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电化学发光免疫分析法联合检测肿瘤标志物在临床中的应用
作者：柴琳 杨汝文 张曼丽
【关键词】& 电化学发光法
　　【摘要】 目的& 探讨血清甲胎蛋白（AFP），癌胚抗原（CEA），糖类抗原（CA125），糖类抗原（CA153）在临床肿瘤中的诊断价值。 方法& 用电化学发光免疫分析法测定了267例五类恶性肿瘤以及40例体检健康者的血清值。 结果& 恶性肿瘤AFP，CEA，CA125，CA153的阳性率均明显高于健康对照组（P<0.05）。分五组进行比较，各组最高阳性率分别是:肝癌AFP85.7%，肺癌CEA85.7%，胃肠癌CEA68.8%，乳腺癌CA15353.8%，卵巢癌CA12577.8%，均明显高于其它恶性肿瘤组（P<0.05）。肝癌四项指标合检阳性率为85.7%，与单项AFP检测阳性率相同。除肝癌外，肺癌，胃癌，乳腺癌，卵巢癌CEA/CA125/CA153三项指标联合检测阳性率均高于单项检测。 结论& 有效的联合检测可提高血清肿瘤标志物的敏感性，对临床肿瘤诊断、治疗、预后有更大的意义。&&&&&& 　　【关键词】& 电化学发光法 AFP CEA CA125 CA153恶性肿瘤&&&&& 　　电化学发光免疫测定ECLIA（Electro chemiluminescence immunoassay）是近年发展起来的一种新型技术，既具有电发光检测的高度敏感性，又具有免疫分析的高度特异性 ［1］ 。因其快速，准确，重复性好，灵敏度高及试剂安全无毒等特点，显出良好的应用前景。本文用电化学发光免疫技术测定肝癌，肺癌，胃肠癌，乳腺癌，卵巢癌的血清AFP，CEA，CA125，CA153值并进行比较分析。
　　1 材料与方法&&&& 　　1.1 标本来源 体检健康者40例。2003年6月～2005年1月我院临床确诊的恶性肿瘤患者267例，年龄27～83岁，其中肝癌42例，肺癌63例，胃肠癌96例，乳腺癌39例，卵巢癌27例，全部肿瘤病例均经病理确诊。早晨空腹抽血3ml。&&& 　　1.2 仪器和方法 仪器使用瑞士Roche公司生产的Elec-sys1010全自动电化学发光仪和配套试剂盒。其测定原理为双抗体夹心模式 ［2］ ，电化学发光由三丙胺（TPA）和三联吡啶钌N羟基琥珀酰胺（NHS）酯［Ru（bpy） 3 ］ 2 在电压作用下，经过氧化-还原反应产生许多波长为620nm的光子。因待测抗原总量与仪器测得的发光单位量（RLUs）存在正比关系，由此求出相应含量。
　　2 结果&&&& 　　2.1 结果判断 根据试剂盒提供的Expected Values和美国NCCLS标准确定各项的参考值为AFP<7.0ng/ml，CEA<10.0ng/ml，CA125<35U/ml，CA153<25U/ml。参照上述标准，大于参考范围的为阳性。&&& 　　2.2 检测结果 肝癌，肺癌，胃肠癌，乳腺癌，卵巢癌AFP，CEA，CA125，CA153的阳性检测率均明显高于健康对照组（P<0.05）。见表1。&&&&& 　　肝癌四项指标合检阳性率为85.7%，与单检AFP阳性率相同。&&& 　　肺癌、胃肠癌、乳腺癌、卵巢癌CEA，CA125，CA153不同组合检阳性率比较，见表2。&&&& 　　表1 各组血清AFP，CEA，CA125，CA153测定范围（阳性率%）的比较（略）&&&& 　　注:与其他组比较 △ P<0.05&&&& 　　表2 肺癌、胃肠癌、乳腺癌、卵巢癌CEA/CA125/CA153不同组合检阳性率%比较（略）&&&& 　　3 讨论&&&&&& 　　本文用电化学发光免疫技术检测了267例恶性肿瘤AFP，CEA，CA125，CA153，其阳性率与健康人对照组差异有显著性（P<0.05）。肝癌AFP阳性率为85.7%，与四项指标合检阳性率相等，且显著高于其他恶性肿瘤组（P<0.05），说明AFP与肝癌的关系确切，能作为诊断，鉴别诊断，疗效及预后评估的可靠指标 ［3］ 。CEA在肺癌和胃肠癌中的阳性率分别为85.7%和68.8%均显著高于其他肿瘤组（P0.05）。因CEA属于非器官特异性肿瘤相关抗原，分泌CEA的肿瘤大多位于空腔脏器，所以CEA不用于肿瘤的鉴别诊断。乳腺癌CA153阳性率为53.8%，卵巢癌CA125阳性率为77.8%均显著高于其他肿瘤组。CA125是上皮性卵巢癌和子宫性内膜癌的标志物，对卵巢良恶性肿瘤的鉴别，及卵巢癌术后或化疗后监测预后与复发是一个很有价值的血清学指标，对于及早预示复发有较好的警示价值 ［4］ 。&&& 　　两种指标联合检测提高阳性率（见表2），见于肺癌CEA+CA125阳性率为90.5%，卵巢癌CA125+CA153阳性率为88.9%。三项CEA+CA125+CA153联合检测提高阳性率，分别见于胃肠癌81.3%和乳腺癌76.9%。在妇女的恶性肿瘤中乳腺癌的发病率已高居第一位。目前的影像学诊断及病理检测虽然准确性高，但到发现往往已处于晚期，对治疗极为不利 ［5］ ，而联合CEA+CA125+CA153检测能提高乳腺癌的检出率达76.9%，故联合检测对乳腺癌的诊断意义更大。综上所述，有效的联合检测可提高标志物的敏感性。&&& 　　目前，肿瘤标记物已作为临床辅助诊断与研究的一种主要手段可通过对患者连续检测，结合临床病情和检测结果的动态变化来综合考虑，对临床的诊断、治疗、预后有更大的意义。&&&&& 　　参考文献&&&& 　　1 张丽民.化学发光标记有发光免疫分析.基础医学与临床，）:247.&&& 　　2 余传霖.现代医学免疫学.上海:上海医科大学出版社，.&&& 　　3 明德松，徐志学.鳞状细胞癌抗原和癌胚抗原联检在肺癌临床上的意义.上海医学检验杂志，）:178.&&& 　　4 Elvira M，Davelaar，Gerardj.Van.Kamp，parison of seven im-munoassays for the quantification of CA125antigen in serum.Clin Chem，，1417.&&& 　　5 陈建伟.CA153，CEA及CA125联合检测对乳腺癌诊断的意义.上海医学检验杂志，）:256.&
　　（编辑守 中）
　　作者单位:650011云南省昆明市中医医院检验科
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溶血对化学发光法检测AFP、CEA结果的影响
&&&&&&本期共收录文章20篇
　　摘要：目的 探讨溶血对化学发光法检测癌胚抗原（CEA）和甲胎蛋白（AFP）结果的影响。方法 通过离心等方法取得非溶血标本、中度溶血标本、重度溶血标本各30份，分别测定甲胎蛋白（AFP）和癌胚抗原（CEA）。通过测定不同的标本的AFP和CEA的结果，观察标本受溶血影响的程度。结果 相比较于非溶血标本，中度溶血标本对于化学发光法检测CEA有影响（P0.05）；而重度溶血标本对于化学发光法检测CEA和AFP有着明显的影响（P<0.01）。结论 中度溶血标本使得化学发光法检测CEA有一定的影响，而重度溶血标本对于化学发光法检测CEA和AFP均有着明显的影响。建议在工作中对于标本的检测一定要及时，采用最新鲜的标本，从而减少误差。 中国论文网 /1/view-4388797.htm　　关键词：溶血；化学发光法；CEA；AFP 　　临床上有多种检测AFP和CEA的方法，如酶联免疫吸附法、放射免疫法等等[1]。而化学发光免疫分析法是最近几年新发展起来的一项标记免疫技术，其自动化程度与灵敏度具高且安全无污染，是一种很好的免疫测定技术，可以用来测定多个项目，如肿瘤标志物、药物浓度等等。我们通过实验来探讨溶血对化学发光法检测CEA和AFP结果的影响，现将结果报道如下： 　　1.资料与方法 　　1.1取样：随机抽取当日静脉血标本30份，待血液标本凝固后，以3000r/min的速度进行约10分钟的离心处理，取离心后每份标本300ul血清即作为非溶血的标本，记作A1、B1组；然后把剩下的标本进行搅拌使其溶血，再以3000r/min的速度进行约10分钟的离心处理，取离心后每份标本300ul血清即得到中度溶血标本，记作A2、B2组；最后将剩下的放入冰箱冷冻室，次日取出自然溶解后以3000r/min的速度进行约10分钟的离心处理，取离心后每份标本300ul血清，即得到重度溶血标本，记作A3、B3组。 　　1.2方法：利用化学发光免疫分析仪分别测定非溶血标本、中度溶血标本、重度溶血标本的CEA与AFP值，每份标本测3次，记录下每次测得的结果数值，最后取平均值得到结果。 　　1.3观察指标：通过测得的中度溶血标本、重度溶血标本的CEA与AFP值与非溶血标本测得的CEA与AFP值做比较，来得出结论。 　　1.4统计学方法：采用spss16.0进行数据的统与处理计，将中度溶血标本、重度溶血标本的CEA与AFP值与非溶血标本测得的CEA与AFP值做t检验，P>0.05表示无统计学联系，P<0.05，判断差异具有统计学意义，P<0.01表示差异具有明显的统计学意义。 　　2.结果： 　　采用t检验对于结果进行统计分析。对于CEA的测定，中度溶血组（A2 ）相对于非溶血组（A1 ），P<0.05，差异有统计学意义；而重度溶血组（A3 ）相对于非溶血组（A1 ），P0.05，差异无明显统计学意义；而重度溶血组（B3 ）相对于非溶血组（B1），P<0.01，差异有非常明显的统计学意义。说明中度溶血标本对于AFP的测定无明显影响，而对于CEA的测定，有一定的影响，但影响较轻；而重度溶血标本对于CEA和AFP的测定均有着非常明显的影响，使得CEA的测定结果明显升高，而使得AFP的测定结果明显降低。具体结果见表1。 　　3.讨论： 　　甲胎蛋白（AFP）是在胎儿发育的早期阶段，有卵黄囊和肝脏合成的一种血清糖蛋白，分子量为70Kd，电泳时位于α1球蛋白和白蛋白之间，但在出生后不久便慢慢消失，血清AFP浓度的检测是诊断原发性肝癌和胚胎细胞肿瘤的重要指标；癌胚抗原（CEA）是一种结构复杂的可溶性糖蛋白，分子量约为180Kd，胚胎期的时候主要存在于胎儿的肝脏、胰腺以及胃肠管中，出生后大幅度降低，胃肠道恶性肿瘤时常见血清CEA的异常升高，而在肺癌、乳腺癌等其他恶性肿瘤患者的血清中，CEA也常常升高，故而CEA是一种广谱肿瘤标志物[2]。 　　血液标本中的CEA和AFP可以用多种方法予以测定，常规的有酶联免疫吸附法、放射免疫法等等，而近年来发展迅速的化学发光免疫分析法具有灵敏度高、自动化程度高、安全无污染等优点[3]。而化学发光免疫分析法的原理是采用双抗体夹心法，首先加入抗体致敏微粒，然后再在其中加入适量的待测样本，最后需要将标记抗体加入其中即可。由于化学发光氧化剂具有氧化作用，我们便可以通过这种氧化作用，测得的光量子数就和待测样本中的抗原浓度成正比，从而测出结果[4]。化学发光反应的原理实际上与酶联免疫以及放射免疫中的双抗体夹心法和竞争法有着非常类似的地方[5-6]。但是化学发光反应是测得的光量子数就和待测样本中的抗原浓度成正比，即线性关系，其本身并不受到颜色反应的一些影响与干扰。从理论上来说的话，黄疸、脂血以及溶血标本并无影响，但有研究显示，到了实际的操作检测中，标本的溶血程度不同对于化学免疫检测的项目可以产生不同程度的影响[3-4]。研究显示，当标本溶血后，会对许多实验室检验的结果有着非常大的影响，从而导致得出错误的分析与结果，误导临床研究与诊治[7]。溶血标本对检验结果影响的原因大致有以下几种：①标本的颜色可能会受到标本溶血的干扰，比如说乙肝表面抗原的酶联免疫吸附试验来检测血红蛋白的释放会造成本底的升高以致过氧化物酶释放出来从而产生假阳性，又比如说胆红素的重氮反应等等。②细胞内外待检测物浓度的差异，比如说钾、镁等电解质，又如乳酸脱氢酶、醛缩酶、丙氨酸氨基转移酶等等。 　　从以上研究中我们不难发现，血液标本的溶血尤其是重度的溶血确实会对实际中临床检验产生较为巨大的影响，从而导致得出错误的分析与结果，误导临床研究与诊治。这样就要求我们在实际工作中要非常认真地做好标本的保存与处理，要及时地运送、检验标本，保持标本的新鲜，减少并尽量避免溶血的发生，从而能够达到有效的因为溶血而导致的检测结果的误差，提高临床诊断治疗的正确性[8]。此外我们也要根据检测项目的不同从而采取不同的标准来决定标本是否可用。这样既可以保证检测结果的准确性，提高临床诊断治疗的正确性，又可以避免重复抽血对患者造成的身体上的痛苦与经济上的损失。 　　参考文献 　　[1]叶应妩，申子余，等.全国临床检验操作规程（第三版）[M].东南大学出版社，. 　　[2]王鸿利，尚红，王兰兰，等.实验诊断学（第二版）[M].人民卫生出版社，4. 　　[3]胡达拜尔迪·艾则孜，艾百都拉·斯迪克. 标本溶血对检测AFP、CEA结果影响的探讨[J].中国中医药资讯，）：31. 　　[4]王莉，覃运荣，吕世华. 溶血对化学发光法检测AFP、CEA结果影响的探讨[J].实用医技杂志，）：660. 　　[5]肖华龙，尹政芳.化学发光免疫分析实验及其临床评价[J].苏州医学院学报，）：536. 　　[6]罗炜，王慧.化学发光免疫法与放射免疫法检测血清AFP的比较[J].上海医学检验杂志，）：149. 　　[7]高银河，任忠良，孟昭歧.生化检验血液标本室前质控不容忽视[J].陕西医学检验，）：49. 　　[8]刘波，范建.标本溶血对常规生化检验项目的影响[J].邯郸医学高等专科学校学报，）.
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高通量ELISA法与电化学发光法测定血清癌胚抗原的比较
【摘要】：目的探讨高通量ELISA法和电化学发光(ECLIA)法测定血清癌胚抗原(CEA)的可比性。方法分别用ECLIA法和高通量ELISA法对标本中的血清CEA浓度进行定量检测,并对检测结果进行比较。结果 2种检测方法均能相对准确地反映血清中CEA浓度,检测结果差异无统计学意义(P0.05)。高通量ELISA法CEA检测结果在线性范围内与ECLIA法高度相关(r=0.922 8,P0.01)。结论高通量ELISA法可准确检测血清中CEA浓度。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R446.6【正文快照】：
癌胚抗原(CEA)是首先从结肠癌和胚胎肠组织中提取的一种肿瘤相关抗原[1]。CEA正常存在于妊娠前几个月胎儿的肠道、胰腺以及肝脏中,出生后体内浓度很低,一般在2.5ng/mL以下。作为一种成熟的广谱肿瘤标志物,临床上主要将其用于结直肠癌的诊断、肿瘤分期、疗效监测和复发预报等[2
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电化学发光法与Elisa法检测癌胚抗原比较
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