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Powered by鹿茸提取物活性成分检测及其生物效应研究--《西北农林科技大学》2012年硕士论文
鹿茸提取物活性成分检测及其生物效应研究
【摘要】：目的旨在确定鹿茸中活性成分含量，评价鹿茸对小鼠免疫功能和神经元的影响及其对肝脏的保护作用。为合理利用鹿茸提供理论依据。
方法①昆白小鼠72只，随机分为正常组（灌胃生理盐水，n=18），高、中、低剂量组（灌胃鹿茸冻干粉1、3、5g/kg，n=18），灌胃9周（63d）后处死，取材，分析生理生化指标。②鹿茸中活性成分的检测。用Bradford法测定蛋白质含量，用高效液相色谱法测定唾液酸含量，用试剂盒测定胆固醇含量。③鹿茸对小鼠免疫系统的影响。采用MTT法测定小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化功能的作用，采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红试验测定鹿茸对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响，测定小鼠脾脏指数。④鹿茸对小鼠神经系统的影响。用试剂盒检测脑组织中SOD、GSH-px、MAO活性和MDA含量，采用免疫组化法测定小鼠大脑皮层促凋亡蛋白Bax和凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达量。⑤鹿茸对小鼠肝脏的保护作用。测定小鼠的肝脏中SOD、GSH-px活性和MDA含量，采用免疫组化法测定肝脏中Bax蛋白和Bcl-2蛋白的表达量，用试剂盒检测灌服56%乙醇溶液12h后小鼠血清中AST、ALT活性和TB含量。组织材料用4%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，HE染色。
结果①蛋白质测定标准曲线方程为y=0.9（r=0.9926，P0.01），鹿茸干物质含量为19.23%，样品中蛋白质浓度为14.96mg/ml，占鹿茸干重的24.93%；唾液酸检测标准曲线方程为y=1.（r=0.8662，P0.05），样品中唾液酸含量为1.37μg/ml，占鹿茸干重的0.02%；胆固醇含量为0.40μg/ml，占鹿茸干重的0.0059%。②高剂量鹿茸（5g/kg）对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用明显高于低剂量组和对照组（P0.01），中剂量组高于低剂量组和对照组（P0.05）；高剂量组小鼠脾脏指数显著高于对照组（P0.05），中剂量鹿茸对小鼠T淋巴细胞增殖转化功能的增强作用极显著（P0.01），对小鼠B淋巴细胞增殖转化功能的增强作用显著（P0.05）。③高剂量组脑组织中MAO含量极显著低于对照组和中、低剂量组（P0.01），中剂量组MAO含量极显著低于对照组和低剂量组（P0.01），高剂量组GSH-Px极显著高于对照组和中、低剂量组（P0.01），高剂量组Bcl-2蛋白表达量极显著高于对照组和中、低剂量组（P0.01），低剂量组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组和高、中剂量组（P0.05）；④高剂量组肝脏中SOD活性极显著高于对照组和中、低剂量组（P0.01），中剂量组MAO活性显著高于对照组和低剂量组（P0.05），高剂量组GSH-Px活性显著高于对照组和中、低剂量组（P0.05），对照组MDA含量极显著高于高、中、低剂量组（P0.01），低剂量组MDA含量极显著高于中、高剂量组（P0.01），高剂量组肝脏中Bcl-2蛋白表达量显著高于对照组和中、低剂量组（P0.05），高剂量组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组和中、低剂量组（P0.01），小鼠肝脏HE染色图片看，除正常组小鼠肝脏细胞结构清晰、完整，高、中、低剂量组和对照组小鼠肝脏在酒精作用下，细胞肿胀、颗粒变性，细胞质内有红色颗粒，细胞膜受损，肝细胞脂肪变性，肝窦隙聚集较多红细胞，部分肝细胞坏死，可见炎性细胞。酒精损伤后高、中剂量鹿茸组小鼠血清中AST、ALT的活力都显著低于低剂量组和对照组（P0.05）。
结论①鹿茸中干物质含量为19.23%，蛋白质含量占鹿茸干重的24.93%，唾液酸含量占鹿茸干重的0.02%，胆固醇含量为0.0059%。②中鹿茸剂量（3mg/kg）对机体细胞免疫具有增强作用，对吞噬细胞功能有增强作用，对机体体液免疫增强作用不明显。③高剂量鹿茸（5mg/kg）可减轻神经细胞的氧化损伤，抑制神经细胞凋亡。④高剂量鹿茸（5mg/kg）可以减轻肝细胞的氧化损伤，抵抗肝细胞凋亡，对酒精肝具有保护作用。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2012【分类号】：R285.5【目录】：
摘要5-7ABSTRACT7-12第一章 文献综述12-19 1.1 鹿茸中的营养物质分析12-13
1.1.1 蛋白质、多肽、氨基酸12
1.1.2 脂质类12-13 1.2 鹿茸的生理作用13-19
1.2.1 抗肿瘤作用13-14
1.2.2 对抗肝损伤的作用14
1.2.3 抗氧化作用14-16
1.2.4 促进创伤愈合16
1.2.5 抗凋亡作用16-17
1.2.6 神经系统保护作用17-18
1.2.7 对性功能的影响18-19第二章 鹿茸提取物中活性成分的检测19-26 2.1 材料与方法19-21
2.1.1 主要仪器设备和试剂19
2.1.2 试验方法19-21 2.2 检测结果21-23
2.2.1 干物质含量21
2.2.2 蛋白质含量21
2.2.3 唾液酸含量21-22
2.2.4 胆固醇含量22-23 2.3 讨论23-25
2.3.1 干物质含量23
2.3.2 蛋白质含量23-24
2.3.3 唾液酸含量测定的试样水解条件优化24-25
2.3.4 胆固醇含量25 2.4 小结25-26第三章 鹿茸对小鼠免疫功能的影响26-32 3.1 材料26
3.1.1 试验动物26
3.1.2 主要试验试剂及仪器26 3.2 方法26-28
3.2.1 试验动物分组与处理26-27
3.2.2 鹿茸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响27
3.2.3 鹿茸对小鼠脾脏指数的影响27
3.2.4 鹿茸对小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化功能的影响27-28
3.2.5 数据分析28 3.3 结果28-30
3.3.1 鹿茸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响28
3.3.2 鹿茸对小鼠脾脏指数的影响28-29
3.3.3 鹿茸对小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化功能的影响29-30 3.4 讨论30-31
3.4.1 鹿茸对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响30
3.4.2 鹿茸对小鼠脾脏指数的影响30
3.4.3 鹿茸对小鼠脾脏淋巴细胞增殖转化功能的影响30-31 3.5 小结31-32第四章 鹿茸对小鼠神经元的抗氧化和凋亡相关蛋白表达的影响32-39 4.1 材料与方法32-33
4.1.1 实验动物32
4.1.2 试剂32
4.1.3 方法32-33
4.1.4 图像观察与分析33
4.1.5 统计学处理33 4.2 结果33-36
4.2.1 鹿茸对小鼠抗氧化指标的影响33
4.2.2 鹿茸对凋亡相关蛋白表达的影响33-36 4.3 讨论36-38
4.3.1 鹿茸对小鼠抗氧化指标的影响36-37
4.3.2 鹿茸对凋亡相关蛋白表达的影响37-38 4.4 小结38-39第五章 鹿茸对肝细胞的保护作用39-46 5.1 材料与方法39-40
5.1.1 试验动物39
5.1.2 试验仪器试剂39
5.1.3 试验方法39
5.1.4 图像观察与分析39-40
5.1.5 统计学处理40 5.2 试验结果40-44
5.2.1 鹿茸对肝脏的抗氧化、抗凋亡作用40-43
5.2.2 鹿茸对乙醇导致肝损伤的保护作用43-44 5.3 讨论44-45
5.3.1 鹿茸对肝脏的抗氧化、抗凋亡作用44-45
5.3.2 鹿茸对乙醇导致肝损伤的保护作用45 5.4 小结45-46第六章 结论46-47参考文献47-54致谢54-55作者简介55
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酒精所致精神障碍31例临床分析
作者：黄惠芳
【关键词】& 酒精；精神障碍；临床分析
&&& 【摘要】& 目的& 探讨酒精所致精神障碍的临床特征。方法& 对酒精所致精神障碍患者的症状特征、好发人群等临床资料进行分析。结果& 患者多为男性，年龄高发段为31～50岁；文化程度低、体力劳动者发病率高；精神障碍以幻觉妄想、震颤谵妄多见，以肝损害、脑损害、心脏损害多见；治疗显效易复发。结论& 酒精所致精神障碍发病率高，后果严重，应高度关注。
&&& 【关键词】& 酒精；精神障碍；临床分析
&&&& Clinical& analyses& of& 31& patients& with& mental& disorders& induced& by& alcohol
&&& HUANG& Hui-fang.Ankang& Hospital& of& Tianjin& Public& Security& Bureau，Tianjin 300240，China
&&& 【Abstract】& Objective& To explore& the& clinical& features of& patients& with& mental& disorder due to& alcohol.Methods& We& analyzed& clinical& data，including& symptoms& and& high& risk (prevalent)& group，etc.Results& The majority& of& the& patients& with& mental& disorder& induced by& alcohol& were& male，the& most& susceptive& age& was& 31～50，with& less& education，the& incidence& took& place& more& in& the& manual& workers.The mental& disorder had& such& main& symptoms& as& hallucinosis，tremor delirium，and had& such more common& symptoms& of& hepatic& injury，cerebral damage& and& heart& injury& as& well.Conclusion& We& should& pay& more& attention& on& the& high& morbidity& risk and the severe& sequence& effect& of& the& patients& with& mental& disorder& due& to& alcohol.
&&& 【Key words】& alcohol；mental disorder；clinical analysis
&&& 我国近年来，随着经济的发展，人民生活水平日益提高，在社会心理、生理因素影响下，嗜酒者、酒精所致疾病，随时间的推移呈逐年增加趋势。现将我院符合CCMD-3中酒精所致精神障碍诊断的31例病人资料分析整理如下。
&&& 1& 一般资料
&&& 1.1& 性别、年龄、婚姻、民族& 31例均为男性病人，年龄最小的23岁，最大的74岁，平均年龄(40±8)岁，20～30岁1例(3.23%)，31～40岁15例(48.39%)，41～50岁13例(41.94%)，51～60岁2例(6.45%)。未婚2例(6.25%)，已婚23例(74.19%)，离异6例(24.13%)。回族2例(6.45%)，汉族29例(93.55%)。
&&& 1.2& 文化水平、职业& 大学1例(3.23%)，高中2例(6.45%)，初中23例(74.19%)，小学5例(21.13%)，工人25例(80.65%)，农民4例(12.90%)，干部2例(6.45%)。
&&& 1.3& 饮酒史、初饮年龄& 饮酒史最短者5年，最长者40年，平均饮酒史(17±6)年，10年以内6例(24.13%)，11～15年5例(16.13%)，16～20年16例(51.61%)，21～25年2例(6.45%)，26～30年1例(3.22%)，35～40年1例(3.22%)。初饮年龄，最小年龄14岁，最大年龄38岁，平均年龄(24±9)岁，20岁以下者10例(32.26%)，21～25岁10例(32.26%)，26～30岁6例(19.35%)，31～35岁3例(9.68%)，36～40岁2例(6.45%)。
&&& 1.4& 日摄入酒精量& 最低剂量75ml，最高剂量375ml，平均276.13ml。100ml以内1例(3.23%)，101～200ml为4例(12.9%)，201～300ml为20例(64.52%)，301～400ml为3例(9.68%)，401～500ml为3例(9.68%)。
&&& 1.5& 饮酒种类、饮酒方式& 样本基本以饮白酒为饮酒种类，饮酒方式中，独饮2例(6.45%)，群饮5例(16.13%)，群饮中2例职业性饮酒。
&&& 1.6& 饮酒原因& 职业性饮酒2例(6.45%)，劳累饮酒8例(25.80%)，追求饮酒后舒服愉快8例(25.80%)，情绪不好9例(29.03%)，受他人影响饮酒4例(12.90%)。
&&& 2& 临床资料
&&& 2.1& 分型& 震颤谵妄4例(12.90%)，戒断综合征3例(9.68%)，酒依赖15例(48.38%)，酒中毒性幻觉症7例(22.58%)，酒中毒性妄想症1例(3.23%)，酒中毒性脑病1例(3.23%)。
&&& 2.2& 精神症状& 妄想5例(16.13%)，幻听17例(54.84%)，幻视8例(25.81%)，谵妄5例(16.13%)，智能损害1例(3.23%)。
&&& 2.3& 神经系统症状& 震颤10例(32.26%)，共济失调5例(16.13%)，意识障碍5例(16.13%)，植物神经功能紊乱6例(19.35%)，癫痫2例(6.45%)。
&&& 2.4& 躯体症状& 慢性胃炎2例(6.45%)，消化道出血2例(6.45%)，脂肪肝8例(25.80%)，心脏疾患9例(29.03%)，脑病1例(3.22%)，高血压3例(9.68%)。
&&& 2.5& 辅助检查& 脑地形图异常4例(12.90%)，腹部B超酒精肝8例(25.80%)，心电图异常8例(25.81%)，肝功能异常12例(38.71%)。
&&& 2.6& 治疗& 苯二氮类药物替代治疗11例(35.48%)，小剂量精神病药物治疗14例(45.16%)，支持治疗18例(58.06%)，保肝治疗11例(35.48%)，纠正水电解质紊乱4例(12.90%)。
&&& 2.7& 疗效& 临床痊愈25例(80.65%)，显效5例(16.13%)，转院1例(3.23%)。
&&& 3& 讨论
&&& 　　酒精大量使用可导致发生依赖，长期依赖由于其毒性作用可致躯体的、神经系统、多脏器损害。长期饮酒可引起神经系统不可逆反应而出现各种神经、精神症状［1］。乙醇是一种中枢神经抑制剂。
&&& 　本资料显示：发病年龄集中在31～50岁，共28例(90.32％)，这一集中趋势体现初发病者以中青年居多。婚姻因素中6例离异病人均因饮酒，体现患者嗜酒不顾抛弃一切甚至家庭的人格改变。虽只占19.35%，但对家庭的影响较严重。文化水平以中学发生率最高23例(74.19%)，大学生发生率最低1例(3.23%)，职业以工人、农民、体力劳动者最高29例(93.55%)，干部发生率仅2例(6.45%)，以上资料分析结果与国内研究：酒依赖危险因素，按作用强度显示依次为：大量饮酒，男性、年龄较大、体力劳动、受教育年限少的观点基本符合［2］。饮酒史10年以内少，随时间延长16～20年(51.61%)，达酒史最高发生率，以后随时间延长频率下降，提示16～20年饮酒史为形成疾病的高发段，酒精所致精神障碍形成的饮酒史多在16～20年间。初饮酒年龄25岁以下者20例(64.52%)，这可能与样本低文化者多易在低龄形成饮酒习惯有关。样本示每日摄入酒精量201～300ml者20例(64.52%)，说明样本嗜酒者多数日饮酒量较大，高达200ml以上，提示饮白酒类者增长酒量时因酒精浓度高，容易形成长量较快的情况。样本饮酒方式对疾病形成影响不大，但其中2例病人为干部，职业性饮酒是饮用方式与疾病形成有一定相关性。
&&& 　临床资料分型中震颤谵妄4例(12.90%)与国内研究有差异［3］。精神症状发生频度高的为幻听17例(54.84%)，幻视8例(25.81%)，幻听表现为意识清晰状态下斥责、威胁性言语性幻听，幻视表现减少酒量后出现的小动物、小虫子使患者讨厌反感。妄想症状多与幻听有关，多继发于幻听。神经系统症状：震颤10例(32.26%)，癫痫最少2例(6.45%)，震颤为样本神经损害最高频率症状，既有清醒状态下，也有与意识障碍同时发生，癫痫多在较重的中毒病例中出现与酒中毒程度有关，如震颤谵妄或严重的戒断各有1例出现癫痫，与饮酒史长短无关［4］。躯体损害临床以心脏、肝脏、胃、脑等损害有关。心脏损害9例(29.03%)，脂肪肝8例(25.80%)。以上两脏器损害出现率高，分析肝损害可能与乙醇进入人体主要在肝脏，乙醇氧化过程中，肝其他正常功能暂时停止，其他的物质代谢也让位于乙醇。长期饮酒可使乙醇代谢速度增加30%～50%。正常每人每小时代谢10ml乙醇，当大量饮酒超过正常代谢乙醇浓度时，血液中乙醇浓度会明显升高，提示乙醇超浓度超过肝脏的代谢能力。本组病人肝损害与长期大量饮酒超过肝代谢能力，个体血液中酒浓度长期维持较高，抑制糖异生产生低血糖、升高乳酸水平，以上改变使脂肪合成增加，代谢减慢，血脂升高，肝内脂肪堆积。另外肝脏集中代谢乙醇而对其他需代谢毒物清除能力下降，使之更容易对肝造成损害。心脏损害表现：心律失常、心肌缺血，长期大量饮酒对心脏可产生各种毒性反应，使血压升高，心肌负荷加大，耗氧量增加，心肌缺血。酒精使脂肪代谢障碍，血脂增高，加剧冠状动脉硬化形成心脏损害。酒依赖心脏改变一般发生在10年以上［5］，样本中只1例，饮酒史在10年以下，其他均为10年以上，心脏病发生8例(25.80%)，不反映饮酒史与心脏病的关系与张殿忠的个体差异观点相似［6］。辅助检查中显示脂肪肝与心脏病心电图异常一致性好。值得一提的是脑电图异常4例(12.90%)，表现额叶异常波符合酒对中枢神经损害相关性。治疗31例病人中针对戒断症状采用交叉耐受药物安定类药物治疗，精神症状明显的采用小剂量抗精神病药物治疗，水电解质紊乱的采用支持、补液、纠正水电解质治疗，肝损害的使用保肝药物。疗效痊愈25例(80.65%)，显效5例(16.13%)，转院1例(3.23%)。治疗结果满意，提示酒精性疾病可逆性强。
&&& 　本资料分析：样本发病年龄31～50岁之间为高发段，好发人群为低文化水平、体力劳动者，饮酒史16～20年为形成疾病的危险年限，初饮酒年龄25岁以下，发病类型以重症中毒者如：震颤谵妄、戒断综合征、脑病较少，其他类型常见。精神症状以幻觉妄想多见，谵妄少见。躯体疾病以脂肪肝、心律失常多见，且辅助检查有一致性，治疗采用对症处置，疗效较高，酒精所致精神障碍后果严重，故提高健康意识，提倡以饮料代酒，减少酒用量，尤其白酒用量是十分必要的，要高度关注高危人群，制定对策，防止酒精所致精神障碍的泛滥。本样本还存在许多不足之处，且样本小可能存在许多与大样本调查差异，有待进一步研究。望同道予以指教。
&&& 【参考文献】
&&& 1& 刘协和，杨泉.精神科急诊医学.长沙：湖南科学技术出版社，4.
&&& 2& 沈渔.精神病学.第四版.北京：人民卫生出版社，.
&&& 3& 方问明.酒精所致震颤谵妄20例分析.中国药物滥用防治杂志，)：39.
&&& 4& 杜万君，郭菘.震颤性谵妄的治疗进展.中国药物依赖性杂志，)：246-248.
&&& 5& 姜佐宁.药物成瘾的临床与治疗.北京：人民卫生出版社，0.
&&& 6& 张殿忠.酒依赖105例心电图分析.中国药物滥用防治杂志，)：35-36.
& &&& 作者单位：300240 天津，天津公安局安康医院
　& (编辑：守& 中)
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