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氯仿甲醇法提取油脂具体怎么做啊??试验提油脂要用氯仿甲醇法,求具体步骤和试剂
氯仿甲醇法提取油脂具体怎么做啊??试验提油脂要用氯仿甲醇法,求具体步骤和试剂
就是萃取的原理，按萃取的操作就行&& 查看话题
氯仿甲醇怎么测脂肪含量？索氏抽提溶剂可以用它吗
如题，有没有具体测定步骤，索氏抽提用氯仿甲醇作溶剂可以吗，它们是混合物，没有共沸点吧，水浴温度貌似不好选
只要提取脂肪并挥发性好就可以了，沸点就选高的那个 www.jbc.org/content/226/1/497.full.pdf 索氏抽提一般用石油醚或无水乙醚，选择沸点低一点的。用氯仿甲醇的话就把样品研磨下，加入氯仿甲醇，震荡提取或者超声波都可以，就不要用索氏抽提器了，这方面的文献应该挺多的， : Originally posted by user59888 at
只要提取脂肪并挥发性好就可以了，沸点就选高的那个 但是提取过程中两者沸点不一样，肯定会分离，回流的时候对脂肪的提取会下降吧，因为液体状态的比例变了 : Originally posted by zybpxy at
www.jbc.org/content/226/1/497.full.pdf 没看懂& &怎么还要加盐呢&&还要用到均质？实验室只有那种小型的均质机，一根长长的棒那个样子的 : Originally posted by djfeng0617 at
索氏抽提一般用石油醚或无水乙醚，选择沸点低一点的。用氯仿甲醇的话就把样品研磨下，加入氯仿甲醇，震荡提取或者超声波都可以，就不要用索氏抽提器了，这方面的文献应该挺多的， 哦&&离心应该更好吧，谢谢& &&&最后溶剂要怎么去除，旋蒸？怎么干燥呢，最好的使用真空干燥吧，但是实验室没有 旋转蒸发可以把有机溶剂完全去除吗 索氏提取一般是除脂的时候用
用低极性的环己烷等 : Originally posted by zinfly at
索氏提取一般是除脂的时候用
用低极性的环己烷等 嗯&&您说的我知道 : Originally posted by a皑雪c at
哦&&离心应该更好吧，谢谢& &&&最后溶剂要怎么去除，旋蒸？怎么干燥呢，最好的使用真空干燥吧，但是实验室没有 旋转蒸发可以把有机溶剂完全去除吗... 旋蒸完后可以放常压干燥箱内烘两小时就可以了。不需要用真空干燥箱的 看你测什么样的物质的脂肪了，普通的一般食物中的可以用石油醚或氯仿；含糖量高的最好不用氯仿，选择石油醚；鸡蛋黄粉中的脂肪可以用中性三氯甲烷浸提法。 : Originally posted by 820901sun at
看你测什么样的物质的脂肪了，普通的一般食物中的可以用石油醚或氯仿；含糖量高的最好不用氯仿，选择石油醚；鸡蛋黄粉中的脂肪可以用中性三氯甲烷浸提法。 我测蛋糕& &含糖量高，含水量也高&&石油醚的话，样品必须得先干燥吧 : Originally posted by a皑雪c at
我测蛋糕& &含糖量高，含水量也高&&石油醚的话，样品必须得先干燥吧... 称完重，包好脂肪包，在105度烘箱中烘干后再在索氏抽提器中抽提，就可以了！！&& 查看话题
求救，使用氯仿甲醇提取微生物的总脂，主要是磷脂
本人研一小硕一枚，最近要提微生物中的磷脂，看到文献中提磷脂的方法主要是氯仿甲醇法，实际操作中遇到了很多问题，对细节不是很了解，比如提取后的油颜色较深，有杂质，氯仿在下层，不方便吸取，求问大家有没有具体操作过程，相信一点的，之前看到说有国标，没有找到，希望知情人告知，谢谢！！另外，微生物在提油之前应该要破壁吧，我用的是强酸暴沸的方法，不知道会不会对磷脂以及油脂含量有影响。
参考文献 folch 1956& &
http://www.jbc.org/content/226/1/497.full.pdf 这个方法是一个比较经典的提取方法，楼上的那篇论文也被引用过无数次了。但作为一个实践者，我个人有如下意见：
1 破壁最好是选择常温超声的办法，加入氯仿甲醇后，密封进行超声。微生物细胞壁比较坚韧，超声差不多要30~60min，而且温度应该控制一下以防止溶剂挥发；
2 提取过程，最好是使用磁力搅拌过夜，溶剂多用一些；
3 使用氮吹仪除掉溶剂。 : Originally posted by island_hao at
这个方法是一个比较经典的提取方法，楼上的那篇论文也被引用过无数次了。但作为一个实践者，我个人有如下意见：
1 破壁最好是选择常温超声的办法，加入氯仿甲醇后，密封进行超声。微生物细胞壁比较坚韧，超声差不多 ... 对，支持此观点
我自己做的时候针对不同样品也会采用不一样的前处理方法，上面那个文章是最基础的 : Originally posted by island_hao at
这个方法是一个比较经典的提取方法，楼上的那篇论文也被引用过无数次了。但作为一个实践者，我个人有如下意见：
1 破壁最好是选择常温超声的办法，加入氯仿甲醇后，密封进行超声。微生物细胞壁比较坚韧，超声差不多 ... 谢谢谢谢，提取过程需要很长吗？我之前做了一次，就大概分几次超声，提取了50min左右，会不会提取不完全啊？ : Originally posted by zybpxy at
参考文献 folch 1956& &
http://www.jbc.org/content/226/1/497.full.pdf 谢谢，我看了这篇文献，但是还是有些细节不清楚，方便给我您的具体操作过程吗？您是从什么物质中提取脂质呢？ 我最近做的表面活性剂的提取和你差不多，也是先破壁，再粗提。。但是排油圈实验就失败了。还木有进展到那一步。不过我打算破壁后用氯仿甲醇萃取三次，然后旋转蒸发仪蒸干。。。 : Originally posted by wangbingcool at
我最近做的表面活性剂的提取和你差不多，也是先破壁，再粗提。。但是排油圈实验就失败了。还木有进展到那一步。不过我打算破壁后用氯仿甲醇萃取三次，然后旋转蒸发仪蒸干。。。
... 你打算每次提取的时间是多长呢？以后多交流~ : Originally posted by vivian7777 at
你打算每次提取的时间是多长呢？以后多交流~... 应该会用磁力搅拌加速吧。准备半小时左右吧。。。 : Originally posted by vivian7777 at
谢谢谢谢，提取过程需要很长吗？我之前做了一次，就大概分几次超声，提取了50min左右，会不会提取不完全啊？... 最好是磁力搅拌过夜哦 否则提取不完全 : Originally posted by island_hao at
这个方法是一个比较经典的提取方法，楼上的那篇论文也被引用过无数次了。但作为一个实践者，我个人有如下意见：
1 破壁最好是选择常温超声的办法，加入氯仿甲醇后，密封进行超声。微生物细胞壁比较坚韧，超声差不多 ... 你好，我想请教您几个问题，我也是氯仿甲醇法提取，提取完整的标志是不是细胞沉降就算是提完全了？还有我还会按照查的方法，提取完后还会用水混合离心一次，完了之后出现白色絮凝，不知道您遇到过吗。谢谢，期待回复 : Originally posted by lvbolantao at
你好，我想请教您几个问题，我也是氯仿甲醇法提取，提取完整的标志是不是细胞沉降就算是提完全了？还有我还会按照查的方法，提取完后还会用水混合离心一次，完了之后出现白色絮凝，不知道您遇到过吗。谢谢，期待回 ... 您好，不知道您是提取什么细胞的？我当时是提取植物细胞的，由于有细胞壁所以就先超声，然后彻夜用磁力搅拌，之后离心收集上清液的。此时如果细胞还有绿色就继续加入新的溶剂再磁力搅拌提取，直到细胞灰白色为止。
如果您是提取动物细胞的，我觉得没必要像我这样用这么长时间。毕竟没有细胞壁，超声后破碎就比较完全了~~ : Originally posted by island_hao at
您好，不知道您是提取什么细胞的？我当时是提取植物细胞的，由于有细胞壁所以就先超声，然后彻夜用磁力搅拌，之后离心收集上清液的。此时如果细胞还有绿色就继续加入新的溶剂再磁力搅拌提取，直到细胞灰白色为止。 ... 首先谢谢回复，我提的是酵母细胞 : Originally posted by lvbolantao at
首先谢谢回复，我提的是酵母细胞... 酵母的话应该比植物细胞更好提取吧~~不过鉴于也有细胞壁 建议您也是超声后提取过夜~~ : Originally posted by island_hao at
酵母的话应该比植物细胞更好提取吧~~不过鉴于也有细胞壁 建议您也是超声后提取过夜~~... 好的，谢谢您了，我试试 请问楼主测出来了没有，有问题请教~可否告知具体操作步骤~ 你好，请问你用氯仿甲醇提的时候是不是直接把三角瓶和冷凝管连在一起啦？ 楼主，你提取的怎么样了啊，我现在也在做微生物的磷脂提取，小女子跪求方法~求方法啊。 是不是这样的啊？& &
①提取：准确称取均匀样品5g于具塞三角瓶内（高水分食品可加适量硅藻土使其分散），加入60mL氯仿-甲醇混合液（对于干燥食品，可加入2～3mL水）。连接提取装置，于65℃水浴中，由轻微沸腾开始，加热1h进行提取。
& & ②回收溶剂：提取结束后，取下烧瓶用布氏漏斗过滤，并用氯仿-甲醇混合液洗涤滤器，烧瓶及滤器中试样残渣，滤液、洗涤液一并收集于具塞三角瓶内，置65～70℃水浴中回收溶剂，至烧瓶内物料呈浓稠态，而不能使其干，然后冷却。
& & ③石油醚萃取、定量：用移液管加入25ml石油醚，然后加入15g无水硫酸钠，立即加塞混摇1 min ，将醚层移入具塞离心沉淀管进行离心分离5min。用10mL移液管加入迅速吸取离心管中澄清的石油醚10mL，于已称量至恒量的干燥称量瓶内，蒸发去除石油醚，于100～105℃烘箱中烘至恒量（约30min）。【转帖】目标蛋白粗提方法 （虽然转载，但是很棒！）
03:33:16&&&来源：&&&评论：&&
[【转帖】目标蛋白粗提方法 （虽然转载，但是很棒！）] 狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已经呈液相存在，提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相，这种方法称为液液萃取。　　广义来讲，提取又可称为抽提或萃取，贯穿在整个分离纯化过程中，如核酸制 关键词:[蛋白质 溶解度 去垢剂 缓冲液 氢键 离子 极性]…
狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已经呈液相存在，提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相，这种方法称为液液萃取。　　广义来讲，提取又可称为抽提或萃取，贯穿在整个分离纯化过程中，如核酸制备中用氯仿或苯酚反复抽提除去蛋白质，分离DNA和RNA。　　提取的好坏受到多种因素的影响，包括：　　1）溶液 涉及到溶液中的保护成分、离子强度、PH值、温度、表面活性剂、变性剂（如尿素和盐酸胍）和粘稠度、溶液的更换；　　2）材料 包括材料本身固有的特性、材料的选择和处理；　　3）目的分子 目的分子的理化性质、存在方式和部位、含量；　　4）其它因素 搅拌、提取时间的长短。　　第一节 溶剂和溶解度　　一. 溶剂　　一些常用溶剂按其极性的大小，可依顺序大体排列如下：饱和烃类&全卤代烃类&不饱和烃类&醚类&未全卤代烃类～脂类&酮类&醇类。　　还可按形成氢键能力的大小，分为五类：　　1）能形成两个以上氢键的溶剂分子 如水，其两个氢原子和一个氧原子都可以形成氢键；　　2）能形成两个氢键的溶剂分子 既是氢键的供体又是氢键的受体，例如脂肪族的醇类；　　3）只作质子受体的溶剂分子 如脂肪族的醚类；　　4）只作质子供体的溶剂分子 如氯仿；　　5）不能形成氢键的烃类 如四氯化碳。　　1）和2）两类溶剂宜用于极性化合物的提取，3）和4）两类溶剂宜用于对溶液中弱极性或非极性化合物的提取。　　二．溶解度　　溶解度用于分离提纯有两个主要目的：1）选择一个对制备物溶解度大而对杂质溶解度小的溶剂，使制备物从组分中有选择地被孤立出来；2）或选择一个对制备物溶解度小而对杂质溶解度大的溶剂，使制备物从组分中沉淀或结晶出来。　　1． 物质溶解性质的一般规律可归纳为如下几点：　　1）极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性溶剂中；　　2）碱性物质易溶于酸性物质中，酸性物质易溶于碱性物质中；　　3）在极性溶液中，溶剂介电常数的减少伴随溶质溶解度的降低。　　总之，符合"相似相溶"原则。　　2． 影响物质溶解度的几个主要因素：　　1）离子强度 　　A．有些物质，如DNA-蛋白，在高离子强度下溶解度增加。　　B．另一些物质，如绝大多数球蛋白和酶，在低离子强度下溶解性增加，称为盐溶；而在高离子强度下溶解度下降，直至出现沉淀，称为盐析。　　C．盐溶现象不仅在水溶液中发生，而且在低介电常数溶剂，如乙醇，也同样发生。故而稀盐液常用于大多数生化物质的提取。　　2）PH 值 　　A．两性溶质分子，在等电点时易相互聚集，溶解度最低；而在远离等电点两侧的PH值时，溶解度增大。　　B．一些酸性或碱性小分子物质，在PH值很低时酸性物质呈现非解离分子状态，而碱性物质呈现阳离子状态；反之，酸性物质呈现阴离子状态，而碱性物质呈现非解离分子状态。离子状态的物质，不论是阳离子或阴离子都易溶于水，非离子的分子状态则易溶于有机溶剂。　　C．对蛋白质、酶、核酸等生物大分子来说，应避免过酸或过碱，一般控制在PH6-8范围。如单纯从溶解度考虑，等电点在酸性范围的蛋白或酶，可选用偏酸性溶液提取；等电点在碱性范围内，则选用偏酸性溶液提取，酸性条件还可解离目的蛋白与其它组分形成的离子键，并有利于细胞的溶解。　　3）温度　　A．温度的提高可增高物质的溶解度，减少溶液的粘度，有利于提取的进行。对于一些植物成分或某些小分子生化物质，提取温度常在50-70度。　　B．热提取法虽然提高提取效率，但所得提取液含杂质较多，不如冷提取法。对绝大部分生物大分子而言，提取温度一般控制在0～10度之间，以防止生物大分子的变性。　　4）去垢剂去垢剂(表面活性剂)是一类即具有亲水基又具有疏水基的物质，一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。A．中性去垢剂 又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇醚，如苄泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醚，如Igepal CO、乳化剂OP、Triton、Pluronic(用作消泡剂、润湿剂、增溶剂)、泡敌。中性去垢剂作用后可通过Sephadex LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sephadex柱层析分离目的蛋白，不必先除去去垢剂。　　B．阴离子去垢剂 常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。前者可促进核蛋白的溶解，将核酸释放出来，并对核酸酶有一定抑制作用，常用于核酸的提取。C．阳离子去垢剂 如洁尔灭、新洁尔灭、CTAB、CPC、ZEPH、克菌定、消毒净（TMPB）、杜灭芬等，消毒灭菌类居多。　　D．天然表面活性剂 又称为生物表面活性剂，包括种类较为广泛，如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆甾醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等。　　E．两性表面活性剂 在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。　　5)变性剂　　蛋白质变性剂的作用是破坏蛋白质的次级键，如氢键、盐键和疏水力，引起天然构象的解体；它们并不破坏共价键，如肽键和二硫键，故不涉及一级结构的改变。变性剂有溶解型和沉淀型两类，SDS、尿素和胍盐是有效的溶解型变性剂，而三氯乙酸、甲醇、和氯仿/异戊醇是有效的沉淀变性剂。一般而言，变性剂应用时常大大过量，破坏氢键的变性剂用量至少两倍于氨基酸的克分子数，如1克蛋白质可可结合1.4g。 SDS溶于水可达25%，对温度敏感，W/V贮存液最为方便。需要注意的是SDS的钾盐是不溶性的，所以SDS溶液中要避免混入钾盐。 尿素极易溶于水，可达10mol/L,在8mol/L以上要注意温度以防止沉淀。尿素在水中缓慢分解形成氨及高度活性的氰酸离子，故要防止高温。 三氯乙酸与过氯酸（TCA，PCA）都是极好的沉淀剂，能沉淀蛋白质和核酸，前者应用更为广泛。 　　第二节 提取方法　　一．固液萃取　　在固液萃取中，提取物是由固相转为液相，或由细胞内转为细胞外，其提取效率与物质的扩散作用有关。　　为了增加扩散物质的量，也就是提高提取速度，常采用如下措施：　　1）提高材料的破碎程度，以增加扩散面积，减少扩散距离；　　2）进行搅拌，使已扩散的溶质迅速与溶剂混匀，以保持两项界面最大浓度差，或分多次提取，不断更换新鲜溶剂，以提高扩散速率；　　3）延长提取时间，提高提取温度，以及减少溶液粘度（如属大分子核酸干扰，加入少量鱼精蛋白或硫酸链霉素沉淀除去）等。　　实际上从破碎后的固体细胞提取所需组分，当细胞破碎程度及提取温度受到限制时，采用少量多次提取方法较为有利。　　二．液液萃取液液萃取选用的溶剂必须与被抽提的溶液互不混合、且对被抽提的溶质有选择性的溶解能力。最常用的液液萃取溶剂为二相溶剂，水或水-醇为一相，与水互不相溶的各种碳氢化合物，如低级醚、酯、苯酚等，为另外一相。 　　第三节 蛋白质和酶的提取分离　　一．蛋白质及其溶解性质　　蛋白质有多种分类方法：　　1） 按其功能 活性蛋白和非活性蛋白　　2） 按其结构 简单蛋白和结合蛋白　　3）按其溶解度 水溶性蛋白、醇溶蛋白、硬蛋白（不溶于水、稀酸、稀碱和有机溶剂，遇强酸或强碱溶解）。一般来说，大部分蛋白可溶于水、稀酸、稀碱或稀盐溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂。　　二．蛋白质的一般提取方法　　1． 水溶液提取　　凡能溶于水、稀盐、稀酸或稀碱的蛋白质，一般可用稀盐或缓冲溶液进行提取，稀盐溶液和缓冲溶液，有利于稳定蛋白结构和增加蛋白质溶解度。此时应考虑以下因素：　　1）提取液体积 加入量太少则提取不完全，加的过多则不利于浓缩，一般为原材料的3-6倍的体积，可一次或分次提取。　　2）盐浓度 一般在0.02-0.2M的范围内，常用的稀盐和缓冲液有0.02-0.05M磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、0.09-0.15M的氯化钠等。在某些情况下，也用到较高的盐浓度，如提取脱氧核糖蛋白及膜蛋白。有时为了螯合某些金属离子和解离酶分子与其它分子的静电结合，选用柠檬酸缓冲系统和焦磷酸缓冲液可获得较好效果。　　3）pH值 一般在被提取蛋白质的等电点的两侧，碱性蛋白用稀酸提取、酸性蛋白用稀碱提取。在某些情况下，为了破坏所分离的蛋白质与其他杂质的静电结合，选择偏酸（pH3-6）或偏碱（pH10-11），可以使离子键破坏而获得单一的蛋白成分。　　4）温度 提取时通常要求低温操作。只有对某些耐高温的蛋白质或酶（如胃蛋白酶、酵母醇脱氢酶及某些多肽激素。　　5）提取时常缓慢搅拌，以提高提取效率　　6）有时为了破坏蛋白质与其它物质的离子键或氢键的结合，加入少量的多价阴离子也有助于蛋白提纯。　　2． 有机溶剂提取　　一般和脂质结合比较牢靠或分子中非极性侧链较多的蛋白质和酶，难溶于水、稀酸、稀盐和稀碱，常用有机溶剂提取。他们同时有亲脂性和亲水性，如丙酮、异丙醇、乙醇、正丁醇等。其中正丁醇应用的较为广泛，能在水和脂分子间起着类似去污剂的桥梁作用，由于丁醇与蛋白质极性基团结合的竞争力比脂质大，所以可取代蛋白质与脂质的结合位置，使原来蛋白质在水中溶解度大大增加。　　有些蛋白和酶即能溶于稀酸、稀碱，又能溶于一定比例的有机溶剂。在这样的情况下，采用稀的有机溶剂提取可防止水解酶的破坏，并兼容除杂和提高提取效果的作用，现举例说明：胰岛素(insulin)可溶于稀酸、稀碱和稀醇溶液，针对组织中共存的糜蛋白酶对胰岛素(insulin)有极高的水解活性，可采用68%酒精溶液并用草酸调至PH2.5-3.0,这样便能在三方面抑制了糜蛋白酶的活性：　　1）68%酒精可以使糜蛋白酶暂时失活；　　2）草酸可以除去激活糜蛋白酶的金属离子钙；　　3）PH2.5-3.0是糜蛋白酶不适于作用的PH值。而以上条件对胰岛素(insulin)的溶解度和稳定性并没有影响，并可以除去一部分在稀酸及稀醇中不溶解的杂蛋白垂体前叶ACTH常采用酸性70%丙酮，其设计原理是酸性可以促使ACTH的溶解，而70%浓度丙酮对ACTH的溶解度没有影响，却大幅度地降低其他杂蛋白的溶出，对提高分离纯化的效果极为明显。3． 从细胞膜上提取水溶性的蛋白质和酶方法：膜上的蛋白质或酶一般有两种存在方式：一种在膜表面上，与膜成分结合较松，经过充分粉碎细胞，在一定PH范围用稀盐溶液即可提取分离；一种是膜的内在成分之一，或与膜结合十分紧密，提取十分困难，需用超声波、去污剂、或其他比较强烈的化学处理，一般常用方法有如下几种：1）浓盐或尿素等溶液提取 如NaClO4、尿素、盐酸胍等。当以上溶液浓度达到2M时，可抽去27%以上的膜蛋白，但这样的条件易引起蛋白质和酶的变性。2）碱溶液提取 在PH8-11范围内，某些膜蛋白随着PH值的提高而溶解度大大增加，但碱提取法也容易引起蛋白酶和酶的失活，应用上不广。3）加入金属螯合剂 蛋白质通过金属离子与膜成分结合时，加入金属螯合剂如EDTA可使蛋白质释放出来。4）有机溶剂提取 使用乙醇、吡啶、叔戊醇、正丁醇是抽提膜上结合或内在脂蛋白最常用也最为有效的方法。如正丁醇可在广泛的PH值（3-10）温度范围内（-2- +40）内使用。5) 去垢剂处理 用去垢剂分离膜蛋白时，要考虑两点要素，去垢剂的溶解能力和去垢剂的温和性。强阴离子去垢剂，如SDS，一般具有很好的溶解性能，但温和性不够理想，容易引起蛋白质变性；弱离子型或非离子型去垢剂对蛋白变性影响较小，但溶解能力较差。根据报道，Triton 100用于提取ADP/ATP载体蛋白时，由于作用较为温和，故所得蛋白活性要高于使用其他去污剂。 去垢剂的溶解能力与溶液的离子强度有关，一般说两者呈现正比关系。 　　 第四节 提取时的保护性措施　　提取一些具有生理活性的物质时，除了考虑被提取物溶解度外，还应考虑被提取物活性的保护。对于一些生物大分子如蛋白质、酶和核酸来说，主要措施有如下几点；1．采用缓冲系统 防止提取过程中某些酸碱基团的解离，造成溶液中PH值变化幅度过大，导致某些活性物质的变性、或由于PH变化影响提取的效果。在生化制备中，提取中常用的缓冲系统有磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、Tris缓冲液、醋酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液和巴比妥缓冲液等。　　[缓冲液] 分为非-双性离子缓冲化合物类和双性离子缓冲化合物类。前者包括HCl-KCl、甘氨酸-HCl、乌头酸盐-NaOH、柠檬酸盐-磷酸盐、柠檬酸盐-NAOH、醋酸盐、琥珀酸盐、顺丁烯二酸盐-NAOH、磷酸盐、TRIS-HCL、硼酸-硼砂、甘氨酸-NAOH、碳酸盐-碳酸氢盐等，存在反应性和缓冲能力有限等缺点。双性离子缓冲液虽然具有很多优点，但依然存在反应性与不适应性的问题，如HEPEs是氨基丁酸的拮抗性（反应性）、不适应于所有的组织培养（不适应性）。　　2．加入保护剂 防止某些生物活性物质的活性基团及酶的活性中心受到破坏。如最常见的巯基，是许多活性物质和酶催化的活性基团，极易被氧化，故提取时常加入一些还原剂。一些易受重金属离子抑制生理活性的物质，加入某些金属螯合剂，把有害金属离子螯和掉，而保持被提取物的活性。 [螯合剂和巯基] 巯基在生化反应中有两个用途，一是防止蛋白质或酶等分子中的SH-基氧化成S-S，二是某些酶反应中维持体系的还原环境。经常应用的巯基试剂有二硫丁醇类化合物（如二硫苏糖醇DTT、二硫赤酰糖醇DTE）和2-巯基乙醇，谷胱甘肽也经常应用。一般来说二硫丁醇类是常选用的巯基试剂，不仅是因为挥发性低，难闻的气味较少，而且氧化电位低，比2-巯基乙醇浓度低很多的情况下，可以使其他二硫化合物完全还原。螯合剂用于控制反应中金属离子浓度或去除金属离子，常用的螯合剂有（乙二胺四乙酸）、EGTA、1,10-二氮杂菲、柠檬酸和磷酸等。　　3．抑制水解酶的破坏 根据不同水解酶的性质采用不同方法。如需要金属离子激活的水解酶，常加入或用柠檬酸除去溶液中的某些金属离子，使酶的活性受到抑制；对热不稳定的水解酶，可以用热提取法使之失去作用；或选用PH范围，使酶活性最低；还可针对性地加入某些抑制剂，以抑制水解酶的活性，但此类方法在蛋白提取中应用较少。　　4．其它一些特殊要求的保护措施 除避免紫外线、强烈搅拌、过酸过碱、高温、冻结等情况外，有些蛋白质在提取时还有特殊要求，如固氮酶钼-铁蛋白，必须在无氧条件下进行。
怎么能到一啊?
谢谢分享啊！
很有用，谢谢楼主。
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