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大肠杆菌K88菌毛蛋白亚基FaeG重组乳酸乳球菌构建及其对ICR小鼠免疫保护及研究.pdf104页
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浙江大学博士学位论文 摘要 摘要 Escherichia coli，ETEC 是引起新生仔猪大肠 肠毒素大肠杆菌 Enterotoxigenic diarrheaofnewborn
杆菌性腹泻 Colibacillus piglet 的主要病原之一，该菌的致病
前提是通过细菌表面的粘附素与宿主粘膜上皮细胞表面的相应受体结合，从而在该
局部组织定居、繁殖、产生毒素或侵入深部损伤或破坏组织，引起疾病或造成隐性
感染。目前，该病的防治以药物和疫苗为主，但因药物治疗价格昂贵，而且随着耐
药菌株的增多，免疫预防不失为控制该病的最佳选择。因此，本论文利用分子生物
学技术在乳酸乳球菌 Lactococcuslactics，L．Lactics 中分泌表达了肠毒素大肠杆菌 ETEC 粘附素主要蛋白亚基FaeG，并将该重组乳酸乳球菌口服免疫ICR小鼠并
研究其对ICR小鼠的免疫保护效果和免疫功能的影响，旨在为研发安全、有效的抗
大肠杆菌性腹泻的生物制剂提供理论依据。主要研究结果如下：
1．肠毒素大肠杆菌 ETEC 粘附素蛋白亚基FaeG在乳酸乳球菌中的分泌表达 根据己发表的faeG基因序列设计引物，以标准肠毒素大肠杆菌K88菌株 ETEC
C83549 DNA为模板，采用PCR扩增获得约0．8kb的基因片段，通过序列分析证明
源性在98％以上，氨基酸序列同源性为99％。将不含信号肽的faeG片段插入乳酸
乳球菌分泌型表达载体spNZ8048中，电转化乳酸乳球菌NZ9800，并通过筛选获得
的分子量分别为26．0kDa和23．5kDa，均与理论分子量相近。说明该蛋白在乳酸乳
球菌中可借助表达载体上的信号肽序列，以成熟肽形式分泌表达。
2．FaeG重组乳酸乳球菌对ICR小鼠的免疫保护
免疫一次，每次连续三天，共免疫三次。每次免疫后一周间接ELISA法检测小鼠血 C83549
清中特异性抗体IgG。末次免疫
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用RACE技术扩增小鼠胸腺基质细胞差异表达片断的全长cDNA,cdna末端快速扩增技术..
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