为何我用植块法座原代培养，时间那么久还是不帖呢(原代培养,翻转,浮起,飘起) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 为何我用植块法座原代培养，时间那么久还是不帖呢(原代培养,翻转,浮起,飘起)
摘要: [为何我用植块法座原代培养，时间那么久还是不帖呢(原代培养,翻转,浮起,飘起)] 今天我用的植块法做的细胞的原代培养，刚开始过了4个小时翻转的，没想到组织块浮起来了；觉得这样太可惜了，又把他们翻转过来，又过了5个小时去翻转，照样又飘起来了，看来是没救了，怎么会这样呢？有什么因素呢？我看后悔多战友都说一般4个小时足以啊？谢谢各位给予指点哦 关键词:[原代培养 翻转 浮起 飘起]……
今天我用的植块法做的细胞的原代培养，刚开始过了4个小时翻转的，没想到组织块浮起来了；觉得这样太可惜了，又把他们翻转过来，又过了5个小时去翻转，照样又飘起来了，看来是没救了，怎么会这样呢？有什么因素呢？我看后悔多朋友都说一般4个小时足以啊？谢谢各位给予指点哦
回复组织块法看似简单，实际上却是最难掌握的。如果不能掌握组织块法，就不能说掌握了原代培养。介绍两个比较好掌握的方法：1、用锐利刀剪，将组织块剪到米粒大小，放置在6孔板内，一孔内5-6个组织块，加入少量液体，以组织块不漂起为宜，每天换液，连续3天，换液量仍然以液面高度低于组织块高度、组织块不漂起为准。2、上述方法的改进：在组织块上再压上一个盖玻片，以保证组织不移动。其它同上。回复组织块法看似简单，实际上却是最难掌握的。如果不能掌握组织块法，就不能说掌握了原代培养。介绍两个比较好掌握的方法：1、用锐利刀剪，将组织块剪到米粒大小，放置在6孔板内，一孔内5-6个组织块，加入少量液体，以组织块不漂起为宜，每天换液，连续3天，换液量仍然以液面高度低于组织块高度、组织块不漂起为准。2、上述方法的改进：在组织块上再压上一个盖玻片，以保证组织不移动。其它同上。skinner 老师您好，觉得听了您的方法之后恍然大悟，那以您做原代培养的经验来说，很少量的组织也就是手头有限的组织，用什么方法获得的活细胞率会高一点啊？我的组织很少很有限，觉得用机械剪切法做不是很可行，故没用，做的时候用的消化法，可是做了几次之后发现，基本得不到我想要的细胞，也就是基本没有活细胞的样子，那按照这种情况的话，您建议用什么方法好呢？用您说的这种植块法成功率有多少呢？因为我的组织有限嘿嘿，谢谢老师指点回复组织有限，只能用组织块法。只有组织块法才能保证比较高的成功率。你是要养啥细胞？回复组织有限，只能用组织块法。只有组织块法才能保证比较高的成功率。你是要养啥细胞？呵呵，我要养内皮细胞，英文看文献上用的是消化法，所以刚开始一直在尝试用消化法，但是没有成功，现在才想这尝试一下组组织块法，织块法需要包被6孔板或者是培养皿、之类的吗？谢谢了回复是用脐带吗？内皮细胞还是得消化法。组织块法养内皮细胞很难避免杂细胞污染，最好还是消化法。回复是用脐带吗？内皮细胞还是得消化法。组织块法养内皮细胞很难避免杂细胞污染，最好还是消化法。不是用脐带，用淋巴管瘤培养淋巴管内皮细胞！我用消化法做的也是非常多的杂质，并且我觉得几乎看不到活细胞呢？组织块也看着变小了，也看着松散啦？怎么会这样呢？我还需要注意什么呢？谢谢老师指点回复这个细胞没接触过，没有发言权。回复虽然Skinner老师没做过这个细胞，可是每种组织的组织块做法的原则不是一样的吗？？只要掌握了这个原则和方法应该是可以的吧？？请指点，谢谢回复虽然Skinner老师没做过这个细胞，可是每种组织的组织块做法的原则不是一样的吗？？只要掌握了这个原则和方法应该是可以的吧？？请指点，谢谢嗯，不贴1般3个主要原因【其他意外不详述】。1.组织块外表层细胞因为消化时间过长损伤失活。【俺们用胰酶消化细胞时可以发现，对于生长多层、成团、堆叠的细胞胰酶的消化能力是非常有限滴，即所谓穿透能力不强，于是我们需要伴随不停的吹打.....，过度的延长时间和增加消化液会明显地造成不可逆滴破坏】所以俺1直建议你先适当剪碎或解剖针挑碎，目的94能够缩短消化时间增加消化液渗透进组织。如果真的找不到解剖针，试试用2只1毫升注射器代替？【滴1滴培养液在载玻片上，然后把组织块挑人，镜下操作是反向的啊，需要练习练习，看看不用消化液，靠纯物理剥离效果怎样？】2.筋膜去除不干净，妨碍贴壁。3.加液过多浮力产生影响，早期应该是采用培养基半浸没培养。回复
1.组织块外表层细胞因为消化时间过长损伤失活。试试用2只1毫升注射器代替。
O(∩_∩)O哈哈~，xuech117老师又出现来帮助我了嘿嘿，我已经按照您的建议做了呵呵，没有找到解剖针，我用两个20ml注射器针头，在酒精灯上烧着用镊子讲针尖部分弯转了嘿嘿，配合小组织剪组织镊等分离的小组织块还不错，这次做了有几天了，今天看了看感觉有少量的细胞贴壁了，虽然我不确定是不是我要的细胞，但是我觉得有盼头了嘿嘿，再观察看看！2.筋膜去除不干净，妨碍贴壁。
恩，这也是一个原因，因为做的时候我能够感觉到小组织块镊起来感觉滑滑的有一层包膜，以后多注意一下！3.加液过多浮力产生影响，早期应该是采用培养基半浸没培养。
恩，我以前只是听说组织块法，没有做过，看到上面老师讲的方法就是这个原则，说法也很仔细，准备下周再继续努力。xuech117老师，我想请教你，帮我分析一下！淋巴管瘤就是“淋巴管瘤是由扩张的及内皮细胞增生的淋巴管和结缔组织所共同构成的先天性良性肿瘤，内含淋巴液、 淋巴细胞或混有血液。”这是我搜到的感觉比较清晰的定义，这样的话，我如果对淋巴管瘤用消化法，或者是机械法，亦或者是组织块法，我该怎么分析他们分别的杂细胞呢？这样比较的话，从理论上来说哪种方法可能会得到比较多或者是比较纯的淋巴管内皮细胞呢？而相反杂细胞会少些呢？谢谢了回复xuech117老师，我想我大概知道我的问题出在哪了！我培养内皮细胞没有用胶原之类的包被，肯定对细胞生长贴壁有一定的影响的！原来我鉴于经费的原因，怕自己搞砸了会惹老板生气，所以一直没提这事，现在我觉得有些眉目了，现在下决心跟老板谈买了，至于买什么包被我还要再商定一下嘿嘿，真的很谢谢xuech117老师哦回复
1.组织块外表层细胞因为消化时间过长损伤失活。试试用2只1毫升注射器代替。
O(∩_∩)O哈哈~，xuech117老师又出现来帮助我了嘿嘿，我已经按照您的建议做了呵呵，没有找到解剖针，我用两个20ml注射器针头，在酒精灯上烧着用镊子讲针尖部分弯转了嘿嘿，配合小组织剪组织镊等分离的小组织块还不错，这次做了有几天了，今天看了看感觉有少量的细胞贴壁了，虽然我不确定是不是我要的细胞，但是我觉得有盼头了嘿嘿，再观察看看！2.筋膜去除不干净，妨碍贴壁。
恩，这也是一个原因，因为做的时候我能够感觉到小组织块镊起来感觉滑滑的有一层包膜，以后多注意一下！3.加液过多浮力产生影响，早期应该是采用培养基半浸没培养。
恩，我以前只是听说组织块法，没有做过，看到上面老师讲的方法就是这个原则，说法也很仔细，准备下周再继续努力。xuech117老师，我想请教你，帮我分析一下！淋巴管瘤就是“淋巴管瘤是由扩张的及内皮细胞增生的淋巴管和结缔组织所共同构成的先天性良性肿瘤，内含淋巴液、 淋巴细胞或混有血液。”这是我搜到的感觉比较清晰的定义，这样的话，我如果对淋巴管瘤用消化法，或者是机械法，亦或者是组织块法，我该怎么分析他们分别的杂细胞呢？这样比较的话，从理论上来说哪种方法可能会得到比较多或者是比较纯的淋巴管内皮细胞呢？而相反杂细胞会少些呢？谢谢了【xuech117老师，我想请教你，帮我分析一下！淋巴管瘤就是“淋巴管瘤是由扩张的及内皮细胞增生的淋巴管和结缔组织所共同构成的先天性良性肿瘤，内含淋巴液、 淋巴细胞或混有血液。”这是我搜到的感觉比较清晰的定义，这样的话，我如果对淋巴管瘤用消化法，或者是机械法，亦或者是组织块法，我该怎么分析他们分别的杂细胞呢？这样比较的话，从理论上来说哪种方法可能会得到比较多或者是比较纯的淋巴管内皮细胞呢？而相反杂细胞会少些呢？谢谢了】不同类型细胞不同贴壁时间。血细胞不贴。培养2-4-6小时晃晃倒入另外1瓶，几次9基本分开，绝对分开这样是不可能滴。回复那xuech117老师啊，那我这个培养出来的应该会有什么细胞呢？内皮细胞、成纤维细胞，还有什么呢？谢谢哦回复那xuech117老师啊，那我这个培养出来的应该会有什么细胞呢？内皮细胞、成纤维细胞，还有什么呢？谢谢哦是啥要看你取的组织块的性质决定，如果被膜完整清晰的肿瘤取材，细胞纯度相对高些；如果侵润性生长的以及液体性瘤成分9复杂鸟。回复xuech117老师，上面skinner老师说做的时候要用锐利的剪刀剪成很规则的块，是必须的吗？因为组织块很小，无法用组织剪剪碎，只能借助解剖针（注射器改制的）之类的将其弄碎、弄小，这样的话对于组织块培养法会不会有很大的影响呢？谢谢哦回复组织块法做原代培养大概多长时间细胞可以爬出来呢？是不是不同的细胞爬出的时间不一样啊？？谢谢哦回复组织块法看似简单，实际上却是最难掌握的。如果不能掌握组织块法，就不能说掌握了原代培养。介绍两个比较好掌握的方法：1、用锐利刀剪，将组织块剪到米粒大小，放置在6孔板内，一孔内5-6个组织块，加入少量液体，以组织块不漂起为宜，每天换液，连续3天，换液量仍然以液面高度低于组织块高度、组织块不漂起为准。2、上述方法的改进：在组织块上再压上一个盖玻片，以保证组织不移动。其它同上。请问老师，如果再压一个盖玻片，会不会影响组织块呼吸呢？如果用了盖玻片，什么时候去除呢？
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日，西安，71岁的白书民冲到鱼池边，开动发电机，但供氧机还是不运转。几个小时后，他和老伴辛苦两年养的6万多斤鱼全都浮尸水面。一切都是因为突然而来的停电。
死鱼一条挨着一条
&可惜了，我们辛苦了两年&&&3日上午11时，在西安市临潼区新丰街办席家村，看着两个鱼池里漂着的死鱼，白书民边说边哭。一东一西两个鱼池，各占地10亩左右，中间隔着一条宽约3米的土路。东边鱼池水面上漂着大量的死鱼，尤其在东北角大约10平方米的水面上，长约一尺的死鱼一条挨一条翻着肚子。水池四周路边的草丛里，每隔一两米，都有成堆的已经发臭的死鱼。
西边鱼池的西南角，水面上也漂着10平方米的死鱼，尸体上盘旋着很多苍蝇。
&一共死了6万多斤鱼，我都不知道咋办了。&白书民的老伴、69岁的姜凤兰说，两年前，他们借钱买来小鱼苗，开始悉心经营两个鱼池，最近正准备卖鱼，没想到意外就这么发生了。
6个供氧机都烧坏了
&是电线短路导致的。&白书民说，原本两个鱼池只开4个供氧机，7月1日当天特别热，他就把剩下的两个也开了。晚上10点临睡时，也没有关。到了2日凌晨零时，他听见供氧机好像不响了，就赶紧从屋里跑了出来，到鱼池边查看情况。
&我也跟出来，一看停电了，赶紧用发电机。&姜凤兰说，她和老伴开动发电机，才发现供氧机还是不运转，这才反应过来，供氧机电机都被烧坏了。他们赶紧往两个鱼池里撒增氧剂，&可当时，已经有鱼不行了。&
到2日清晨6时，鱼开始大面积浮上水面。为了减少损失，白书民喊来了女婿，捞上来一部分还算正常的鱼，以10元三条的价钱，卖了1000多元。又把一部分死鱼捞上来扔到池边草丛里。
供电部门：养鱼户担主责
出事后，供电部门、水产站等都到现场进行了解。
&我们也很同情，老人家不容易。&临潼新丰供电所一工作人员称，7月2日零时20分的时候，他们接到电线出现故障导致停电的消息后，及时抢修，大约两点，恢复了供电。
&正常情况，停电了养鱼户还有发电机。&工作人员说，最大的原因不是因为停电，而是白书民家6个供氧机(包括备用的)都被烧坏了，&发生故障的线路管了十几家鱼池，停电后，其他人的供氧机都好好的，就他家的坏了。&
&主要是因为没有任何保护设施。&另一名工作人员说，如果有保护设施的话，至少供氧机不会被烧坏，也不会造成这么大的损失。
工作人员还称，此事件中养鱼户责任可能更大一些。当然，供电所也正在研究此事。
水产站：类似事件并无补贴
&目前，正在积极协同供电所研究方案。&临潼区水产工作服务站站长牛文利说，水产站工作人员已经到现场了解过，正在和供电所协商研究方案，目前还没有研究好。
牛文利说，白书民家遭遇这么大的损失，他们也很难过，但目前针对此类事件，水产站并没有相应的资金、政策补贴等。
据了解，白书民并没有为鱼塘买保险。
&你们走后，我们又打捞了死鱼，可能死亡数不止6万多斤&&&3日下午，电话里，白书民的女婿声音低沉。
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这种有机酸的酸度要高，需要用泡沫消除掉养殖池的水面有一层漂浮的泡沫，不然效果不好，在是最简单的，找有机酸全池泼洒，第2天全池的泡沫全部消失
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