引物稀释时加的是75%95 酒精稀释75 酒精会有什么问题

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如何用酒精沉淀法回收PCR产物?
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请求步骤啊。还有多大片段适合酒精沉淀法?我的片段是1737bp的,之前做的盒回收一直产量很少,看师姐用酒精沉淀法回收的量挺多的,她的是700bp的,所以想问问我的这个片段大小可不可用酒精沉淀法?
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这个是你自己考虑多了。
用PCR产物纯化试剂盒的话纯度比较好,用酒精的话量比较大(但是操作上就要很小心了),胶回收试剂盒纯度比前面两种都要好,但是由于多了跑胶的步骤,量会少些。
我的建议是:不就是PCR么,你多做几管,然后跑胶回收,用胶回收试剂盒,这样量和纯度都解决。片段大小不是问题,80的我做过,5k的也做过。
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& & 我的是长引物,片段本来就不好扩。跑出的PCR产物量本来就不多,条带很暗,引物二聚体很亮。正因为我的产物很少,再用胶回收就更少了,我也试过。所以想用酒精沉淀法做做
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PCR产物不多,条带很暗,引物二聚体很亮
既然这样的话,你需要优化PCR的条件了,要不然两种方法都不是很好
因为你的目的条带很暗,回收试剂盒纯度高但是量少:
因为引物二聚体很亮,酒精纯化的话杂质太多,酶切效果以及后续操作都有影响。
仅供参考!
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还有一个方法 就是将你的产物以胶回收试剂盒回收,再用回收产物进行PCR,当然最好用保真度好一点的酶,比如KOD什么的。
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以下是我之前实验用的方法,仅供参考:
加入1/10体积的NaAC(3mol/L),2倍体积无水乙醇,-20℃保存2h后,12000rpm/10min离心,70%乙醇洗涤沉淀2次,干燥后溶于50微升ddH2O中。
你还可以在这之后做下胶回收。不过你说你目的带很暗,还是同意楼上意见,做下引物优化方面的先
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e.coli2009
& & 老板还没准备换引物,让我就拿这个做,真是头疼啊。这种情况加DMSO可以缓解吗?浓度一般加多少呢?
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可以过膜,浓缩一下,还能去除引物二具体
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试剂盒都方便呀
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长引物扩增,我试过&&减少引物二聚体&&你试试&&少加点引物&&配体系时候先加模板&&后加引物&&退火时间长些 例如1分钟
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/etc/nginx/nginx.conf.乙醇怎样稀释1000毫升95%酒精稀释成75%的酒精,需加水多少,主要是过程怎样算,
少年梦°1e2
1000毫升即1升,一升95%酒精中有0.95升的乙醇,设加入水x升,然后0.98/1+x = 0.75.一个一元方程,很容易解吧.求得x=2/75
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100ml95%酒精中含酒精:100×95%=95ml 75%酒精中若有95mL酒精,其总重量为:95÷75%=126.67ml 所以需要增加水的总量为:126.67-100=26.67ml
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100ml95%酒精中含酒精:100×95%=95ml 75%酒精中若有95mL酒精,其总重量为:95÷75%=126.67ml 所以需要增加水的总量为:126.67-100=26.67ml
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加蒸馏水就可以了 以100克为例:100克95%酒精中含酒精:100×95%=95克 75%酒精中若有95克酒精,其总重量为:95÷75%=126.67克 所以需要增加水的总量为:126.67-100=26.67克 以100ml为例:100ml95%酒精中含酒精:100×95%=95ml 75%酒精中若有95克酒精,其总重量为:95÷75%=126.67ml 所以需要增加水的总量为:126.67-100=26.67ml500的还要我给你算出来么 - -!
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原答案:加蒸馏水就可以了 以100克为例: 100克95%酒精中含酒精:100×95%=95克 75%酒精中若有95克酒精,其总重量为:95÷75%=126.67克 所以需要增加水的总量为:126.67-100=26.67克 以100ml为例: 100ml95%酒精中含酒精:100×95%=95ml 75%酒精中若有95克酒精,...
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