推荐期刊投稿
&&&免费论文
&&&收费论文
&&&浏览历史人骨钙素的基因克隆及其载体构建--《河北科技大学》2010年硕士论文
人骨钙素的基因克隆及其载体构建
【摘要】：
Osteocalcin(骨钙素)是成骨细胞能够特异表达的少数几个蛋白之一,它具有激素的几个特征。例如,它作为前体分子合成,是细胞的特异分子,分泌后进入循环系统。在骨组织中骨钙素的含量比较丰富,它是由成熟的成骨细胞合成和分泌的,其中大部分沉积于骨基质中,大约五分之一释放入血,血清骨钙素含量与骨组织中骨钙素含量呈正相关性,因此血清骨钙素含量可以间接反映骨组织中骨钙素的合成状况。由于骨钙素主要在矿化形成期出现,所以它还被认为是成骨细胞向矿化发生期分化的标记之一。
本文运用基因工程技术对骨钙素基因进行克隆,并将其转入真核和原核表达载体,实验通过改造pcDNA3.1(+)-HA、pcDNA3.1(+)-HA-His和pGEX-4T-1质粒,使得骨钙素基因在表达载体中与特异性标签HA、His以及GST蛋白溶合系统相结合,得到以下成果:①构建成功真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-BGP;②成功构建具有HA和His双标签的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP;③具有GST溶合表达系统的原核表达载体pGEX-4T-1-BGP成功构建,为后续的蛋白表达实验和功能实验提供实验平台和基础材料。
最新研究发现骨钙素还具有调节糖代谢的功能,在调节糖代谢方面,它在牵制脂肪的同时还能提升胰岛素水平和胰岛素的吸收,骨钙素这种新的功能可能对糖尿病的治疗产生重要影响。
【关键词】：
【学位授予单位】：河北科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：Q782【目录】：
ABSTRACT5-10
第一章 绪论10-20
1.1 骨钙素分子的研究现状10-11
1.2 骨钙素的分子结构及基因表达11-13
1.2.1 骨钙素的分子结构11-12
1.2.2 OC 基因的转录调控及机制12-13
1.3 骨钙素的表达13-15
1.3.1 骨钙素在骨骼中的表达13-14
1.3.2 骨钙素在软骨中的表达14-15
1.3.3 血液中的骨钙素15
1.3.4 骨钙素在其它组织的表达15
1.4 骨钙素的调节功能15-17
1.4.1 Osteocalcin 对血糖稳态的调控15-16
1.4.2 OST-PTP 对Osteocalcin 生物活性功能的调节16
1.4.3 Osteocalcin 在野生型小鼠中对糖代谢的调节功能16-17
1.5 影响BGP 的因素17-19
1.5.1 磷,钙及其比例17-18
1.5.2 维生素A18
1.5.3 维生素K18
1.5.4 维生素D18-19
1.5.5 激素对BGP 基因表达的调节作用19
1.6 骨钙素有待深入研究的问题19-20
第二章 骨钙素基因克隆及真核载体构建20-31
2.1 材料20-22
2.1.1 实验材料20
2.1.2 实验试剂20-21
2.1.3 实验用具及仪器21-22
2.2 实验方法22-26
2.2.1 PCR 扩增骨钙素目的片段22
2.2.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(骨钙素)22-23
2.2.3 构建pcDNA3.1-HA 骨钙素表达载体23-24
2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化24-25
2.2.5 质粒的小量提取﹑纯化与检测25-26
2.3 结果26-30
2.3.1 质粒载体进行酶切26
2.3.2 外源基因BGP 和质粒载体的回收26-27
2.3.3 重组载体的构建27-28
2.3.4 重组克隆的筛选28-29
2.3.5 重组克隆的鉴定29
2.3.6 重组克隆序列的测定29-30
2.4 讨论30-31
第三章 PCDNA3.1(+)-HA-HIS-BGP 真核表达载体构建31-42
3.1 材料31
3.2 实验方法31-35
3.2.1 PCR 扩增BGP 目的片段31-32
3.2.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(BGP)32
3.2.3 构建pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体32-34
3.2.4 pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体的转化及提取34-35
3.2.5 pcDNA3.1(+)-HA-His-BGP 表达载体的检测35
3.3 结果35-40
3.3.1 PCR 扩增BGP 目的片段35-36
3.3.2 PCR 扩增BGP 目的片段双酶切回收36-37
3.3.3 质粒载体的琼脂糖检测37
3.3.4 质粒载体双酶切的琼脂糖凝胶电泳检测37-38
3.3.5 酶连及重组克隆的筛选38
3.3.6 重组克隆的鉴定38-39
3.3.7 重组克隆序列的测定39-40
3.4 讨论40-42
第四章 原核表达载体PGEX-4T-1-BGP 的构建42-51
4.1 材料42
4.2 实验方法42-45
4.2.1 PCR 扩增骨钙素目的片段42-43
4.2.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR 扩增产物(骨钙素)43
4.2.3 构建pGEX-4T-1 骨钙素表达载体43-44
4.2.4 感受态细胞转化44
4.2.5 质粒的小量提取﹑纯化与检测44-45
4.3 结果45-49
4.3.1 pGEX-4T-1 质粒提取与BGP 目的基因PCR 扩增45
4.3.2 目的基因PCR 扩增后纯化回收45-46
4.3.3 新提取质粒载体和目的基因BGP 双酶切46
4.3.4 外源基因和质粒载体胶回收46-47
4.3.5 重组载体的构建47
4.3.6 重组克隆的筛选47-48
4.3.7 重组克隆的鉴定48
4.3.8 重组克隆序列的测定48-49
4.4 讨论49-51
参考文献53-58
欢迎：、、)
支持CAJ、PDF文件格式
【相似文献】
中国期刊全文数据库
孙东波;冯力;刘杰;时洪艳;佟有恩;刘胜旺;童光志;;[J];病毒学报;2006年02期
王立新;白俊杰;叶星;罗建仁;陈宏;简清;劳海华;;[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2006年10期
王宏俊;张培君;龚玉梅;李永清;陈小玲;杨汉春;;[J];中国兽医科学;2006年10期
曹云鹤;陈小玲;贺平丽;陆文清;;[J];生物技术通讯;2006年06期
吴永革;尹艳春;孙天旭;于湘晖;姜春来;金英花;孔维;;[J];中国生物制品学杂志;2007年04期
何方平;王星;林仁勇;卢晓梅;冯晓辉;张亚楼;张跃新;何斌;温浩;;[J];新疆医科大学学报;2007年02期
姚庆荣;郭运玲;孔华;张金文;郭安平;贺立卡;刘恩平;;[J];热带作物学报;2007年01期
申静;罗学刚;周庆峰;叶亮;李松;奚涛;;[J];药物生物技术;2007年04期
徐波;郑永晨;费邵阳;高航;;[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期
屈素洁;黄伟坚;冯建远;朱芸;陈琼;谢丽华;;[J];实验动物科学;2007年06期
中国重要会议论文全文数据库
李慎涛;欧阳红生;张玉静;张锐;廖晓萍;孙博兴;张永亮;;[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
袁菊;成军;洪源;陶明亮;李康;石磊;靳亚平;;[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
钟春燕;柳长柏;;[A];第十届全国生化与分子药理学术会议论文摘要汇编[C];2007年
王晓娟;邬玉兰;刘志刚;;[A];中华医学会2009年全国变态反应学术会议论文汇编[C];2009年
王瑞晓;习欠云;束刚;高萍;王松波;王丽娜;江青艳;张永亮;;[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
宁铂涛;汤永民;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
王平;杨秀利;徐薇;储以微;熊思东;;[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
王秀敏;韩烈保;;[A];全国植物分子育种研讨会摘要集[C];2009年
杨宇;杨欣;孙欣;吴昊;吴江;;[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库
郭伽;[N];大众卫生报;2007年
郭伽;[N];健康报;2006年
张中桥;[N];中国医药报;2006年
周宁人 储德束;[N];健康报;2009年
北京中日友好医院临床研究所
王石麟;[N];辽宁日报;2001年
杨建辉;[N];中国中医药报;2004年
林琳 寒冰;[N];中国医药报;2006年
张芹;[N];连云港日报;2005年
冯友根;[N];中国医药报;2004年
任建民;[N];中国中医药报;2003年
中国博士学位论文全文数据库
郑文杰;[D];第三军医大学;2008年
危少华;[D];苏州大学;2005年
郑璐;[D];第三军医大学;2008年
王（韦华）;[D];西北农林科技大学;2009年
吴汉林;[D];四川大学;2005年
段冷昕;[D];吉林大学;2007年
姜海龙;[D];吉林农业大学;2006年
邓尚龙;[D];吉林农业大学;2008年
崔晓东;[D];山西大学;2012年
张立娜;[D];东北林业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库
夏振民;[D];河北科技大学;2010年
刘晓明;[D];吉林大学;2007年
孟文丽;[D];福建医科大学;2008年
樊可;[D];大连理工大学;2011年
王莉;[D];中国农业大学;2005年
靳翠红;[D];中国医科大学;2005年
王英南;[D];青岛大学;2005年
张苗;[D];浙江大学;2005年
周丹;[D];四川农业大学;2005年
郝炜;[D];西北农林科技大学;2005年
&快捷付款方式
&订购知网充值卡
400-819-9993
《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司
同方知网数字出版技术股份有限公司
地址：北京清华大学 84-48信箱 大众知识服务
出版物经营许可证 新出发京批字第直0595号
订购热线：400-819-82499
服务热线：010--
在线咨询：
传真：010-
京公网安备75号下列有关细胞分裂、生长和分化的选项，不正确的是（） A．抑制癌细胞的DNA复制可以有效控制癌细胞增殖 B．随着细胞的生长，细胞的遗传物质会越来越多 C．细胞分化是基因选择性表达的结果，所以骨细胞与肌细胞的蛋白质种类和数量不同 D．细胞分裂和细胞生长是多细胞生物由小到大的主要原因 [癌细胞、细胞分裂、遗传物质、细胞分化、蛋白质、基因、肌细胞、骨细胞][] - 高中生物试题 - 生物秀
下列有关细胞分裂、生长和分化的选项，不正确的是（）
A．抑制癌细胞的DNA复制可以有效控制癌细胞增殖
B．随着细胞的生长，细胞的遗传物质会越来越多
C．细胞分化是基因选择性表达的结果，所以骨细胞与肌细胞的蛋白质种类和数量不同
D．细胞分裂和细胞生长是多细胞由小到大的主要原因
答案:B【解析】试题分析：A．癌细胞能无限增殖，抑制DNA复制可以有效控制癌细胞增殖；正确。B．细胞的分裂、分化和生长过程中遗传物质都不会改变；错误。 C．细胞分化是基因选择性表达的结果，所以不同细胞的蛋白质种类和数量不同；正确。D．多细胞由小到大的主要原因：细胞分裂使得细胞数目增加，细胞生长使得细胞体积变大；正确。考点：细胞分裂、生长和分化。点评：本题相对综合，可以通过理解记忆的方法平时加以训练。
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-[转贴]佛有指骨，顶骨，舍利，能不能提取DNA克隆佛谢谢了，大神帮忙啊_百度知道骨质疏松致病基因克隆成功
　　日前，山东大学医学院医学遗传学研究所的龚瑶琴教授等通过与国外同行合作，在国际上首次成功克隆了“骨质疏松―假性神经胶质瘤综合征”的致病基因。相关论文日前发表在国际著名的《细胞》杂志上。这一重大突破，为揭示成年骨质疏松的病因并为寻找有效的骨质疏松治疗和预防药物打下了重要基础。
　　龚瑶琴等试图从一种具有骨质疏松临床表现的单基因遗传病“骨质疏松―假性神经胶质瘤综合征”（OPS）着手，寻找揭示常见的成骨质疏松病因及其防治手段的突破口。
　　龚瑶琴等在国内外首先将该综合征的相关基因定位在11号染色体长臂1区3带上，并进一步将致病基因候选区缩小到1～1.5Mb（兆碱基对）区域内。他们采用计算机杂交的方法，建立了这一致病基因候选区域的物理图和基因图，发现低密度脂蛋白受体相关蛋白5（LRP5）基因是该候选区内惟一的已知基因。
　　在对OPS遗传家系进行的系统研究中，龚瑶琴等从9个不同家系中检测到导致疾病的基因突变，证实LRP5基因突变导致了类“骨质疏松―假性神经胶质瘤综合征”。同时还发现，这些家系中携带突变基因但未发病的个体其骨密度也显著低于正常群。而且，这些发现还从被敲除LRP5基因的小鼠身上得到了证实。此外，他们还采用体外表达和器官培养方法，证明LRP5基因在成骨细胞增殖和分化中起着重要的作用。
　　龚瑶琴教授告诉记者，目前他们正在进一步研究该致病基因在调节骨密度的各个环节中所扮演的“角色”，同时着手筛选能够控制骨密度降低的基因药物。
页面功能 【】【字体：
】【】【】
焦点新闻：
温馨提示：如果您怀疑自己有某种健康问题，可到或尽快去医院就医治疗。}