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【求助】求助qPCR测定肠道菌群数量，内参设置问题
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请问，用qPCR做肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的绝对定量，内参分别如何设置？用某一种乳杆菌的DNA做乳杆菌的内参可以吗？
不知道邀请谁？试试他们
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用肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌各自的标准品DNA，和待测样本一起跑qPCR，可以得到待测样本的绝对定量值。但是我不知道有没有商品化的这种标准品DNA。
如果没有，那么你要从肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌每一种细菌中提取DNA（先细菌计数，例如使用分光光度计，然后提取DNA），将提取的DNA分装成很多小管，以后跑qPCR时，每种细菌取出相应的一支DNA使用，确保每次实验采用的是同一个标准。这样达到相对的“绝对定量”。
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ikaren2013
用肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌各自的标准品DNA，和待测样本一起跑qPCR，可以得到待测样本的绝对定量值。但是我不知道有没有商品化的这种标准品DNA。
如果没有，那么你要从肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌每一种细菌中提取DNA（先细菌计数，例如使用分光光度计，然后提取DNA），将提取的DNA分装成很多小管，以后跑qPCR时，每种细菌取出相应的一支DNA使用，确保每次实验采用的是同一个标准。这样达到相对的“绝对定量”。
这样的话，肠球菌19种我就要做19个标曲。。。。。。那我可不可以用小鼠粪便中肠道上皮细胞残留的基因，取β-actin或者什么的作为内参做相对定量呢？
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丁香园版主
这样的话，肠球菌19种我就要做19个标曲。。。。。。那我可不可以用小鼠粪便中肠道上皮细胞残留的基因，取β-actin或者什么的作为内参做相对定量呢？ 你检测的目标是细菌，跟小鼠上皮细胞丝毫不搭边，这么做就像你要检测一下马云有多少钱，掏出自己的钱包数数一样~如果你做的不是事先投喂的某些标准菌，对结果要求又很苛刻，建议你换一个办法，做16s库测序，以前有人给我发了一份16s文库分析的广告，你可以看一下这个方法能够获取的数据。你需要做的，只是提取一下肠道粪便DNA，剩下的全部由测序公司完成，省时省力，而且结果的可信度比你做qPCR要高很多。目前很多公司报价在600-800元左右，但是据我了解，你可以砍到200元一个样品。这已经比qPCR要便宜了。最方便的就是什么都不需要你来做，你直接拿到结果，还有很多漂亮的高大上的图，发文章就可以用~~（我怎么跟做广告的一样了）
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你检测的目标是细菌，跟小鼠上皮细胞丝毫不搭边，这么做就像你要检测一下马云有多少钱，掏出自己的钱包数数一样~如果你做的不是事先投喂的某些标准菌，对结果要求又很苛刻，建议你换一个办法，做16s库测序，以前有人给我发了一份16s文库分析的广告，你可以看一下这个方法能够获取的数据。你需要做的，只是提取一下肠道粪便DNA，剩下的全部由测序公司完成，省时省力，而且结果的可信度比你做qPCR要高很多。目前很多公司报价在600-800元左右，但是据我了解，你可以砍到200元一个样品。这已经比qPCR要便宜了。最方便的就是什么都不需要你来做，你直接拿到结果，还有很多漂亮的高大上的图，发文章就可以用~~（我怎么跟做广告的一样了） 十分感谢
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丁香园准中级站友
我觉得楼主的方法也是一方面，在测序例数有限的前提下，这个方法也可以作为一种评价丰富的方法。
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你检测的目标是细菌，跟小鼠上皮细胞丝毫不搭边，这么做就像你要检测一下马云有多少钱，掏出自己的钱包数数一样~如果你做的不是事先投喂的某些标准菌，对结果要求又很苛刻，建议你换一个办法，做16s库测序，以前有人给我发了一份16s文库分析的广告，你可以看一下这个方法能够获取的数据。你需要做的，只是提取一下肠道粪便DNA，剩下的全部由测序公司完成，省时省力，而且结果的可信度比你做qPCR要高很多。目前很多公司报价在600-800元左右，但是据我了解，你可以砍到200元一个样品。这已经比qPCR要便宜了。最方便的就是什么都不需要你来做，你直接拿到结果，还有很多漂亮的高大上的图，发文章就可以用~~（我怎么跟做广告的一样了）哈，帮别人做广告了啊。楼主要做的是绝对定量，16S扩增子测序现在是相对定量，理论上可以用16S测序技术进行决定定量，不过要加所谓的内参，在同一批次样本中加入一个“标准样本”一同进行扩增、加接头测序，分析的时候以这个“标准样本”为基础来评判定量。不过我说的只是理论上的，公司现在似乎还没真正有实施的。
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丁香园版主
二十一业 哈，帮别人做广告了啊。楼主要做的是绝对定量，16S扩增子测序现在是相对定量，理论上可以用16S测序技术进行决定定量，不过要加所谓的内参，在同一批次样本中加入一个“标准样本”一同进行扩增、加接头测序，分析的时候以这个“标准样本”为基础来评判定量。不过我说的只是理论上的，公司现在似乎还没真正有实施的。没仔细看，绝对定量还是太吃力，一般不敢碰
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huhu138 请问，用qPCR做肠道乳杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌、产气荚膜梭菌的绝对定量，内参分别如何设置？用某一种乳杆菌的DNA做乳杆菌的内参可以吗？老师，您的问题解决了吗？我也很发愁这个，急需请教！
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我也非常想知道是怎么做的？
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miR-421下调FOXO4促进鼻咽癌细胞增殖及其凋亡抵抗.pdf122页
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博士学位论文 及凋亡抵抗 博士研究生：陈亮 指导教师：徐如祥教授 摘 要 microRNA是最近研究发现的一类长度约为19"～25个核苷酸的非编码单链
小RNA分子，其通过与靶基因的3’端非翻译区互补配对结合的方法，从而调控内
源基因的表达。miRNA作为生物体生长发育的重要调控基因，目前其主要研究
方向是探明miRNAs与疾病的关系，尤其是miRNA与肿瘤的关系。鼻咽癌 Nasopharyngealcarcinoma，NPC 是广东地区常见的恶性肿瘤之一，在头颈部恶
性肿瘤中占首位。鼻咽癌的发病人群以40--一50岁的青壮年多见，一旦发病对社
会、经济和家庭造成较大影响。鼻咽癌原发部位隐蔽，不易观察，且与鼻腔、
鼻窦和颅内相毗邻，所以临床症状出现较晚而且各异；鼻咽癌也是头颈肿瘤中
转移率最高的。这些都导致了鼻咽癌常常容易被误诊或漏诊，影响治疗效果。
因此，鼻咽癌的早期诊断和治疗的研究一直是我国头颈外科学研究的重点之一。 目前鼻咽癌的治疗还是以放射治疗为主。对放疗不敏感、放疗后复发以及中晚
期的患者，可采取化学药物治疗，但这只是辅助性治疗或姑息性治疗。鼻咽癌 的手术治疗也只在一些特殊情况下作为辅助方法采用。除了以上三种常规治疗，
近年来也有作者尝试应用光动力疗法和微波热疗治疗鼻咽癌，但也只能作为辅
助手段。重组DNA技术的发展使肿瘤的基因治疗成为可能。根据肿瘤发生机
理制定的基因治疗方案已成为肿瘤治疗的热点。早期研究者主要运用反义核酸
技术干预肿瘤相关基因的表达，取得了一定效果。近年来，RNA干扰技术在哺 摘要
乳动物体内的应用，更为肿瘤的基因治疗开辟了一个新的视野。因此，我们意
在探索性地研究miRNA在鼻咽癌发生发
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请务必先预览看看是否存在文不对题等情况，预览与实际下载的一致，本站不支持退款。韩春雨团队在《Nature Biotech》上发表的 NgAgo 基因编辑技术是什么？有何突破？
想了解一下目前基因编辑的手段，以及这项技术的优势。
按时间排序
目前为止没有成功案例
学术界已经有较大信任问题
看到回答大多数都是4、5个月之前的，对比现状，不禁唏嘘
想问一下目前这个技术跟进的怎么样了？记得在朋友圈看过一篇文章，目前世界上没有一个实验室成功复制了韩春雨的成果，韩春雨团队已被要求公布原始数据。
nature官网新闻是8月8号的一篇关于事件发展的报道，跟调查结果没关系。而且韩春雨的protool几乎是同时给出的，只能说韩春雨撒谎功底不行。
一群人高潮的太早了，现在几乎快要被无情的打脸了
跑题，折叠我吧我特别不喜欢拿了韩老师的事例来批判科研体制啥的……韩老师现在的学校我是第一次听到，可是他的出身学校我想没有人没听过韩老师确实是10年没出一篇论文，可是10年前人还是有不错的论文的韩老师也许课堂上有些愤青的言论，可对待科研，他很认真韩老师目前是没有基金项目支持，看看他哥哥说的，到底是他没有申请，还是申请了没有中？就算是后者，我觉得目前科研项目的审批体制是没有什么问题的。优秀的人很多，当你面对一个点子有争议，平台差，履历没听过的人，你怎么判断？我不喜欢一碰到一个坚持的科学家，就往民科靠的氛围。
刚刚看到韩春雨教授北大讲座的推送
一直以来，主流科学家被视为国家科技进步的象征，拿着大课题做着大项目发着CNS文章，可是这个时代是不是要在不久的将来成为过去时呢？韩老师其实代表了一大部分的非主流科学家，能做出这样有影响力的成果与其个人的坚持密不可分，但同时也表明大投入大课题不一定是创新的最佳途径。前段时间读到了很有意思的文章，数风流人物还看边流，不知道韩老师对刘实老师的反主流发现是否有兴趣？特此附上链接：
花了好多时间写的，还是觉得应该先来个总结比较好。我个人不看好NgAgo在未来一段时间成为广泛使用的基因编辑工具，目前NgAgo有一些让人兴奋的功能，但是也有致命缺陷。也看了一下其他答案，有许多类似于“NgAgo比Cas9小”之类的论据我没有提，是因为我觉得没什么意义，以现在的技术来讲，这些优缺点不会对基因编辑工具的性能产生影响。另外还有一点是我确实没有想到的，就是Cas9的gRNA有多于的序列用于修饰，可以实现其他的功能。最近Nature biotech上发了一篇CRISPRainbow的文章，就是利用gRNA连接了荧光蛋白，效果十分炫酷，但是已经超出DNA编辑的范畴了，我觉得不列出来也罢。还有就是下周韩老师要来北大给talk，如果我去听了的话还会更新（破十赞就更）-------------------------------------------------------原答案---------------------------------------------------------------------------虽然只是一介本科生，但是最近也查了很多资料，应该比较靠谱。现在最火的基因编辑技术是CRISPR-Cas9系统，这个系统在2013年最先被证实可以在动物体内进行基因编辑，做出这个成果的是华人科学家张峰，也是近年来呼声很高的诺奖候选人之一。下面对比一下CRISPR和NgAgo有什么异同，关于NgAgo的信息主要来源于韩春雨最近的那篇paper。所谓基因编辑的第一步就是要把原来的DNA切开，这里最重要的就是要准确找到我们想切割的位点，之后的事情都好说。之前基因编辑的主要工具锌指蛋白和TALEN是用氨基酸序列来匹配特异性的DNA序列，想识别一小段DNA序列就需要设计几千个氨基酸，成本高昂而且工作量极大。CRISPR是利用gRNA（guide RNA）来寻找目的基因序列并进行切割，而NgAgo是利用gDNA寻找目的基因，二者只需要一段20个左右碱基的RNA或者DNA就能识别特异型序列。这里的gRNA和gDNA都很容易人工合成，Cas9和NgAgo的转基因也很容易实现，因此在使用的成本和便利性上二者差异不大。接下来是具体的编辑能力，主要考察的是编辑的效率和有没有脱靶效应。CRISPR-Cas9受限于PAM序列，切割位点有一定限制。具体来说CRISPR不是想切哪就切哪，不过如果你想重组或者突变一个基因，有几千bp，基本上不会找不到PAM序列，但是要做更精确的操作就要看脸了。。。而NgAgo目前来看想切哪切哪，只要gDNA配上就ok。对一个二者都能处理的序列，一般情况下切割的效率基本没有差别（都不是100%，20~30左右），但是富含CG碱基对的序列CRISPR基本处理不了，而NgAgo可以照常切割。基于以上两点，NgAgo在效率上略胜CRISPR一筹。脱靶率上，二者都不高，理论上NgAgo的脱靶率更低，这是因为CRISPR-Cas9的gRNA如果跟DNA有少数几个错配，切割仍然会发生，而NgAgo对错配的容忍度更低。所以可靠性上NgAgo又略胜一筹。这两个略胜一筹基本上就是NgAgo相比于CRISPR的所有优点了。还有其他一些玄学因素，比如细胞里出现其他gRNA的概率比gDNA的概率高，然而这就跟你被雷劈死的概率比被外星人打死的概率高一样，没什么卵用。下面是NgAgo的一些缺点。NgAgo现在只有韩春雨的一篇文章，而CRISPR在这几年突飞猛进，发展出了各种各样的变形，有各种各样的功能，在NgAgo没有革命性优势且可靠性得不到证明的情况下，各个实验室是不会抛弃自己辛苦建立的CRISPR-Cas9品系的。最重要的最后说，NgAgo有一个致命的缺陷，就是这个系统使用的gDNA只能外源提供，而CRISPR的gRNA可以通过转基因的方法在生物体内持续表达，所以想用NgAgo做转基因动物的基因编辑难度很大，目前能想象到的只有在受精卵中进行NgAgo操作才能得到基因编辑的动物，而这种方法只能得到全身表达编辑基因的个体，没办法像CRISPR一样进行组织特异性的基因编辑了。而且结合NgAgo只能切负超螺旋的DNA这个特点（这个是之前别人研究过的，韩春雨没提），就算是卵细胞编辑都有很大的局限性，所以在实用性上NgAgo现在远不如CRISPR-Cas9。其实Ago中有一部分跟CRISPR一样是利用RNA来寻找DNA序列的，其他指标能够媲美NgAgo，这些酶才真正有潜力代替CRISPR。题外话，韩老师的工作真的很不容易，如果后面有人能重复出来他的工作，还是挺励志的一个科研故事呢~
看到有些同学认为从19到24个nuclotide就导致准确率提高，这个不是很正确的；并不是guide越长准确率就越高，这个在CAS9上就检验过了
没有pam的限制，操作会更加灵活。切割的效率还缺少更多的证据验证。从目前国内的ssdna合成效率来讲，合成5pho ssdna速度和成本相对于已有的grna clone来说没有优势。
我们学校（简称河北科大）虽然low,但能力强的老师真心不少呢！个人比较佩服文法学院的科大名嘴谢志浩和外国语学院的王伟滨。想到了一句话"金麟岂是池中物，一遇风雨变成龙"
目前基因组编辑领域有点象当年的PCR，概念有了，Taq酶也研发出来了，而且已经优化了好几版了，以后Taq酶还会进一步被优化，而且还会有qPCR, digital PCR 等技术被开发，但是不会有PCR原创性高了。现在主要还是拼专利。韩春雨确实申请了专利但是，目前已经有人抢先申请了。
关于文章中的实验的细节问题的一些个人观点：1、文章中的关于证明哺乳动物细胞内含有很少的5’P-ssDNA的实验证据不够强。韩春雨团队使用的纯化后的NgAgo蛋白进行电泳检测核苷酸的存在。这个实验的灵敏度不够高。即使有少量的结合的ssDNA结合，在这个检测中也不能被检测到。而这样的低浓度的不能被检测到的ssDNA会不会介导NgAgo对基因组进行切割也是缺乏实验证据的。
2、类似的，在最后一个实验中，在哺乳动物细胞中进行基因敲除（Knock out）和敲入（Knock In）如果有全基因组的测序分析，便能更好的说明是否有脱靶效应的存在了。同作者在原文中提到的，这些内容还需要未来高通量的分析才能确定。
3、韩春雨团队认为在体外的质粒切割实验中，单条的gDNA只能引起靶标质粒单链的断裂，仅仅在互补的两条gDNA存在的情况下才能引起双链的断裂。而在体内则仅仅需要单条的gDNA则能引起双链的断裂。对于这一点，韩春雨的团队认为是体外实验因为使用了55℃置换gDNA，所以导致了酶活性的降低。而在体内的装载gDNA是37℃，不会破坏酶活性，所以出现了这样的情况。个人认为，体内单个的gDNA既能导致双链的断裂是因为细胞内单链的DNA断裂会引起细胞的DNA修复机器的运作，而这个过程中，细胞内的其他酶导致了另外一条链的断裂。这个假设可以通过在体内（37℃）的环境下装载gDNA，再纯化后做体外的实验。预期结果：这样装载的NgAgo-gDNA在单条gDNA的情况下也只能够引起靶标质粒的单链断裂。
当然，以上仅仅为基于文章内容的个人观点。
韩春雨的团队的这项工作的价值是值得赞美的！
自己写了一下关于文章的实验细节，有兴趣的可以看看：
看到这则新闻时，想到的第一个人却是张益唐。
这是河北科技大学在知乎上地位最高的一次了！！！不夸张的说大多数人都没听说过这个学校吧。在极其一般的条件下能得出这样的成就让人敬佩不已。小生是科大一名大四学生有幸能和韩老师在一栋实验楼上工作 。但是专业不同，也对其没有了解。所以没有资格评价。最后向辛苦的科研工作者致敬！！！
生物工程恐怕又要火一波
极有可能获得诺贝尔奖！这项成果的核心为一项替代目前通用的Cas9的基因组编辑新技术，这一成果打破了国际基因编辑技术的垄断，实现了中国高端生物技术原创零的突破。
这项成果是中国首个“中国创造”的尖端生物技术，打破了外国基因编辑技术的专利垄断，研究水平可比肩国际一流大学同领域，如加州大学伯克利分校的Jennifer A. Doudn和麻省理工的ZhangFeng教授的工作。该技术可用于微生物、植物和动物的精准基因改造，以及乙肝、艾滋病或者一些遗传性疾病的“基因治疗”，在人类血液、器官的编辑和再造等方面具有重要意义，在医药，农业，畜牧等产业领域具有重要应用价值。
谢邀，母校本学院的老师。去过他的实验室，并且也认识韩老师。当年小愤青老师，学生们多多少少都听过他的事迹。今天只想说，无论其他如何，踏踏实实做研究就是值得称赞。并且寝室有人就是他的学生，所以我认为也只有他们这样的团队，能出成果。想起有些研究模式，汗颜。赞一个
对这种基因编辑技术不感冒，我认为人类远没有能力应用基因编辑技术（用在一个细胞或动物细胞是一回事，用于人体则是另一回事），人体众多细胞如何编辑，如何逃过伦理。即使对受精卵或胚胎编辑，风险也是远大于收益。最有可能的是制作动物模型有用，几乎不可能应用于疾病治疗。但是对于韩的成果还是比较赞赏的，主要是基于不完全跟风CRISPR，不管以后的实用强不强，至少在思路上是比较大的创新。没有发science有可能在应用的价值上没有被审稿人认同，或者其试验证据支持不够。很多人说science有什么学霸打压，基本不可能，science一年发快1000篇文章，基本不可能有学霸对于创新项目的打压。科学网博客（） 大致描述了韩老师的文章与之前技术的过程。大致看了一下两个专利。很遗憾的发现，韩的专利主要技术特征“其特征在于在10-50℃下以5’端磷酸化的单链向导DNA为向导” 大部分包含在John 的专利中，也就是说，韩专利没有新颖性，除非把权利要求限定在非常小的范围。john专利的技术特征，温度是20-60°。韩专利技术特征10-50°。john专利中不但包含5’端磷酸化，还包含3‘（我看不懂这个，不过可以肯定，韩专利这个部分在john中有体现）。韩专利不乐观。从这两个专利看，韩老师的突破似乎不明显。韩春雨专利：对比专利
已有帐号？
无法登录？
社交帐号登录细菌学诊断新技术(一)(2)
2. 核酸探针的类型 根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分成DNA探针或RNA探针，一般大多选用DNA探针；根据选用基因的不同分成两种，一种探针能同
2. 核酸探针的类型
根据核酸探针中核苷酸成分的不同，可将其分成DNA探针或RNA探针，一般大多选用DNA探针；根据选用基因的不同分成两种，一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应，它对某些菌属、菌种、菌株有特异性，另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA 发生杂交反应，如编码致病性的基因组，它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。这类探针检测的基因相当保守，包括大部分rRNA,因为他既可能在一种微生物中出现，又可代表一群微生物。如应用rRNA探针检测作为筛选食品污染程度的指示菌E.Coli.选择探针的原则是只能同检测的细菌发生杂交反应，而不受非检菌存在的干扰。
3. 核酸探针的应用
（1）用于检测无法培养，不能用作生化鉴定、不可观察的微生物产物以及缺乏诊断抗原等方面的检测，如肠毒素。
（2）用于检测同食源性感染有关的病毒病，如检测肝炎病毒，流行病学调查研究，区分有毒和无毒菌株。
（3）检测细菌内抗药基因。
（4）分析食品是否会被某些耐药菌株污染，判定食品污染的特性。
（5）细菌分型，包括rRNA分型。
4、核酸探针的特点
4.1 探针的特异性：
探针检测技术的最大优点是特异性，就是说一个适当组建的DNA探针能绝对特异性地与所检微生物而不与其他微生物发生反应。对食品检测而言，就是不与样品中内源性杂菌和样品自身DNA发生非特异性反应。
以往检测方法检测的是基因的表达产物（蛋白质或其他产物）。检测这种物质受多种因素影响。比如食品中微生物因受应激损伤（高温、冷冻、化学制剂等）会导致基因组的变化，从而引起其表达产物的变化。而核酸探针检测的是基因本身，它能识别基因本身的变异，不受基因表达产物的影响。常规免疫学方法检测抗原、抗体，它们都是蛋白质，这些蛋白质由氨基酸组成，而氨基酸由核苷酸序列确定，一旦这种序列受外界影响发生变异，就会导致其产物的变化，影响抗原抗体间的反应，使检测特异性下降。
检测病毒主要通过组织培养后，检测病毒相关的蛋白质囊膜，即使采用超低温保存，有时也会引起编码蛋白质囊膜基因的变化，而采取DNA探针检测病毒则不用改变其蛋白质结构，而只需检测是否有相应特异性的编码蛋白质囊膜的病毒靶DNA序列。
另外，核酸之间的识别连接比抗原抗体准确，并且探针检测比免疫学方法灵活。尽管看来形成抗原抗体复合物比核酸杂交快，但能通过加磺化葡聚糖把退火速度增加100倍，从而提高反应速度，核酸比蛋白质耐受高温（100℃）、有机溶剂、螯合剂和高浓度工作液的破坏能力强，所以用比提取制备蛋白质强烈的多的方法制备核酸，不会影响杂交反应。当然RNA探针除外，因为RNA不耐受碱处理，需用其它方法制备检测用RNA.
核酸探针的特异性取决于探针的碱基序列和使用条件，如在不严格的条件下（低温高盐）探针与靶DNA误交结合力比严格条件下稳定。
探针长度也会影响反应的特异性，一般加Formamide增强反应特异性。
4.2 探针的敏感性
研制核酸探针是为了检测出单个病毒和细菌。DNA探针敏感性取决于探针本身和标记系统。32P标记物通常可检出10-8摩尔特异DNA片段，相当于0.5pg,1000个碱基对的靶系列，相当于1000---10000个细菌。用亲和素标记探针检测1小时培养物DNA含量在110pg,两者敏感性大致相同，而血清学方法只能达到1ng的水平。
延长培养时间，增强信号强度能提高探针的敏感性。
非放射性物标记探针在高浓度情况下，由于抑制了非特异性吸附，比放射性物标记探针背景干扰小。
制备食品样品时，因机械均浆而导致菌体破裂，产生较高的背景干扰会影响检测敏感性。
在探针上加生物素化的核苷酸长尾能使检测敏感性提高10倍。
细胞中rRNA比DNA多，检测rRNA的探针比DNA敏感。通过扩增DNA含量也能提高检测敏感性。
4.3 探针检测技术中存在的问题
检测一种菌就需要制备一种探针，目前尚未建立所有致病菌的探针，尽管检测速度快，但要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养，任何一种方法不可能有100%的特异性和敏感性，所以必须考虑假阳性和假阴性的问题。
DNA探针还不能完全取得常规检验提供的细菌特性的信息，如在菌株生物型鉴定、血清型和抗药基因上有不足之处。
检测食品时，样品中待检菌量低杂质成分复杂，样品DNA纯度不够高等都会限制探针检测的敏感性。
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责任编辑：大汉昆仑王0
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