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L-鸟氨酸产生菌的原生质体融合育种及发酵条件研究.pdf63页
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L-鸟氨酸产生菌的原生质体融合育种及发酵条件研究
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湖北工业大学 硕士学位论文
L-鸟氨酸产生菌的原生质体融合育种及发酵条件研究 姓名：张婧芳 申请学位级别：硕士 专业：发酵工程 指导教师：汪江波 座机电话号码 湖北工业大学硕士学位论文 摘 要 本文以代谢调控发酵理论为指导，重点研究了L．鸟氨酸高产茵的选育及其发
酵条件。 1 以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株，经紫外线与氯化锂复合诱变、以及氟
乙酸、谷氨酰胺复合抗性平板初筛，选育出一株谷氨酸高产菌HG．G7，该菌株可
积累谷氨酸63．29∥L，比出发菌株产酸提高了102．4％； 06．1
最佳条件，以液体完全培养基将谷氨酸棒杆菌HG．G7和HGl7预培养至对数
原生质体制备率均达到98％左右；
最佳条件，以35％PEG处理上述制备的两原生质体，处理时间为35min，最佳处
理温度选择36℃，原生质体融合率达2．6x10～； 4 上述融合子经高渗选择培养基筛选，定向选育出了具有目的遗传标记的
39株融合子，经过对这些融合子进行初筛和复筛，得到13株在摇瓶发酵条件下，
L．鸟氨酸产量高于HGl06．17产L．鸟氨酸的量，选择其中产量最高的一株，L．鸟氨
果表明该融合子的遗传性状是稳定的； 5 对选育获得的L．鸟氨酸高产菌进行摇瓶分批发酵试验，运用单因素实验
及正交设计实验法优化出最佳发酵培养基组成为 g／L -葡萄糖70、硫酸铵80、 O．5、KH2P04
玉米浆35、酵母膏25、MgS04?7H200．4、K2HP04 0．5、FeS04．7H20
0．2、MnS04?H200．2、L一精氨酸0．5、CaC0320，生物素2099／L，VBI2099／L； 6 通过研究不同发酵条件对L．鸟氨酸发酵的影响，初步获得了最佳摇瓶分
批发酵的培养条件：发酵培养基初始pH为7．O～7．2之间；发酵温度为30"C；装
件下，目的融合子RHl69摇瓶分批发酵L．鸟氨酸
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