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大鼠血管内膜损伤模型的建立
作者：王元占&&赵军礼&&&刘谋荣
【关键词】&
&【文献标识码】 B 【文章编号】 （0-01
血管内膜损伤，是人类多种疾病发生的直接或间接原因，可致机体发生动脉粥样硬化、血栓、血管增生、血管狭窄和局灶性缺血坏死等，都严重威胁着人类的健康。在开展上述疾病的研究，以及作用心血管系统的药物研究中，血管内膜损伤的动物模型都是必需的。因此，建立一种确实、可行、安全的血管内膜损伤的动物模型，以取代原有的造模方法，解决普遍存在的成功率低、安全性差、损伤程度不均匀等问题。现就有关情况报告如下。
1 材料与方法
1.1 动物 200～300g SD大鼠，性别不限，由本院动物所提供。
1.2 药物与器械 （1）3%戊巴比妥钠，9-0无损伤缝合线，6.3倍手术显微镜，显微手术器械一套，手术切开包1个。（2）球囊导管:利用介入治疗室扩张冠状动脉的20mm×2.5mm旧球囊导管，由Cordis公司生产，每次使用前，均应检查球囊导管的充放气情况，确保不漏气，并记下充放气的体积差。（3）肝素盐水:将12500U的肝素注射液溶于2500ml生理盐水中备用。
1.3 麻醉及术前准备 （1）麻醉:3%戊巴比妥钠腹腔注射，1ml/kg体重。（2）备皮:取仰卧位，用橡皮筋固定四肢及头部，从左下颌后缘至胸骨前缘连线旁开中心0.5cm备皮，常规消毒。
1.4 手术方法 （1）由左下颌后缘向胸骨前端切一斜行切口，钝性分离皮下组织及肌肉，完全暴露左侧颈动脉，用玻璃分针分离与血管并行的神经后，穿入4 # 缝合线，由助手将线提起，在提线两侧各上一个血管夹，先近心，后远心。在手术显微镜下，用显微剪在动脉壁剪一横切口，以血管壁周长的四分之一长度为宜，切口应尽量整齐，一次剪开为佳。随后用肝素盐水冲洗血管内及周围。术者持球囊导管向心脏方向插入血管（此时的导管应插入原配置的引导钢丝，以保持导管的硬度和弹性），穿过提线后，由助手拉紧提线，并取下近心端的血管夹，继续前送导管，当导管插入深度达到1.5cm左右时，可退出1～2cm引导钢丝，继续前插，深度达到3～3.5cm时停止，此时应完全抽出引导钢丝，向球囊充气（可用注射器，也可用专用充气泵），根据事前确认的充放气差值充入气体，此时松开提线，应为完全不出 血。充满气后回抽，如感到拉动困难，应是充气过量，可适当放气后再拉，手感能抽动，但阻力较大即可缓慢回抽，因血管径为近心大于远心，所以应边抽边放气，当球囊尾端退出血管壁的切口时，停止拉动，完全放气后，再次插入，如此再重复1次即可。最后，迅速抽出球囊并拉紧提线，再上血管夹。（2）缝合。首先用肝素盐水冲洗血管内外，保证无血凝块及余血，修剪切口，使之平整。在显微镜下用9-0的无损伤缝合线缝合切口，一般缝合5～6针即可，缝合好后先开放远心端的血管夹，再开放近心端的血管夹，如漏血轻微，按压无菌干棉球即可止血，如有大的出血，可再上血管夹后补针缝合。在确认畅通、无出血时，可在创面撒布青霉素粉，肌层整理复位，不需缝合，间断缝合皮肤即可。
2 效果及注意事项
2.1 效果评价 术后3、5、7天分别麻醉大鼠后，在原切口处切开，分离出血管，外观可见血管明显异于正常血管，明显发绀，以3天最深，5天次之，7天较浅，由此说明，血管内膜的损伤是确实的;损伤随着时间的推移逐渐得到修复。处死大鼠，完全分离颈动脉，可见损伤从主动脉弓分岔到插入切口，纵向剖开施术血管，见血管内壁有极薄的附着物，血管壁明显增厚，血管内膜以3天色最深，依次变浅。损伤的总长度达到3cm左右，根据上述变化，可以说，血管内膜的损伤是确实的（100%）;术后无一死亡，说明是安全的。但是有1例的血管内完全凝血，究其原因，可能是创口凝血形成血栓。
2.2 注意事项 （1）术前一定要进行充气、放气的检查，确保球囊导管无漏气、无皱折;长期不用，应洗净晒干，每次使用前及使用间隙，应把球囊及其后的10cm左右浸入肝素盐水中。（2）当球囊插入并充气后，术者应缓慢抽动，如阻力太大，应适当放气，整个过程应遵循边抽边放气的原则，切忌野蛮粗暴。（3）颈动脉切口要尽量的小，以能通过无气的球囊导管为宜，切口要整齐，这样，不但便于操作，而且对显微缝合也极为有利。
该模型的建立有确实可行的优点，且费用较低，但对设备的要求相对较高，如需有手术显微镜、显微器械等，球囊导管如购新品一根就需几千元。可用扩张人冠状动脉的旧导管（医院的数字减影室有）一般来说，一个模型的建造，手术时间约20～25min。
作者单位:1510515广州第一军医大学南方医院
2广州中医药大学
（编辑曲 全）
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一、豚鼠采血法
1.耳缘剪口采血
将耳消毒后，用锐器（刀或刀片）割破耳缘，在切口边缘涂抹20%柠檬酸钠溶液，阻止血凝，则血可自切口自动流出，进入盛器。操作时，使耳充血效果较好。此法能采血0.5ml左右。
2.心脏采血
取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘的正中，选心跳最显的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小，一般可不必将动物固定在解剖台上，而可由助手握住前后肢进行采血即可。成年豚鼠每周采血应不超过10ml为宜。
3.肌动脉采血
将动脉仰位固定在手术台上，剪去腹股沟区的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切开长约2～3cm的皮肤，使股动脉暴露及分离。然后，用镊子提起股动脉，远端结扎，近端用止血钳夹住，在动脉中央剪一小孔，用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放开止血钳，血液即导管口流出。一次可采血10～20ml。
4.背中足静脉取血
助手固定动物，将其右或左右膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射针刺入静脉。拔针后立即出血，呈半球状隆起。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢交替使用。
二、兔采血法
1.耳静脉采血
本法为最常用的取血法之一，常作多次反复取血用，因此，保护耳缘静脉，防止发生栓塞特别重要。 将兔放入仅露出头部及两耳的固定盒中，或由助手以手扶住。选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，用连有5（1/2）号针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血，此种采血法一次最多可采血5～10ml。
2.耳中央动脉采血
将兔置于兔固定筒内，在兔耳的中央有一条较粗、颜色较鲜红的中央动脉，用左手固定兔耳，右手取注射器，在中央动脉的末端，沿着动脉平行地向心方向刺入动脉，即可见动脉血进入针筒，取血完毕后注意止血。此法一次抽血可达15ml。但抽血时应注意，由于兔耳中央动脉容易发生痉挛性收缩，因此抽血前，必须先让兔耳充分充血，当动脉扩张，未发生痉挛性收缩之前立即进行抽血，如果等待时间过长，动脉经常会发生较长时间的痉挛性收缩。取血用的针头一般用6号针头，不要太细。针刺部位从中央动脉末端开始。不要在近耳根部取血，因耳根部软组织厚，血管位置略深，易刺透血管造成皮下出血。
3.心脏取血
将家兔仰卧固定，在第三肋间胸骨左缘3毫米处注射针垂直刺入心脏，血液随即进入针管。
注意事项有：
⑴动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固；
　　⑵如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点；
　　⑶在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心，肺、一次可取血20～25ml。
4.后肢胫部皮下静脉取血
将兔仰卧固定于兔固定板上，或由一人将兔固定好。拔去胫部被毛，在胫部上端股部扎以橡皮管，则在胫部外侧浅表皮下，可清楚见到皮下静脉。用左手两指固定好静脉，右手取带有5（1/2）号针头的注射器内皮下静脉平行方向刺入血管，抽一下针栓，如血进入注射器，表示针头已刺入血管，即可取血。一次可取2～5ml。取完后必须用棉球压迫取血部位止血，时间要略长些，因此处不易止血。如止血不妥，可造成皮下血肿，影响连续多次取血。
5.股静脉、颈静脉取血
先作股静脉和颈静脉暴露分离手术
⑴股静脉取血 注射器平行于血管，从股静脉下端向心方向刺入，徐徐抽动针栓即可取血。抽血完毕后要注意止血。股静脉较易止血，用于纱布轻压取血部位即可。若连续多次取血，取血部位宜尽量选择靠离心端。
　　⑵外颈静脉取血 注射器由近心端(距颈静脉分支2～3厘米处)向头侧端顺血管平等方向刺入，使注射针一直引深至颈静脉分支叉处，即可取血。此处血管较粗，很容易取血，取血量也较多，一次可取10ml以上。取血完毕，拔出针头，用干纱布轻轻压迫取血部位也易止血。兔急性实验的静脉取血，用此法较方便。
三、狗、猫采血法
1.后肢外侧小隐静脉和前肢内侧下头静脉采血
此法最常用，且方便。后肢外侧小隐静脉在后肢胫部下1/3的外侧浅表的皮下，由前侧方向后行走。抽血前，将狗固定在狗架上或使狗侧卧，由助手将狗固定好。将抽血部位的毛剪去，碘酒一酒精消毒皮肤。采血者左手拇指和食指握紧剪毛区上部，使下肢静脉充盈，右手用连有6号或7号针头的消毒器迅速穿刺入静脉，左手放松将针固定，以适当速度抽血（以无气泡为宜）。或将胶皮带绑在狗股部，或由助手握紧股部，即可，若仅需少量血液，可以不用注射器抽取，只需用针头直接刺入静脉，待血从针孔自然滴出，放入盛器或作涂片。 采集前肢内侧皮下的头静脉血时，操作方法基本与上述相同。一只狗一般采10～20ml血并不困难。
2.股动脉采血
本法为采取狗动脉血最常用的方法。操作也较简便。稍加以训练的狗，在清醒状态下将狗卧位固定于狗解剖台上。伸展后肢向外伸直，暴露腹肥肉沟三角动脉搏动的部位，剪去毛。用碘酒消毒。左手中指、食指探摸股动脉跳动部位，并固定好血管，右手取连有5（1/2）号针头的注射器，针头由动脉跳动处直接刺入血管，若刺入动脉一般可见鲜红血液流入注射器，有时还需微微转动一下针头或上下移动一下针头，方见鲜血流入。有时，往往刺入静脉，必须重抽之。待抽血完毕，迅速拔出针头，用干药棉压迫止血2～3分钟。
3.心脏采血
本法最好在麻醉下进行，驯服的狗不麻醉也行。将固定在手术台上，前肢向背侧方向固定，暴露胸部，将左侧第3-5肋间的被毛剪去，用碘酒-酒精消毒皮肤。采血者用左手触摸左侧3～5肋间处，选择心跳最显处穿刺。一般选择胸骨左缘外1cm第4肋间处。取连有6（1/2）号针头的注射器，由上述部位进针，并向动物背侧方向垂直刺入心脏。采血者可随针接触心跳的感觉，随时调整刺入方向和浓度，摆动的角度尽量小，避免损伤心肌过重，或造成胸腔大出血。当针头正确刺入心脏时，血即可进入抽射器，可抽取多量血液。
4.耳缘静脉采血
本法宜取少量血液作血常规或微量酶活力检查等。有训练的狗不必绑嘴，剪去耳尖部短毛，即可见耳缘静脉，手法基本与兔相同。
狗不需麻醉，经训练的狗不需固定，未经训练的狗应予固定。取侧卧位，剪去颈部被毛约10×3cm2范围，用碘酒、酒精消毒皮肤。将狗颈部拉直，头尽量后抑。用左手拇指压住颈静脉入胸部位的皮肤。使颈静脉怒张，右手取连有6（1/2）号针头的注射器。针头沿血管平行方向向心端刺往前血管。由于此静脉在皮下易滑动，针刺时除用左手固定好血管外，刺入要准确。取血后注意压迫止血。采用此法一次可取较多量的血。猫的采血法基本与狗相同。常采用前肢皮下头静脉、后肢的股静脉、耳缘静脉取血。需大量血液时可从颈静脉取血。方法见前述。
四、猴采血法
与人类的采血法相似，常用者有以下几种：
1.毛细血管采血
需血量少时，可在猴拇指或足跟等处采血。采血方法与人的手指或耳垂处的采血法相同。
2.静脉采血
最宜部位是后肢皮下静脉及外颈静脉。后肢皮下静脉的取血法与狗相似。用外颈静脉采血时，把猴固定在猴台上，侧卧，头部略低于台面，助手固定猴的头部与肩部。先剪去颈部的毛，用碘酒-酒精消毒，即可见位于上颌角与锁骨中点之间的怒张的外颈静脉。用左手拇指按住静脉，右手持连6（1/2）号针头的注射器，其它操作与人的静脉取血同。也可在肘窝、腕骨、手背及足背选静脉采血。但这些静脉更细、易滑动、穿刺难，血流出速度慢。
3.动脉采血
股动脉可触及。取血量多时常被优先选用，手法与狗股动脉采血相似。此外，肱动脉与桡动脉也可用。
五、小鼠大鼠的采血方法
1.割（剪）尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3～0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸管吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。
2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时（仅做白细胞计数或血红蛋白检查），可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。
3.眼眶静脉丛采血
采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(（大鼠采血需带上纱手套），应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈（3～4cm）硬质玻璃滴管（毛细管内径0.5～1.0mm），使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1～0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20～25g的小鼠每次可采血0.2～0.3ml；体重200～300g大鼠每次可采血0.5～1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。
4.断头取血
采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大（小）鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2～4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2ml；大鼠约5～10ml。
5.心脏采血
鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5～0.6ml；大鼠约0.8～1.2ml。
6.颈动静脉采血
先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。
7.腹主动脉采血
最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。
8.股动（静）脉采血
先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15～20g小鼠采血约0.2～0.8ml，大鼠约0.4～0.6ml。大鼠一般操作技术_图文_百度文库
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