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猪病料采集方法及注意事项
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湖南农业大学动物保健工程技术研究中心是由湖南农业大学动物医学院、长沙绿叶生物科技有限、长沙树人牧业科技有限公司联合组建的产学研合作科研平台。中心聘请湖南农业大学袁慧教授等10多名资深专家担任高级顾问，青年学者文利新博士担任中心主任，中心拥有一批年轻的博士和硕士等组成的研发队伍，主要从事动物保健理论、动物亚健康调控、功能性饲料和功能性畜产品的研究和开发。其主要为提供免疫监测、免疫程序制定的咨询等服务，免疫增强和调节剂以及抗免疫应激剂的产业化和免疫保健的推广，为养猪业健康发展保架护航。
湖南农业大学动物保健工程技术研究中心提供检测项目：猪瘟、伪狂、蓝耳、圆环和口蹄疫等抗体检测。
为了使广大养殖朋友更好的对猪场进行疾病控制，我们制定一份病料采集方法注意事项，供广大养殖朋友参考。
采集病料前需要进行器械的灭菌消毒，使用一次性针头和注射器及真空采血管；采取一种病料，使用一套器械与容器；做好计划，如要采集足够的数量及采集的部位、种类等；还要准备采集后的用具等消毒、清洗液及容器等用品。
一、血样采集
具体步骤如下：
1 准备好灭菌（至少是干净的，但必须保证干燥）干燥的带盖子的塑料试管或者青霉素瓶若干；准备好专业的采血针，或者一次性注射器（5-10毫升）。保证每个血样一个瓶子或一个针筒。
2 采血。采血前，在相应的注射器或容器上做好标记。
（1）耳静脉采血。本法为最常用的取血法之一（适用于中、大猪）。将猪保定后，或由助手以手扶住头部及耳部。选耳静脉清晰的耳朵，用75%酒精局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦猪耳，使静脉扩张，用连有针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管,等血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血。黑色皮肤猪耳静脉看不清，用手电筒在耳、腹面照射利于采血。
（2）前腔静脉采血（适用于仔猪，小猪）：猪前腔静脉，在第一对肋骨间的胸腔入口处的气管腹侧面，由左右两侧颈静脉和腋静脉汇合形成。该血管在一周龄猪直径约5毫米，成年猪约1厘米以上。采血部位在第一对肋骨与胸骨柄结合处直前，但由于左侧靠近隔神经，以右侧采血为宜。
（3） 注意事项：
选用合适的注射器及针头
公宜选用16号 50mm针头；30kg以上的中大猪，宜选用12号 38mm针头；10-30kg小猪，可选用9号 25mm(一次性注射器常配的针头)；10kg以下，应选择9号 20mm针头(一次性注射器所配的另一种规格的针头)。
选准进针的部位
一般来说，30千克以下的小猪应采两前肢与气管交汇处，种公母猪和30千克以上的中大猪可选颈部最低凹处。进针时又要掌握好一定的方向、角度和深度，要及时调整。血管被刺穿，会引起血肿，要立即停止采血，须换另一头猪采血。特别要注意的是对仔猪采血时，不能太猛、太深，以免伤及心包或心脏。
特别指出，血液和血清是不同的概念！血清是血液的组成部分，它必须从血液中分离出来后，才能用于血清学试验，但是这种分离过程需要专业人员来操作。因此，采集的血样，最好在凝固后，直接送到检测单位，以保证血清学试验的正确进行。一般采血2～5毫升就足以满足实验室诊断的用量了。重点提示，用于血清学试验的血样，不能加任何抗凝血剂！
3 血液保存：将采完血样的注射器活塞，微微拔出一些，使针筒内留有部分空气，然后盖好针头盖子，将注射器针头向上成30度角，斜放，等待血液完全凝固（大约10～30分钟），此过程中不能移动注射器，防止溶血。用真空采血器采集的血样，直接倾斜放置好。夏天在常温下放置一段时间，冬天要放置在25～37℃温水中一段时间，以利于血液中血清的析出。血样送检时，在保温箱加适量的冰块防止血液变质，送检过程中尽量防止剧烈振荡。
注意事项：（1）擦拭采血部位的酒精未干，不要立即采血。血液混进酒精后易 造成溶血（使检测结果不准）；
（2）血液在运输过程中，防止坐摩托车、拖拉机等剧烈展荡，使血细胞破裂引起溶血（要注意血液防震）
（3）血液存放的容器要洗净，确保干燥。
二、组织样采集：
疑似猪瘟的病料采集：
1 放血。先把猪放血处死，在从大腿内侧将皮肤、肌肉切开。
2 解剖摘取扁桃体。从胸部中线偏右处，切断肋骨，打开胸腔，在气管与肺脏连接处向前5～10厘米位置，割断气管，并顺着气管向前割开，直至咽喉部，从后向前将气管割断一半，这时就可以在舌跟靠近上腭的左右两边看到两个淋巴结，即扁桃体。小心取下扁桃体放置于干净的保鲜袋中，并做标记。
3 解剖摘取肺门淋巴结。一只手握住气管切断处，使劲向外拉出肺脏，另一只手帮忙扯断肺脏与身体的连接，并将整个肺脏翻转过来，使背面向上，此时可在气管分为支气管，与肺脏连接处，找到分别位于左右两侧的两个肺门淋巴结，小心摘取，放置于另一个干净的保鲜袋中，并做标记。
4 肺脏样品的采集。如有必要，此时可将割取部分肺脏样品，一般只要割取介于病变和正常组织之间的部分，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记，当然也可以将整个肺脏保存。
5 解剖摘取腹股沟淋巴结。将两个后腿，向下向外压，就可以在两侧凹陷的腹股沟处中间部位，看到微微或明显隆起，即腹股沟淋巴结，小心割开皮肤和淋巴结表面的被膜，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。
6 解剖摘取脾脏。沿腹中线将腹部皮肤、肌肉和腹膜，小心切开并打开腹腔，在腹腔的左侧位于胃和回肠下面，找到脾脏，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。
7 解剖摘取肠系膜淋巴结。从腹腔的右侧位于肝脏和胃下面，找到肠系膜，在肠系膜靠近肠道的末端，可以看到很多结节，即肠系膜淋巴结，小心摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。
8 流产胎儿。通常木乃伊胎不能作为检测样品。对于新鲜流产的胎儿，可作为检测样品。对于流产日龄较早的胎儿，可取整个胎儿保存；如果是晚期流产的胎儿，最好根据上述步骤，摘取相应组织，保存送检。胎儿的保存同上。
疑似蓝耳病病例的病料采集：
具体病料采集程序与猪瘟病料的采集基本一致（包括步骤1、3至6、8），需要强调的是，在蓝耳病的检测中，必须包括淋巴结和肺脏样本！如果是检测流产胎儿，那么，最好能剪取部分胎衣液或剪取胎衣样本，保存方法同上。
疑似圆环病毒感染病例的病料采集：
对于疑似圆环病毒感染的病例，病料采集包括步骤1、3至7。记住，在圆环病毒的检测中，必须包括淋巴结样品。
疑似伪狂犬病病例的病料采集：
伪狂犬病病毒可危害呼吸系统、繁殖系统或中枢神经系统，因此，病料采集包括步骤1至8。同时，最好能够采集神经系统的样品。具体步骤为用手手术刀片将猪的头皮剥去，露出头盖骨，然后用凿子（也可可用一字螺丝刀），轻轻凿开头盖骨，并清理骨头碎片，等整个大脑露出后，小心用手摘取，放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。特别提示，因为现在用的伪狂犬病疫苗绝大多数都是基因缺失疫苗，因此还需进行血清学抗体的检测。
疑似乙型脑炎病例的病料采集：
病料采集包括步骤1、5、8。注意，乙型脑炎病毒可感染人类，特别是儿童，导致严重的脑炎，因此取病料时，请务必带上乳胶手套，并小心操作。
疑似传染性胃肠炎和流行性腹泻病例的病料采集：
本病的病料采集，包括步骤1、5、7。同时需要采集肠道样品。从腹腔中剪取病变的小肠10～15厘米，从一侧将肠道剪开，轻轻刮去肠道内容物，然后放置于一个干净的保鲜袋中，并做标记。
疑似流感病例的病料采集：
按照上述方法采集肺脏和淋巴结即可。
检测病料的运输注意事项：
死亡的猪应尽快采集，夏天不应超过2小时，冬天不超过6小时（还要视具体温度）。采集猪的病料必须新鲜，尽可能减少污染。用于检验的内脏组织块不必太大。无论是运送新鲜的病料还是冰冻的病料，保证整个过程中，病料始终处于低温状态，十分重要。一个简单的方法是，用废弃的矿泉水瓶，灌水后，放置在冰箱中，制备冰块，在病料运输时，将足量的冰块和病料一起放置在泡沫箱中，用冰块包裹所有病料，如果冰块不够多，最好将冰块放置在病料的上面和下面。密封后，快速运送到检测单位。送检过程中要防止倾倒、破碎、避免样品泄漏，要注意有的样品不能剧烈展荡，要注意缓冲放置，所有样品都要贴上能标示采样猪的详细标签。
注意事项：1 病料要新鲜 必须是选取新鲜及有病变部位的材料
2 取材要有代表性 对每一器官，应在各个不同部位多取几块组织，并且病变部分应尽量附带一些周围的健康组织。
猪前腔静脉采血图：
猪耳静脉采血图片：
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猪前腔静脉采血的方法和流程
随着养殖业的迅速发展，猪病也变得越来越复杂，疫病监测最为普遍应用的手段是血清学的检测，因此需要对猪群进行采血，本文章主要对前腔静脉采血的方法和流程做一整理归纳。
作者单位：
黑龙江省嫩江县畜牧兽医局161400
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万方数据电子出版社[实验动物采血指南]&采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以&[动物&指南&方法&选择&静脉&心脏&血量]
采血方法的选择，决定于实验的目的所需血量以及动物种类。凡用血量较少的检验如红、白、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血。当需血量较多时可作静脉采血。静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉。例如，研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、动脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及 K+、Na+、CI-离子浓度，必须采取动脉血液。 采血时要注意：⑴采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25-28℃，冬季，15-20℃为宜；⑵采血用具有采用部位一般需要进行消毒；⑶采血用的注射器和必须保持清洁干燥；⑷若需抗凝全血，在注射器或内需预先加入抗凝剂.不同动物采血部位与采血量的关系采血量 采血部位 动物品种 动物品种 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml) 小 鼠 0.2 0.3 大 鼠 1 2 豚 鼠 5 10 兔 10 40 狼 狗 100 500 猎 狗 50 200 猴 15 60 　取少量血 尾静脉 耳静脉 眼底静脉丛 舌下静脉 腹壁静脉 冠、脚蹼皮下静脉 大鼠、小鼠 兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊 兔、大鼠、小鼠 兔 青蛙、蟾蜍 鸡、鸭、鹅 取中量血 后肢外侧皮下小隐静脉前肢内侧皮下头静脉 耳中央动脉 颈静脉 心脏 断头 翼下静脉 颈动脉 狗、猴、猫 狗、猴、猫 兔 狗、猫、兔 豚鼠、大鼠、小鼠 大鼠、小鼠 鸡、鸭、鸽、鹅 鸡、鸭、鸽、鹅 取大量血 股动脉、颈动脉 心脏 颈静脉 摘眼球 狗、猴、猫、兔 狗、猴、猫、兔 马、牛、山羊、绵羊 大鼠、小鼠 (一)小鼠、大鼠采血法 1.割(剪)尾采血 当所需血量很少时采用本法。固定动物并露出鼠尾。将尾部毛剪去后消毒，然后浸在45℃左右的温水中数分钟，使尾部血管充盈。再将尾擦干，用锐器(刀或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm，让血液自由滴入盛器或用血红蛋白吸取，采血结束，伤口消毒并压迫止血。也可在尾部作一横切口，割破尾动脉或静脉，收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml，大鼠0.3～0.5ml。 2.鼠尾刺血法 大鼠用血量不多时(仅做白或血红蛋白检查)，可采用本法。先将鼠尾用温水擦拭，再用酒精消毒和擦拭，使鼠尾充血。用7号或8号注射针头，刺入鼠尾静脉，拔出针头时即有血滴出，一次可采集10～50mm3。如果长期反复取血，应先靠近鼠尾末端穿刺，以后再逐渐向近心端穿刺。 3.眼眶静脉丛采血 采血者的左手拇食两指从背部较紧地握住小鼠或大鼠的颈部(大鼠采血需带上纱手套)，应防止动物窒息。当取血时左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使眶后静脉丛充血。右手持续接7号针头的1ml注射器或长颈(3～4cm)硬质玻璃滴管(毛细管内径0.5-1.0mm)，使采血器与鼠面成45℃的夹角，由眼内角刺入，针头斜面先向眼球，刺入后再转180度使斜面对着眼眶后界。刺入浓度，小鼠约2～3mm，大鼠约4～5mm。当感到有阻力时即停止推进，同时，将针退出约0.1-0.5mm，边退边抽。若穿刺适当血液能自然流入毛细管中，当得到所需的血量后，即除去加于颈部的压力，同时，将采血器拔出，以防止术后穿刺孔出血。 若技术熟练，用本法短期内可重复采血均无多大困难。左右两眼轮换更好。体重20-25g的小鼠每次可采血 0.2-0.3ml；体重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml，可适用于某些生物化学项目的检验。 4.断头取血 采血者的左手拇指和食指以背部较紧地握住大(小)鼠的颈部皮肤，并作动物头朝下倾的姿势。右手用剪刀猛剪鼠颈，约1/2-4/5的颈部前剪断，让血自由滴入盛器。小鼠可采用约0.8～1.2大鼠约5-10ml。 5.心脏采血 鼠类的心脏较小，且心率较快，心脏采血比较困难，故少用。活体采血方法与豚鼠相同。若做开胸一次死亡采血，先将动物作深麻醉，打开胸腔，暴露心脏，用针头刺入右心室，吸取血液。小鼠约0.5-0.6ml；大鼠约0.8-1.2ml。6.颈动静脉采血 先将动物仰位固定，切开颈部皮肤，分离皮下结缔组织，使颈静脉充分暴露，可用注射器吸出血液。在气管两侧分离出颈动脉，离心端结扎，向心端剪口将血滴入试管内。 7.腹主动脉采血 最好先将动物麻醉，仰卧固定在手术架上，从腹正中线皮肤切开腹腔，使腹主动脉清楚暴露。用注射器吸出血液，防止溶血。或用无齿镊子剥离结缔组织，夹住动脉近心端，用尖头手术剪刀，剪断动脉，使血液喷入盛器。 8.股动(静)脉采血 先由助手握住动物，采血者左手拉直动物下肢，使静脉充盈。或者以搏动为指标，右手用注射器刺入血管。体重15-20g 小鼠采血约0.2-0.8ml，大鼠约0.4-0.6ml。 (二)豚鼠采血法 1.耳缘剪口采血 将耳消毒后，用锐器(刀或刀片)割破耳缘，在切口边缘涂抹20%柠檬酸钠溶液，阻止血凝，则血可自切口自动流出，进入盛器。操作时，使耳充血效果较好。此法能采血0.5ml左右。 2.心脏采血 取血前应探明心脏搏动最强部位，通常在胸骨左缘的正中，选心跳最显的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。因豚鼠身体较小，一般可不必将动物固定在解剖台上，而可由助手握住前后肢进行采血即可。成年豚鼠每周采血应不超过10ml为宜。 3.肌动脉采血 将动脉仰位固定在手术台上，剪去腹股沟区的毛，麻醉后，局部用碘酒消毒。切开长约2-3cm的皮肤，使股动脉暴露及分离。然后，用镊子提起股动脉，远端结扎，近端用止血钳夹住，在动脉中央剪一小孔，用无菌玻璃小导管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入，放开止血钳，血液即导管口流出。一次可采血10-20ml。 4.背中足静脉取血 助手固定动物，将其右或左右膝关节伸直提到术者面前。术者将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射针刺入静脉。拔针后立即出血，呈半球状隆起。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢交替使用。 (三)兔采血法 1.耳静脉采血 本法为最常用的取血法之一，常作多次反复取血用，因此，保护耳缘静脉，防止发生栓塞特别重要。 将兔放入仅露出头部及两耳的固定盒中，或由助手以手扶住。选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，用连有5(1/2)号针头的注射器在耳缘静脉末端刺破血管待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血，此种采血法一次最多可采血5-10ml。
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毛细血管采血具体方法
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毛细血管采血具体方法：
成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛较轻医学教育网|搜集整理，操作方便，适用于肥复采集，特别是手指皮肤粗厚者，但耳垂外周血循环较差，血细胞容易停滞，受气温影响较大，检查结果不够恒定。红细胞、白细胞、血红蛋白和红细胞比积结果均比静脉血高，特别是冬季小波动幅度更大。手指采血操作方便。可获较多血量。婴幼儿手指太小可用拇指或足跟采血。严重烧伤患者，可选择皮肤完整处采血，采血器以用带带三棱针或专用的&采血针&为好，特别是后者有利于采血技术的质量控制，为了避免交叉应严格实行一人针制。应注意穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。
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　|　　|　　|　猪腹部采血方法
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&&&&可用专用竹笆对猪进行保定，也可使用专用保定架或大中型动物保定床保定猪只。备好75%医用酒精，医用脱脂棉，7号或9号输液针，5毫升~10毫升一次性注射器或双针头专用采血针、真空采血管。捆猪3人~4人，采血1人，登记及保管血液样品1人。
&&&&被采血的20公斤~60公斤的猪禁食4小时~8小时。
&&&&将捆猪用的竹笆平放于地上或操作台上，猪呈仰卧状置于竹笆上，用两道绳索将其捆紧。将猪捆好后用砖头或其他支撑物在猪腰部两侧的竹笆外撑住，防止猪在采血时左右摇晃。两人分别将猪的前后肢固定，防止猪四肢乱动，避免采血中断或失败。
&&&&采血部位定在猪腹部第一乳头与第四乳头之间的连线外侧（左右均可）。用清洁温水将猪的腹部清洗干净，用酒精棉球沿第一乳头至第四乳头外侧进行消毒。将7号或9号输液针、一次性注射器拆去包装后连接备用。
&&&&采血者立于猪头部方向，用左手拇指压住猪第一乳头向心端1厘米~2厘米处或胸骨与最后一肋骨接合部的凹槽处。观察猪腹部变化，有的猪在第一乳头与第四乳头外侧可见明显的筋脉隆起，有的猪因皮脂较厚看不见隆起。能看见隆起静脉的可从向心端向离心端进针采血。看不见静脉的，可用持针手的中指或无名指在猪第一或第二乳头之间的外侧横向2厘米~3厘米范围内轻压皮肤，滑动触压定位静脉（感触皮下有一絮状物，其点压有波动感，即为静脉），用拇指和食指夹着针头对准絮状物进针，见回血后采集血样。抽血时速度不能过快。
&&&&血样采完后用干棉球压住进针处，随后拔出针头按压针孔30秒~60秒，然后将猪放开。
&&&&为防止被采血猪发生应激反应，可给猪饲喂适量葡萄糖水或抗应激药物。
&&&&本方法适用于血样用量较大的猪，其对被采血猪有轻微的损伤。采血者在采血时应注意自身安全，不要被猪咬伤。
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