起来背景很高且小管似乎有表达谢谢老师，那如果我们要做冰冻切片的IHC的话，实验步骤有哪些需要特别注意的地方吗？希望可以得到各位老师的宝贵经验。晕。。老师，你的名字里包括敏感词诶。。怪不得总是发不出去。。没法
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samoz 第一：IF的阳性感觉不是很确定，背景的染色也很高，所以确定IF是不是假阳性染色？肾小球有很多毛细血管，故很可能产生较强的假阳性。这里需要做阴性和阳性对照。第二：IHC似乎是阳性，但是肾小管也不是都染色，好像是近曲小管染色？近曲小管因为细胞表面有絮状的刷状缘，所以要确定是不是非特殊染色。你提供的图片倍数不高，不能肯定。个人感觉两个阳性都不是很确定，倒是足细胞的标记肯定是阳性的没问题。所以你还得继续摸索。找阳性对照确定抗体没问题。 老师，我再贴几张倍数高点的，您帮我看下呗，前面一张是20*2的，后面一张不是共聚焦拍的，背景色比较亮，麻烦啦！
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sshxczy 谢谢老师，那如果我们要做冰冻切片的IHC的话，实验步骤有哪些需要特别注意的地方吗？希望可以得到各位老师的宝贵经验。晕。。老师，你的名字里包括敏感词诶。。怪不得总是发不出去。。没法 the protocol should be kept same as your IF, only add DAB developing after your secondary AB.
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第一步烤片的温度过高，一般不超过60度；抗原修复的时间可否缩短点？用冰冻切片做IHC看看？
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jq2k 第一步烤片的温度过高，一般不超过60度；抗原修复的时间可否缩短点？用冰冻切片做IHC看看？谢谢老师！您是说“6. PH 6.0 1*柠檬酸钠抗原修复液，微波加热沸腾后转中低火30min” 这一步30min 时间太长了吗，那大概多少时间合适？还想请教一下：您觉得买那种专门的抗原修复液有用吗？
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上面的几位有得已经介绍的很全面了，我再补充一些：1.IF的绿色信号是否阳性表示怀疑，需要做阴、阳性对照，因为肾脏组织结构的特殊性，肾小球有很多血管，有很强的自发荧光；2.IHC，建议采用非生物素系统的试剂盒检测如PV-9000等，因为肾脏的内源性生物素很多，可以出现假阳性。3.若检测石蜡切片，一定要确保抗原修复是否到位，抗原修复液还有不同PH值的EDTA修复液，可以在网上查找配方，自己配都可以的；修复方法还有高压修复以及酶消化，从抗体说明书或已经发表的文献寻找修复方法的参考。4.如果要保证IF和IHC结果的一致性，一定要是相同的组织切片，才有可比性。5.介绍一种量子点免疫荧光方法，因为量子点（605nm）阳性信号是发红光，自发荧光是绿色，二者有鲜明的对比，很好区分的，并且还能在石蜡包埋切片上检测目标蛋白。希望对你有所帮助，有问题可以继续询问。
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sshxczy 谢谢老师，那如果我们要做冰冻切片的IHC的话，实验步骤有哪些需要特别注意的地方吗？希望可以得到各位老师的宝贵经验。晕。。老师，你的名字里包括敏感词诶。。怪不得总是发不出去。。没法冰切IHC没有特别之处，过氧化氢做一下内源性酶的处理，后面和做IF一样进行实验IHC的试剂盒有好几种，不同的操作稍有不同，按说明书操作即可
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sshxczy 谢谢老师！您是说“6. PH 6.0 1*柠檬酸钠抗原修复液，微波加热沸腾后转中低火30min” 这一步30min 时间太长了吗，那大概多少时间合适？还想请教一下：您觉得买那种专门的抗原修复液有用吗？柠檬酸缓冲液 PH6.0 ，微波修复 ，常规是15min。我一般是加热看到沸腾后立即关火，然后等5min，再开火，沸腾后，关火等5min，一共是15min，最后自然冷却至室温。祝好运。这里唯一要注意的就是防止掉片子。双标之前要做单标。无论单标还是双标，对照是必须要做多，这是判断真假阳性的标准。最常用的对照就是用你的一抗稀释液（比如PBs）代替一抗，做一个替代对照即可。good luck
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sky007 上面的几位有得已经介绍的很全面了，我再补充一些：1.IF的绿色信号是否阳性表示怀疑，需要做阴、阳性对照，因为肾脏组织结构的特殊性，肾小球有很多血管，有很强的自发荧光；2.IHC，建议采用非生物素系统的试剂盒检测如PV-9000等，因为肾脏的内源性生物素很多，可以出现假阳性。3.若检测石蜡切片，一定要确保抗原修复是否到位，抗原修复液还有不同PH值的EDTA修复液，可以在网上查找配方，自己配都可以的；修复方法还有高压修复以及酶消化，从抗体说明书或已经发表的文献寻找修复方法的参考。4.如果要保证IF和IHC结果的一致性，一定要是相同的组织切片，才有可比性。5.介绍一种量子点免疫荧光方法，因为量子点（605nm）阳性信号是发红光，自发荧光是绿色，二者有鲜明的对比，很好区分的，并且还能在石蜡包埋切片上检测目标蛋白。希望对你有所帮助，有问题可以继续询问。 1.下一次实验会补充阴性对照，阳性对照的片子也没有。关于自发荧光，我们这次尝试了使用硼酸盐来去除自发荧光，但是反而使得背景着色加深了，原本做出红光阳性的片子也没能做出来，不知道这是为什么呢？还有就是FITC的阳性信号的判定，我们认为是对比周围组织明显亮的地方为阳性，但似乎大家都不太认同我们的FITC阳性结果，是否可能与FITC的光较弱，有没有推荐使用其他颜色的二抗？2. 没有用过非生物素系统kit，如果放大倍数增高的话，一般要调整抗体浓度吗？3.肾脏的石蜡切片的抗原修复这套系统，之前在我们实验室也有比较好的结果，但是这次就不行了，EDTA修复液之前用过也不给力。4.这次用的IF和IHC是同一组织来源的，一个是冰冻一个是石蜡，储存时间较长都在10个月+，这是否也会造成一定影响？5. 605nm的抗体，我们后期需要三标就会不够用了，所以没有选择这个激发光的，不过还是可以试一试。
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看着大图我也觉得荧光的片子像是假阳性。大家都说这么多了，自己找下原因再试几次吧
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老师，我再贴几张倍数高点的，您帮我看下呗，前面一张是20*2的，后面一张不是共聚焦拍的，背景色比较亮，麻烦啦！说实在的，个人感觉真的值得怀疑。无论是石蜡还是冰切片，步骤其实我相信你一般都没有问题。有些抗体确实不好做，你可以在做冰切的时候试试也进行抗原修复。或者应用放大系统进行DAB显示或者荧光显示，具体步骤你可以查到。
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1.下一次实验会补充阴性对照，阳性对照的片子也没有。关于自发荧光，我们这次尝试了使用硼酸盐来去除自发荧光，但是反而使得背景着色加深了，原本做出红光阳性的片子也没能做出来，不知道这是为什么呢？还有就是FITC的阳性信号的判定，我们认为是对比周围组织明显亮的地方为阳性，但似乎大家都不太认同我们的FITC阳性结果，是否可能与FITC的光较弱，有没有推荐使用其他颜色的二抗？2. 没有用过非生物素系统kit，如果放大倍数增高的话，一般要调整抗体浓度吗？3.肾脏的石蜡切片的抗原修复这套系统，之前在我们实验室也有比较好的结果，但是这次就不行了，EDTA修复液之前用过也不给力。4.这次用的IF和IHC是同一组织来源的，一个是冰冻一个是石蜡，储存时间较长都在10个月+，这是否也会造成一定影响？5. 605nm的抗体，我们后期需要三标就会不够用了，所以没有选择这个激发光的，不过还是可以试一试。 1.判断真假阳性唯有做好各种对照。根据比周围组织明显亮的地方为阳性，是不对的，是靠不住的。想一想，如果我说，我不加一抗，用pbs代替你的anti-gfp抗体，也出发现了你要的结果。你怎么反驳我啊，没有办法反驳！这是最基本的实验理论，是做实验之前必须要考虑到的。所以，唯有对照！！！其他没有办法，无论是哪一种荧光显色，无论是哪一种非荧光（DAB等），判定结果，唯有对照。没有的对照，就没有说服力。说句不好听，不作对照的实验，都是不对的，实验设计都不对，哪有实验不设对照的。不仅仅宏观上要有对照（比如打药的老鼠和不打药的老鼠对照），对于具体检测手段，比如IF，比如IHC等等所有实验也都必须都要有对照！！！！！！！！总之，还是那个原则，保证结果的特异性，如何保证唯有对照！2.抗体质量很关键，是核心因素，要想办法知道你的抗体是否管用，是否好用！！！
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丁香园助理版主
1.下一次实验会补充阴性对照，阳性对照的片子也没有。关于自发荧光，我们这次尝试了使用硼酸盐来去除自发荧光，但是反而使得背景着色加深了，原本做出红光阳性的片子也没能做出来，不知道这是为什么呢？还有就是FITC的阳性信号的判定，我们认为是对比周围组织明显亮的地方为阳性，但似乎大家都不太认同我们的FITC阳性结果，是否可能与FITC的光较弱，有没有推荐使用其他颜色的二抗？2. 没有用过非生物素系统kit，如果放大倍数增高的话，一般要调整抗体浓度吗？3.肾脏的石蜡切片的抗原修复这套系统，之前在我们实验室也有比较好的结果，但是这次就不行了，EDTA修复液之前用过也不给力。4.这次用的IF和IHC是同一组织来源的，一个是冰冻一个是石蜡，储存时间较长都在10个月+，这是否也会造成一定影响？5. 605nm的抗体，我们后期需要三标就会不够用了，所以没有选择这个激发光的，不过还是可以试一试。1、还是那句话--按要求设置好对照组进行实验，更容易排除问题也更有说服力，阳性的判断不能仅凭信号的亮度来确定，要知道有时候非特异性信号也很强，至于自发荧光的问题如果你的检测系统和抗体没有问题的话，你的信号肯定是要高于自发荧光信号的，用confocal 检测的话二抗的选择可以考虑远红波段的染料试试看。2、非生物素系统会有一个级联放大的作用，可以先根据抗体的推荐比例上下摸索一下，一般就在推荐范围之内即可。3、抗原修复的手段并不见得就是某种最好，要视不同抗原的性质来定，不能一概而论。比如大家都认为EDTA很好用，但是很多抗体使用柠檬酸也很检测到很好的信号。4、石蜡10个月问题应该不大，冰冻的10个月要看你放在什么条件下了，这个对于抗原肯定会有一些衰减作用。5、如果使用了605波段抗体，多重标记你可以再向红外波段（633、647之类）寻找合适的抗体搭配试试。
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很抱歉，这几天因为执医考，所以耽搁了些日子。。。==第一次在贵版求助，收到很多很靠谱的建议，心存感激，我们已经对实验做出调整及改正了，希望有好的结果，谢谢各位老师!
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sshxczy edited on
第一步烤片的温度过高，一般不超过60度；抗原修复的时间可否缩短点？用冰冻切片做IHC看看？老师，您好！看到您在免疫荧光方面了解甚多，特此想向您请教一些！我现在在做小肠隐窝的组织免疫荧光染色，由于实验需要，我在转基因小鼠体内导入了GFP，相当于是小鼠的自发荧光。我需要同时检测A蛋白和这个自发荧光GFP。 但是在沸水浴EDTA抗原修复后，小鼠的GFP自发荧光没看不见了，所以想请教您，是否抗原修复会影响内源性GFP的自发荧光呢？我的实验步骤如下：1. PBS洗片5min，3次。0.2%triton 室温 15min，PBS洗去。2. 沸水浴EDTA抗原修复10min3. 等片子冷却后，PBS洗片5min，3次4. 5%BSA封闭30min5. 一抗孵育，4度 过夜6. PBS洗5min，3次7. 二抗孵育，37度，2h8. PBS洗9. DAPI染核5min10. PBS洗11. 封片以上的步骤以后，我的实验结果发现，小鼠的内源性GFP自发荧光消失。 不知您有何见解？如果方便，请您指点！谢谢！
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走过路过的各位老师，麻烦帮我们看看实验中遇到的问题，谢谢！！我们最开始是选取人的肾脏组织的冰冻切片，染目的蛋白，发现主要表达在肾小球上，与足细胞共定位很好，见下图，绿色荧光为目的蛋白，红色荧光为足细胞：
所以为了定量统计，又用相同来源（即已做过免疫荧光，确定阳性表达）的石蜡切片做了一批组化，但实验结果与免疫荧光相距甚远，全都是肾小管表达，肾小球几乎看不到。见下图：
目前的疑问：1、是否有什么潜在的技术层面的操作问题可以解释两种本质上相同的实验，做出来结果却不一样；2、免疫荧光和免疫组化，如果一种方法做出来的是假阳性，更可能是哪一个。3、下一步如何进一步验证目的蛋白定位的问题。附：我们的免疫荧光步骤：
1、选择标本2、丙酮固定5min；3、PBS
5min*3次4、驴（种属与二抗一致）血清封闭抗体，浓度5% 30min；5、加一抗，目的蛋白抗体 1：50;
N14（足细胞） 1:50，4℃过夜。6、PBS 5min*5次7、加二抗，均为 1:50
1-2h8、PBS 5min*5次
我们的免疫组化步骤:
烤片过夜，75℃，1-3小时2.
脱蜡：二甲苯10min*2——无水乙醇10min*2——95%乙醇10min*23.
PBS浸洗5min*34.
现配3%H2O215min5.
PBS浸洗5min*36.
1*柠檬酸钠抗原修复液，微波加热沸腾后转中低火30min7.
冷却到室温8.
PBS浸洗5min*39.
羊血清RT封闭20min（5-10%羊血清）10.
倾去多余血清，加一抗（按照说明书推荐1:100、1:200均试验过）。4℃过夜11.
PBS浸洗5min*3，洗去一抗，为避免非特异性染色，要充分洗涤12.
二抗（1：500），RT，2h13.
PBS浸洗5min*314.
DAB法显色15.
ddH2O洗去DAB显色液16.
苏木素复染1.5min，流水冲洗后，浸入ddH2O至返蓝17.
自然风干18.
中心树胶封片谢谢！！！
想问楼主免疫荧光的方法可以用于培养的细胞吗？
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