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BCA法测蛋白浓度吸光值显示为4怎么回事
来源：互联网 发表时间： 15:00:56 责任编辑：王亮字体：
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这个读数已经不再线性范围之内了，太高太低线性误差都会偏大如果吸光值读数是4，那就是浓度太高或者干扰因素太多.85.2~0BCA法测蛋白浓度吸光值显示为4那就说明蛋白浓度太高了正常的分光光度法检测蛋白的读数范围最好是在0
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BCA法测蛋白课件
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你可能喜欢请问蛋白定量是BSA方法好还是BCA好？（急） - 实验交流 - 生物秀
标题: 请问蛋白定量是BSA方法好还是BCA好？（急）
摘要: [请问蛋白定量是BSA方法好还是BCA好？（急）] 小妹刚刚开始做WEstern，第一步蛋白定量就碰到问题了。以前跟着实验室的师姐做，她用的是BSA方法。现在好像试剂过期了，我做了好几次标准曲线都很差，想重新买定量试剂盒，在网上搜到的大都是BCA方法。而且这两种试剂盒价格相差很大，BSA的很便宜，BCA的相对就贵一点。我现在我也不知道应该如何选择，师姐又在国外联系不方便。恳请各位有经验的师兄师姐们提供宝贵意见。我的样本是支气管上皮细胞和大鼠肺组织的 关键词:[蛋白定量 试剂盒 标准曲线 试剂 总蛋白 上皮细胞 支气管]……
小妹刚刚开始做WEstern，第一步蛋白定量就碰到问题了。以前跟着实验室的师姐做，她用的是BSA方法。现在好像过期了，我做了好几次标准曲线都很差，想重新买定量盒，在网上搜到的大都是BCA方法。而且这两种试剂盒价格相差很大，BSA的很便宜，BCA的相对就贵一点。我现在我也不知道应该如何选择，师姐又在国外联系不方便。恳请各位有经验的师兄师姐们提供宝贵意见。我的样本是支气管上皮细胞和大鼠肺组织的总蛋白。先谢谢了！！
我们用的也是BSA方法，感觉挺好！
蛋白定量方法有好几种，bradford应该算最便宜的，但有适用范围。提供个网站你参考
BSA吧，曲线差其实与你的手法有关！
曲线差的话你下次做的时候注意以下几个问题看看有没有改善吧：加样的时候先配置多一点再加进96孔板，例如你要加10ul，你可以在EP管里配50或者是100,这样相对你之前直接加10ul的相对误差小；考虑一下枪的问题，过程最好是少换枪，而且在加样的时候枪头先预先在要加的液体里吹打几次减少在枪头上粘附的液体量的影响；加样尽量加在孔底部，然后加染色液的时候可以量多一点，例如你们之前都是加200ul，你可以加250或者是300试试；测试前一定要多震荡混匀几次，然后放在室温反应5分钟；做平行孔不要说了吧，呵呵 好运！
我也觉得做那个标准曲线相当麻烦，jonyerain的建议挺不错的，而且我也是你那样做的，配的时候大点体积以减小误差，有时候标准曲线还是不行，特别是低浓度的时候，吸光值都为负的了
我就是用的bsa定量的，普利来的，效果还不错
谢谢各位师兄师姐！受益匪浅啊！这段时间太忙了现在才回帖感谢各位的帮助，请原谅！
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终于在这儿找到知音了，这段时间我做了不少的BCA法蛋白浓度测定，总的来说是比较郁闷，在这里总结一下经验，跟各位大侠讨教。一是试剂盒厂商的操作指南有问题。我用的是国产试剂盒，具体就不说哪个厂家了。按照厂商提供的操作，实验第一、二次均以失败告终。一是相关系数不好，在0.974左右，且按比例稀释的同一样品测出的浓度经计算(乘以稀释倍数)后，变异很大，让人困惑。后来才知道，我的蛋白标准和样品是直接按厂商推荐的体积加到96孔板的，这样就没有经过预先混匀这一步，以致蛋白标准及样品没有充分混匀，所测算出的结果变异相当大。后经改进，先在EP管中按比例将蛋白标准及样品稀释，用涡旋混匀器混匀后，再加样到96孔板，结果有所改善，相关系数R2在0.997左右，勉强可以接受，所以个人觉得jonyerain说的很有道理，EP管中加入的量要大于96孔板中的量，避免吸附致加样量不够。二是试剂盒的蛋白标准浓度范围狭窄，样品稀释度难以掌握。我所用的试剂盒蛋白标准曲线所对应的浓度为0 25 50 100 200 300 400 500ug/ml，结果在酶标仪上，样品稀释16倍、20倍后仍然不能读数，只有将标准曲线的范围改为2000ug/ml，在标准曲线的延长线上读出样品浓度，说明蛋白样品浓度超出了蛋白标准的浓度；更可恶的是，0,25ug/ml对应的蛋白标准居然也读不出来，所以我超级怀疑是试剂盒的蛋白标准浓度范围及精确度问题极大。三是操作过程应该注意。我觉得要准确测定蛋白浓度，首先要保证的精度，其次，像jonyerain说的那样，每次用吸样品，要先将枪头在样品中预吸几次，然后在EP管底打出，尽可能减少吸附。如果条件许可，可用进口的试剂盒，结果会不一样的。
BCA法测蛋白真的就真么不好吗？我们也是在用BCA法测蛋白浓度的
我上个月也在用国产BCA试剂盒测定蛋白浓度，因为是刚开始做，之前实验室也没有人做过，所以做起来也特别不顺利。做了几次后，发现数据不太稳定，做的有些平行变异也比较大。所以看了shanxibow对国产BCA试剂盒的使用经验，我也有些同感。但对于shanxibow所说的相关系数的好坏，我也些不太能理解，不知道你所指好的相关系数的标准是什么？
有朋友用国外的BCA蛋白浓度测定试剂盒测得的标准曲线相关系数达到0.999…，这意味首测得的蛋白标准浓度与吸光度有非常好的线性关系，蛋白样品浓度在标准曲线对应的浓度范围内与吸光度有很好的对应关系，因此测得的蛋白浓度结果可信。据这位朋友说他做过蛋白样品系列稀释，再由这些稀释样品测得的浓度计算出的样品原液浓度相差不到0.01ug/ul，很强大啊!
我曾用国产试剂盒测得的标准曲线直线回归方程的相关系数为0.974…，对样品进行系列稀释后测得的浓度推算的原液浓度相差达到700ug/ml，变异太大，无法确定哪一个浓度是准确的，所以做了等于没做
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