Water 2695 高效液相色谱仪操作规程38
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Water 2695 高效液相色谱仪操作规程38
Water2695高效液相色谱仪操作规程；1目的；用于规范检验人员正确操作使用Waters2695；2适用范围；适用于使用Waters2695高效液相色谱仪检测；3职责；使用Waters2695高效液相色谱仪进行检验的；作规程的正确执行；4仪器组成及原理；4.1仪器组成本仪器由Waters2695高效液；紫外检测器、2489紫外检测器、474型荧光检测；梯度Water 2695 高效液相色谱仪操作规程1目的用于规范检验人员正确操作使用Waters 2695 高效液相色谱仪。2 适用范围适用于使用Waters 2695高效液相色谱仪检测分析的操作管理。3 职责使用Waters 2695高效液相色谱仪进行检验的检验员应对本规程负责，相关项目经理负责监督该操作规程的正确执行。4仪器组成及原理4.1仪器组成本仪器由 Waters 2695 高效液相色谱仪、 检测器(2996型二极管阵列检测器、2487紫外检测器、2489紫外检测器、474型荧光检测器)、Empower色谱作站组成。2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面等组成。4.2高效液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，经色谱柱进行分离，检测器检测分离后的不同组分，数据处理装置记录色谱图或进行数据处理。5.仪器的操作5.1仪器的准备5.1.1 检查流动相（使用前应首先脱气）、在线清洗溶液（10%甲醇-水溶液seal wash）、进样针清洗溶液（90%甲醇-水溶液injector wash）是否足够。5.1.2 检查色谱柱的使用是否正确（方向是泵出来进检测器的方向，正常的话是色谱柱上所标示的箭头向上；一般情况下不能将色谱柱反过来用，除非柱子确实无法使用可考虑反方向使用）、连接是否有误，有无漏液，废液瓶的容量是否足够。5.2开机、自检与仪器预备5.2.1依次开启不间断稳压电源、开启2695 分离单元电源和计算机电源；仪器开始自检（约5～6min），待仪器操作面板上出现“Idle”字样表示自检成功，仪器进入待命状态。5.2.2按动仪器面板右下方“Menu/Status”键进入操作状态，按动“Direct Function” 功能键，若仪器是首次使用或溶剂的管路充满空气时，先选择Dry Prime，按动OK，对管路进行排空；此时开启仪器下方purge阀，用专用注射器手工抽出管路内部的空气。（此操作一般情况下不会使用）5.2.3若非5.2.2 状态时，直接以▼键切换到wet Prime，按动OK，对事先设置好流动相溶剂比例的管路进行相应的流动相灌注。5.2.4 按动“Direct Function” 功能键，以▼键将仪器切换到purge injector状态，按动OK，对针头进行purge。（此操作是为了避免进样针中有气泡导致进样不平行）5.2.5 在面板上设置流动相流速（flow），各通道溶剂流动比例以及柱温（col Htr）等参数，然后按动Enter。5.2.6 按动“Direct Function” 功能键，以▼键将仪器切换到Equilibrate状态，按动OK，仪器开始平衡柱子。注：上述5.2.5、5.2.6可不操作，在建立好方法后按监视键，即可。5.3检测项目与检测方法的设置5.3.1双击电脑桌面的Empwer图标，开启仪器工作站，输入用户名（system）及密码(manager)后进入仪器工作站。单击配置系统，进入配置管理器；选中左栏中的“系统”，单击系统→新建→色谱系统→新建色谱系统向导-输入类型的界面→下一步→选择所用的液相和检测器→下一步→下一步→系统名（hplc）→完成。5.3.2单击文件→新建→项目（或直接点击黄色火柴头形状的“新项目”图标），进入新项目向导，单击下一步，设置表空间参数300～500Mb，取消“支持全面审计追踪”，下一步，跟着向导逐级设置参数（一般情况下只要出来界面后直接点下一步），直至命名项目名称，单击“完成”，回到Empower Pro界面。5.3.3单击“运行样品”进入运行样品界面，单击向导键，进入新样品组方法向导，选择“利用本向导创建样品组方法”，下一步，选LC；选择标准品的开始位置，下一步；选“每个标准品代表不同的浓度”，下一步；输入标准品的瓶数、每瓶的进样次数、进样体积及运行时间等参数；单击“新建”进入选择仪器方法界面，进入仪器方法编辑器，默认“通用”项下的参数；“脱气”项下的“脱气模式”选择“开”；“事件”项下的参数可以默认；“流量”项下：压力上限设4000psi，下限设100psi；等度时，设置流动相流速（flow），各通道溶剂流动比例以及柱温（col Htr）等参数；梯度时，设置流动相随时间变化的梯度表格；再设置柱温。5.3.4单击检测器图标，当使用PDA时：若使用多波长检测，则选择3D通道，输入检测波长的范围，期于参数默认；若使用单波长检测，则选择2D通道，选中通道1，输入检测波长；“模拟输出”与“事件”项下可默认。单击保存键，输入仪器方法名称并保存。创建方法组：选择仪器方法：“处理方法”项下：无处理；“报告方法”项下：无报告；“导出方法”项下：无导出，下一步，命名方法组，完成。（这一步很关键，若不创建方法组所建的仪器方法就无法运行）5.3.5编辑样品参数：输入待测样品数量、每瓶的进样次数、进样体积及运行时间等参数；下一步；选择只测试，出错时继续，下一步；直至命名样品组名称（根据所做试验命名样品组），单击完成。5.3.6调整完善样品组，开启仪器样品室仓门，调出所需要的样品盘，放置样品并将养拼盘放回，关闭样品室仓门。5.4.色谱条件探索：单击“单进样”，进入单针进样界面，输入有关参数后（首次摸索条件最好将运行时间设置的略长一些，中途单击工具栏的红色图标可以随时终止运行），单击单进样图标，开始色谱条件摸索；需要改变流量时，单击工具栏的“操作”，选“改变流量”，设置相关参数即可。5.5.运行样品组：经过几次“单进样”探索后，确定色谱条件；然后单击“样品”，调整样品批表中的运行时间与延迟进样时间等，完善批表后，单击工具栏的绿色运行图标可以启动批表的检测运行。5.6.在运行样品组过程中，若需要更改或增加批表内容时，单击工具栏的“编辑”，选择“改变正在测试样品”，可以更改尚未运行的批表参数或增加批表内容（此操作只可以在样品运行中途进行，在一针结束，另外一针即将开始的切换时刻，切勿进行此项操作），更改完成后，单击工具栏的绿色运行图标可以继续运行检测。5.7.流路中流动相的存放5.7.1如果当天使用的是甲醇－水混合流动相系统，而且，次日仍然使用该流动相系统。检测结束后用该流动相继续冲洗色谱柱后，就可以关机。5.7.2如果在反相色谱法中使用了其他有机流动相或者是使用了加有缓冲盐的流动相，检测结束后应该首先用适当的溶剂清洗色谱系统；溶剂的选择、置换与混合请参考下表。各个通道用所选择的溶剂冲洗干净后（每个通道冲洗20～30分钟，柱压高时需要增加冲洗时间），最后再用80%甲醇冲洗，洗净后（柱压很稳定时）就可以关机。一般情况下，可选择A、B作为对应品种流动相的通道，C、D作为冲洗色谱柱的通道。（A通道放盐相、B通道放有机相、C通道放10～20%甲醇、D通道放纯甲醇）冲柱的梯度程序如下冲完色谱柱后最好以0.05ml/min的流速过夜（25%的C、75%的D）,以避免色谱系统中有盐析出。注：纯盐相容易长菌，每天早上A通道必须用20%的甲醇以10ml/min的流速灌注5分钟。5.7.3仪器长时间不使用时，若使用过正相色谱法，色谱流路中用正己烷保持；若使用过反相色谱法，一定要在各个流路中用甲醇保持，切忌在流路中长时间存在乙腈或高纯水。有乙腈存在的流路中，乙腈会对比例阀中单向球阀的橡胶衬垫产生溶涨作用，致使其黏性增大并吸附流动相中微量的纤维丝等异物，久而久之会造成单向阀密封垫的不严密，引起比例阀不能够按照设定的比例对各流路通道的流动相进行混合，由此导致基线的波动。同理，也不能用高浓度（85%以上）的乙腈做流动相；例如，当使用25%的乙腈和75%的缓冲盐混合溶液作为流动相时，应将两者混匀后再使用，切忌在两个流路通道上利用比例阀来进行混合调配，否则，也会发生上述现象。高纯水在流路中长时间存在时，会引发细菌的生长，菌丝体会堵塞色谱柱。5.8依照开机的相反顺序关闭电脑与仪器，并认真做好仪器使用记录。6数据处理（可以进行离线处理）6.1进入Empower Pro界面，单击“浏览项目”，选中您测试过的项目，确定。单击“通道”即可看到已经运行检测过的数据结果。选中标准品1，单击“查看”，进入查看“主窗口”；单击处理方法向导，选择“新建处理方法”，确定。设置“处理类型”LC、“积分算法”为传统，确定；输入峰宽30～50（也可在某个吸收峰前的一段平坦处拖动划矩形自动生成），下一步；输入域值10～50范围，下一步；输入积分开始时间与结束时间，下一步；选择定量方法：面积、选择组分含量：浓度、选择校正曲线类型：线形，下一步； 选择“否”；校正：外标；输入方法名称，单击完成，单击保存键，关闭窗口。6.2回到“通道”中，选中所有标准品，单击处理键，使用指定处理方法（刚才建立的处理方法）；选√清除校正，确定。单击“结果”，单击“更新”，选中任一标准品采集结果，右击→预览出版，选择合适的报告方法，确定。生成报告，打印即可。6.3选中任一样品（或多个样品）的采集结果，右击→预览出版，选择合适的报告方法，确定。生成报告，打印即可。6.4 若生成的报告坐标范围不理想，关闭。在出现的报告模板上右击，选中属性，点击“缩放”，对报告图谱中的X、Y轴的参数进行适当的调整，然后另存为一个新名字，这样即可使用这个新建立的报告格式了。7操作中常见问题的处理7.1压力高：将在线过滤拆下用两通代替，若压力正常，表明是在线过滤片脏或有盐析出，取出后用纯水超声15分钟左右；若压力仍然很高，应逐级排查是哪里堵了（由项目负责人操作）。7.2不出液：①用扳手将单向阀松开在拧紧②将溶剂瓶中的吸滤头拔出，看是否出液，若出液表明吸滤头堵了，将吸滤头置纯水中超声15分钟后用异丙醇超声15分钟。7.3压力波动大：①管路中有气泡，高流速排液；若不行，将排空阀打开用针筒抽②柱塞杆掉下来（由项目负责人操作）若出现其他问题时找相关项目负责人。包含各类专业文献、高等教育、应用写作文书、中学教育、外语学习资料、文学作品欣赏、Water 2695 高效液相色谱仪操作规程38等内容。
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仪器名称：Waters96,996,检测器
英文名称：Waters Detector,89,5,474,6
国产/进口：进口
产地/品牌：德国,美国,沃特世,Waters
：96,996,0,2420&
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紫外-可见检测器 Waters 2487, Waters 2488, Waters 2489, Waters 486
二极管阵列PDA检测器 Waters 2996, Waters 996
荧光检测器 Waters 2475,Waters 474
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上海普迪生物技术有限公司2010年注册成立于张江高科技园区，是一家专业从事生物化学试剂研发、生产、销售和技术服务的高科技生物技术公司。
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3秒自动关闭窗口沃特斯2487检测器氘灯~~货号WAS081142 ~~
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PERF MAINT KIT&& & & & & & & & & & & & & & 适用于waters 检测器&---美国沃特斯氘灯氘灯。另有沃特斯/沃特世/waters其它产品展示：POLYSTYRENE STD KIT SM-105 WAT034209SunFire C18 5μm 4.6x250mm Column 2489氘灯 ACQUITY UPLC BEH HILIC Column, 130?, 1.7 μm, 2.1 mm X 100 mm ACQUITY UPLC CSH C18 Column, 130?, 1.7 μm, 3 mm X 100 mm XBridge BEH HILIC XP Column, 130?, 2.5 μm, 2.1 mm X 100 mm μBondapak C18 Column, 125?, 10 μm, 3.9 mm X 300 mm WAT027324OASIS HLB 3CC 60MG 100BX WAT094226Atlantis dC18 3μm 2.1 x 150mm Column 2ml样品瓶 100BX CSunFire C18 5μm 4.6x250mm Column XBridge Phenyl 3.5μm 4.6 x 100mm Column DNPH-SILICA 20/BX WAT037500XBridge C18 3.5μm 3.0x150mm Column MassPREP Micro Desalting Column
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PERF MAINT KIT&& & & & & & & & & & & & & & 适用于waters 检测器&---美国沃特斯氘灯氘灯。S5SCX COL 25CMX4.6MM（waters） PSS837515Standard Needle Assembly, 15μL（waters） SunFire C18 5μm 4.6x20mm Gd Col (2/pk)（waters） wat094226 Oasis HLB 3 cc Vac Cartridge, 60 mg Sorbent per Cartridge, 30 μm Particle Size, 100/pk 3110 Oasis MCX 3 cc Vac Cartridge, 60 mg Sorbent per Cartridge, 30 μm Particle Size, 100/pk 3475WAT094225 Waters Oasis HLB 1 cc Vac Cartridge, 30 mg Sorbent per Cartridge, 30 μm, 100/pk
2277wat106202 Oasis HLB 6 cc Vac Cartridge, 200 mg Sorbent per Cartridge, 30 μm Particle Size, 30/pk 1813 ACQUITY UPLC BEH C18 Column, 130?, 1.7 μm, 2.1 mm X 50 mm, 1/pkg 8071C
waters 样品瓶套装12*32mm &100/pk 780c LCGC Certified Clear Glass 12 x 32mm Screw Neck Max Recovery Vial, with Cap and Preslit PTFE/Silicone Septa, 2 mL Volume, 100/pkg 2082&XBridge Phenyl 3.5μm 4.6 x 100mm(waters) Column CUVE QUARTZ 50MM POUR SPECTRO UV B0631011CELL HOLDER-RECTANGULAR LONG PL B0080821UBONDAPAK C18 GUARD COL 2PK WAT044480柱套 WAT046910 1XSelect HSS T3 XP Column, 100?, 2.5 μm, 4.6 mm X 100 mm XBridge BEH C18 XP Column, 130?, 2.5 μm, 4.6 mm X 100 mm OASIS HLB 3CC 60MG 100BX(waters) WAT094226Waters ACQUITY PDA / TUV 2489 / 2998 Detector Symmetry C18 Column, 300?, 5 μm, 4.6 mm X 250 mm, 1/pkg WAT106151PerformancePlus Check Valve Cartridge
4黄.琦 & & & QQ
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PERF MAINT KIT&& & & & & & & & & & & & & & 适用于waters 检测器&---美国沃特斯氘灯氘灯。AccQ-Tag Eluent A WAT052890AccQ-Tag Column, 60?, 4 μm, 3.9 mm X 150 mm, 1/pkg WAT052885Oasis MCX Cartridges 6cc/150mg 30/box OASIS HLB 3CC 60MG 100BX WAT094226Oasis MCX Cartridges 3cc/60mg 100/box Oasis HLB Cartridge 6cc/500mg 30/box OASIS HLB 1CC 30MG 100BX WAT094225XBridge C18 5μm 4.6x250mm Column ASSY, PUMP W/SEAL WASH, ENHANCED 1/16in. OD S.S. Tubing Cutter w/3 Blades WAT022384Fraction Collector 18mm Rack Kit Atlantis dC18 5μm 4.6 x 150mm Column Atlantis dC18 5μm 4.6 x 250mm Column Oasis?HLB Cartridge 1cc/10mg 100/Box OPTON-53010 32G Mtl Needle Regular Flow Kit 喷雾针 OPTON-530102489氘灯 柱套 WAT046910OASIS HLB 6CC 200MG CRT 30/BX(waters) WAT106202NOVA-PAK PHENYL 3.9 X 150 WAT010656HLB 3.9*20mm 螺丝，1个 火焰喷嘴 ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm 2.1x100mm Col ACQUITY BEH C18 1.7μm VANGUARD Pre-Col OASIS HLB 6CC 200MG CRT 30/BX WAT106202Oasis HLB Cartridge 6cc/500mg 30/box 3-Way Recycle Valve Union, 1/16in. Stainless Steel wat097332黄.琦 & & & QQ
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& & & & 北京科明雷德科技有限公司是一家集技术开发、技术服务、产品销售为一体的专业性技术企业,公司专门经营进口光谱耗材，光谱备件，离子色谱柱，离子色谱耗材，色谱仪器耗材、色谱仪器配件、化学试剂、标准品及实验室常规仪器，主要代理美国戴安、PE、Waters、Thermo、岛津、耶拿、GBC、戴安、Agilent、Supelco 、Varian及Sigma等品牌，并且和各大仪器生产厂商有着密切的合作。
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