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【求助】关于提取病料的RNA和DNA
【求助】关于提取病料的RNA和DNA
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这个帖子发布于4年零100天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
第一次提取病料的RNA和DNA不太会，我用的TAKARA的MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.4.0，说明书上是要体液，我拿到的都是组织样品，查资料是说将组织研磨后与PBS混匀，反复冻融取上清，我想问下这个反复冻融是-20/37，还是液氮/37啊？
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建议用液氮，防止RNA降解
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提取RNA，可以拿研磨后的混合液直接提取。提DNA可以直接提，也可以冻融三次之后提，-20/37 冻融以基金能够足够了。
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为啥要反复冻融，提DNA时
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TaKaRa MiniBEST Bacteria Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0
TaKaRa MiniBEST Bacteria Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0
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■ 制品内容 (50 次量)
本试剂盒分Part I 与 Part II两部分。
□ Part I (-20℃保存)
Proteinase K (20 mg/ml)
Lysozyme (20 mg/ml)*1
1.25 ml × 2
RNase A (10 mg/ml)
*1 应尽量避免反复冻融，融化后请于4℃长期保存。
□ Part II 室温 (15-25℃) 保存
Buffer GL*1
Buffer GB*1
Buffer WA*1
Buffer WB*2
Elution Buffer
Spin Columns
Collection tubes
*1 含有强变性剂，应避免与皮肤、衣物等接触。若不小心接触到眼睛或皮肤时，请立即到医院进行处理。
*2 在首次使用前，请添加56 ml的100%乙醇，混合均匀。
■ 制品说明
本试剂盒是专门用于提取各种革兰氏阳性/阴性细菌 (Gram-positive/negative Bacteria) 基因组DNA的小量纯化试剂盒。试剂盒采用了溶菌酶以及独特的细胞裂解系统，由细胞裂解液裂解细胞释放基因组DNA，再结合DNA制备膜技术纯化基因组DNA，适用于革兰氏阴性菌及绝大部分革兰氏阳性菌。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，组织细胞裂解后，提取操作仅需20分钟便可完成。使用本试剂盒可从1.0-5.0E+09 (当OD600=1时，认为1 ml菌液中含有1.0E+09个细胞) 的细菌中纯化得到1-20 μg的高纯度基因组DNA，提取得到的基因组DNA可用于PCR反应、Southern杂交以及RAPD、AFLP、RFLP等多种分子生物学实验。
■ 保存与运输
1. 本试剂盒分三部分保存，Part I请于-20℃保存，其中Lysozyme (20 mg/ml) 融化后请于4℃长期保存；Part II于室温下 (15-25℃) 保存。
2. 本试剂盒分两部分运输，Part I请于-20℃条件下运输；Part II于室温下 (15-25℃) 运输。
■ 实验操作流程图
■ 注意事项
1. 应尽量使用新鲜的菌体，以确保提取的基因组DNA的收量及完整性。
2. 部分试剂中含刺激性化合物，操作时请戴上乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤和眼睛等，并应尽量在通风橱中进行操作。若沾染皮肤、眼睛，要立即用大量清水冲洗，必要时应寻求医疗咨询。
基因组DNA需长期保存时，建议用Elution Buffer溶出。
4. 菌体起始量不要过多，过夜培养的菌体0.1-1 ml集菌即可。
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