腺病毒(adenovirus)转染MOI的测定如何才算是合适的感染复数啊急(感染复数,转染,腺病毒,骨髓) - DNA技术 - 生物秀
标题: 腺病毒(adenovirus)转染MOI的测定如何才算是合适的感染复数啊急(感染复数,转染,腺病毒,骨髓)
摘要: [腺病毒(adenovirus)转染MOI的测定如何才算是合适的感染复数啊急(感染复数,转染,腺病毒,骨髓)] 实验中用到腺病毒(adenovirus)转染MSC（骨髓间充质细胞），手头有两个毒种，其中一个有标签（GFP），而另一个没有，用不同感染复数（根据估算出的滴度和计数的细胞数）感染细胞，2天时看到各个孔均有病变，GFP镜下见荧光（但不是很能分出个数来 好像过了MOI50就看不出区别了），但3天后，GFP组细胞均崩解了，
请问做过的朋友、知道的朋友帮忙，这样看什么样的感染复数才合适啊，没有标 关键词:[感染复数 转染 腺病毒 骨髓 间充质 细胞数 病变]……
实验中用到腺病毒(adenovirus)转染MSC（骨髓间充质细胞），手头有两个毒种，其中一个有标签（GFP），而另一个没有，用不同感染复数（根据估算出的滴度和计数的细胞数）感染细胞，2天时看到各个孔均有病变，GFP镜下见荧光（但不是很能分出个数来 好像过了MOI50就看不出区别了），但3天后，GFP组细胞均崩解了，
请问做过的朋友、知道的朋友帮忙，这样看什么样的感染复数才合适啊，没有标签应该怎样测啊。比较急，大家帮忙，谢谢了！
回复我觉得你应该先知道腺病毒(adenovirus)对MSC细胞的感染效率，然后用一个细胞感染一个病毒的量就可以了感染效率的测定，你可以用测病毒滴度的方法来确定（比较病毒对293细胞和MSC形成空斑的多少，来确定你的感染复数
相关热词：
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-& [求助]腺病毒转染神经元，转进去GFP的神经元全部死亡...
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
[求助]腺病毒转染神经元，转进去GFP的神经元全部死亡...
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
[求助]腺病毒转染神经元，转进去GFP的神经元全部死亡...
请教有经验的网友们，我利用重组后的腺病毒感染原代培养的小脑颗粒神经元，转染率在5％左右，但是发现凡是转染进去GFP的神经元全部死亡，（而转进GFP的杂质细胞－如胶质细胞状态良好），神经元表面好像桑葚状，感觉要碎掉了，有的漂起来，看不到有GFP标记的神经轴突。
请教如下问题：
1.造成上述神经元死亡的原因是什么呢？
2.如何提高腺病毒的转染率？可能我的病毒滴度还不够高。我的操作是腺病毒和神经元共同孵育1h(使用刚盖过细胞的最小体积培养基),然后补加培养基到正常培养体积。请问，在腺病毒滴度一定的条件下，怎样的转染操作能使转染率提高？转染后，是否应该换新液，将腺病毒除掉？
谢谢大家！
GFP图和可见光图
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
(26.45 KB)
信誉分 100
可用分 5877
阅读权限 255
注册 状态 离线
一般腺病毒载体和腺病毒毒液是完全不同的概念
腺病毒载体转染细胞后包装出来的是腺病毒毒液，然后用毒液去感染你的细胞．
请问你的病毒是带ＥＧＦ的空病毒载体吗，看了你的图片很正常，一般腺病毒的感染效率是百分百的，或者不感染，腺病毒感染不了神经细胞，淋巴细胞，（你的带荧光的细胞好象是胶质细胞，个人觉得）
腺病毒本来就对细胞有一定的毒性，如果感染后出现在一定的时间出现大片的死亡，说明你的病毒载体里带有制毒基因，还有这和你的病毒滴度，感染时间有很大关系
我用病毒感染过胶质细胞，带荧光的，图片很美
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
我的表达不够准确，我是利用你提到的“腺病毒毒液”感染神经元的，谢谢指正！
我的病毒是带hrGFP的，和EGFP类似。我做的过表达载体，利用带hrGFP的空载体作为对照，奇怪的是，就连空载体（只表达hrGFP）的腺病毒感染的神经元都死掉了，这是为什么呢？
想请教一下，腺病毒可以感染神经细胞的吧，文献中有报道啊，针对我使用的的颗粒神经元进行腺病毒感染的文献在pubmed上也可以查到。你的意思是说腺病毒对神经细胞感染效率低吗？
信誉分 100
可用分 5877
阅读权限 255
注册 状态 离线
如果你的荧光不是很强，只能说明你的病毒滴度不是很高
请问你感染细胞的滴度是多少，时间很重要，如果是滴度很高，可以在２４Ｈ内可表达，细胞可出现死亡
腺病毒对细胞的感染效率不可能低，只能是可不可以感染的问题
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
谢谢回复！
实际上，我还没有测定滴度，想先看看收取的腺病毒到底能不能感染自己培养的神经元，以及大致估计一下现在的滴度有多高。我是把从一个10cm皿收集到的病毒（最初293贴壁率90-95％，收病毒时，细胞基本都变圆，&70%细胞漂起来－是不是有点收晚了？ 细胞经过4次冻融后离心，病毒收集到0.5ml PBS中）平均分散到6孔板的7－8个孔中感染，得到的感染效率大概在1-5％之间。
1.我现在最糊涂的问题是搞不明白，为什么感染对照组腺病毒的神经元（只表达hrGFP）也会死掉？
2.如何提高感染效率？请问，10个10cm大皿收集到的病毒溶解在1ml PBS中，得到的病毒滴度大概有多少pfu/ml？
如果想得到&50%的感染效率，收集到的腺病毒一定要经过CsCl密度梯度离心进行纯化吗（担心损失病毒，也担心染菌）？
信誉分 100
可用分 5877
阅读权限 255
注册 状态 离线
很可能是你的病毒毒粒很少.在你扩增病毒时,你用原始的病毒感染293时,看到的荧光多吗,亮吗,如果你本身的病毒毒粒少,感染时细胞的活性不好,最后得到的病毒滴度也不会有所提高的.在收集病毒是,变圆和飘落是个很典型的状态,病毒在体外的时间不要太上,只要你的293细胞不破裂,收毒的时间就不晚
1.一般空载体的病毒感染其他的细胞也会引起一定的死亡
2.首先腺病毒可以感染你的细胞,要提高转染效率,就提高病毒的滴度,你扩增病毒用的293细胞不够,建议用2个250ML的瓶扩增病毒收集时用1ML重悬,可得到1X1O 8-9pfu/ml,不用纯化。
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
我现在的病毒滴度自己觉得应该比较高了。为了验证空载体病毒是否有毒，我使用对外界刺激抵抗力比较高（和我的神经元相比）的Hela细胞做空病毒载体感染，使用50ul感染一个24孔板中的Hela细胞，48h荧光显微镜下观察GFP，感染率接近100％。
使用的是空载体的病毒，现象是感染之后，此空Hela细胞就不再增殖了。不过看到以下现象：Hela细胞形状有变化，长出“触角”，而且呈现聚团状，各个聚团之间好像通过&类似于神经突触样的”连接形成蜘蛛网样的形状－而同时培养，没有感染的孔中，Hela细胞已经铺满整个孔了。形态发生变化的Hela图片见附件（注意，视野取的是24孔边缘，聚焦有点模糊，但是形态还是能看清楚）。
空载体病毒感染后,Hela细胞形态发生显著变化，这种现象在你的实验中有没有出现？我在想，这种变化是不是也是导致被感染的原代神经元死亡的重要原因？
(105.34 KB)
信誉分 100
可用分 5127
阅读权限 255
注册 状态 离线
再附一张40倍物镜照片
(84.24 KB)
信誉分 100
可用分 5877
阅读权限 255
注册 状态 离线
你感染ＨＥＬＡ细胞的图片很正常，要指出的是ＨＥＬＡ细胞感染病毒后形态是没有发生变化，由于你感染病毒后细胞无法正常繁殖，细胞也出现死亡后会聚集在一起，就是你的图中圆形的细胞，病毒把细胞撑得很满．很纤细的那些“触角”是因为得不到营养造成的，（正常的ＨＥＬＡ细胞本是有很大的“触角”，）
你的病毒滴度不高，在一个２４孔板加５ＵＩ就可以出现你图中的病变．
如果是这样，你的神经细胞也出现象ＨＥＬＡ　细胞的病变就是再正常不过了自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)使用指南1404_图文_百度文库
两大类热门资源免费畅读
续费一年阅读会员，立省24元！
自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)使用指南1404
上传于||文档简介
&&自​噬​双​标​腺​病​毒​(​m​R​F​P​-​G​F​P​-​L​C)​使​用​指​南44
阅读已结束，如果下载本文需要使用0下载券
想免费下载更多文档？
下载文档到电脑，查找使用更方便
还剩6页未读，继续阅读
你可能喜欢您的位置： &
Ad5-IFN—γ—GFP重组腺病毒转染的骨髓间充质干细胞对小鼠喉旁组织IFN—γ蛋白表达的实验研究
优质期刊推荐您所在位置：
&& 文章详情
不同转染方式对腺病毒介导的基因转染效率的影响
作者：孔霞1, 郭凌郧1, 张 蕾1, 郑 飞1, 杨建业1, 黄永章1, 唐俊明1, 王家宁1,2*&&&&作者单位：(郧阳医学院附属人民医院1临床医学研究所;2心内科，湖北 十堰 442000)
目的：研究携带绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein，GFP)基因的重组腺病毒在大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达。方法：将纯化的GFP重组腺病毒分别用单次转染和多次转染两种不同方法转染MSC，观察其感染效率和GFP表达水平。结果：培养的MSC呈CD90和CD105强阳性，且具有成骨、成脂肪等多向分化能力; 携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒单次转染和多次转染P3代MSC都呈现出浓度依赖性;单次转染在80 MOI时转染效率最高,而多次转染在20 MOI时转染效率即已达90%。结论：建立稳定、高效表达Ad?GFP的骨髓间充质干细胞实验体系，为MSC的标记及示踪奠定基础。
【关键词】& 腺病毒;绿色荧光蛋白;转染;骨髓间充质干细胞
　Effect of Different Transfection on Gene Transfer Efficiency Mediated with Adenovirus in Mesenchymal Stem Cells KONG Xia1,GUO Ling?yun1,ZHANG Lei1,ZHENG Fei1,YANG Jian?ye1,HUANG Yong?zhang1,TANG Jun?ming1,WANG Jia?ning1,2* (1Institute of Clinical Medicine,2Department of Cardiology,Renmin Hospital,Yunyang Medical College，Shiyan,Hubei 442000,China)
　　Abstract:Objective To investigate the expression of recombinant adenovirus encoding green fluorescent protein(GFP) in mesenchymal stem cells(MSCs).Methods The purified recombinant adenovirus encoding GFP(Ad?GFP) was transfected into MSCs with single or multiple infection,the transfer efficiency of Ad?GFP and the expression level of GFP were measured.Results Cultured MSCs were observed with a multiple differentiation potential into osteoblast,lipoblast and highly expressed CD105 and CD90.The Ad?GFP transfection of P3 generation MSCs with single or multiple ways were all shown in a concentration?dependent manner.The efficiency of MSCs transfected with Ad?GFP were about 90% in 80 MOI by single infection and in 20 MOI by multiple infection.Conclusion The system of Ad?GFP expression in MSCs was established successfully and it could provide a basis for further resarch on MSCs labelling and tracing in transplantation experiment.
　　Key words: AGreenTMesenchymal stem cells
　　近来许多研究表明，细胞移植尤其干细胞移植修复受损的心脏等组织器官是可行的、有效的。其中，骨髓源干细胞由于取材方便、又不存在免疫排斥以及伦理道德问题而备受关注。目前已经明确骨髓源干细胞主要含有间充质干细胞、造血干细胞和内皮祖细胞等。而间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)在一定条件下可以分化为心肌、骨、软骨、脂肪、胰岛、肌腱等多种类型的细胞，因此在组织损伤修复中起着非常重要的作用。研究发现，心肌缺血或梗死区域微环境诱导移植的MSC分化为心肌样细胞和参与血管形成[1],但其机制目前仍然不清楚。为此许多学者利用DAPI、BrDU等多种标记技术标记MSC以便观察移植MSC的幸存、凋亡、增殖、分化等[1-2]。但由于存在细胞分裂时标记强度降低或标记丢失等问题，因此许多学者开始利用遗传标记(如：Y染色体)或基因工程改造的绿色荧光蛋白基因(Green fluorescent protein,GFP)标记等示踪移植的干细胞[3]。而实际应用中发现，不同载体(如腺病毒、慢病毒、腺相关病毒、逆转录病毒等)介导的GFP转染MSC存在一个共性的问题：如何提高转染效率而又对细胞不造成损伤[3-5]。为此本研究利用携带GFP基因的重组腺病毒转染MSC，观察不同病毒滴度和不同转染方式对其转染效率和细胞损伤的影响，以便为深入认识移植的MSC在体内实现其修复受损心脏的机制奠定基础。
　　1 材料与方法
　　1.1 材料和仪器
　　高速冷冻离心机(Binder，德国)，流式细胞仪(Beckman Coulter)二氧化碳培养箱(Sanyo，日本)，超速冷冻离心机(CP80MX，Hitachi，日本)，倒置相差显微镜(Nikon TE 2000，日本)，紫外分光光度计(Cecil 2041，英国)，Ad?GFP(本研究所制备)，DMEM培养基购自GIBCO公司，AD293(本研究所保存),Lipofectamine 2000(Invitrogen)，胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)。
　　1.2 方法
　　1.2.1 携带绿色荧光蛋白重组腺病毒的制备、包装、鉴定[6]:通过细菌内同源重组法获得阳性重组质粒pAd?GFP。重组质粒采用Pac I酶切鉴定，若出现4.5 kb或3.0 kb的酶切片段及大于23 kb的大片段，则说明重组成功。用脂质体转染法转染AD293细胞，包装扩增Ad?GFP。用CsCl密度梯度离心和透析法纯化病毒，紫外分光光度计测定病毒滴度。
　　1.2.2 大鼠MSC的培养[1]:采用全骨髓法：大鼠断颈处死，收集双侧胫股骨中全骨髓。按1&109/L接种于75 cm2培养瓶，24 h后换液，去除未贴壁细胞。每3～4 d完全换液1次，12～14 d后细胞密度达80%～90%，用2.5 g/L的胰酶消化后1∶3传代，记为P1代MSC(P1?MSC)。随后按上述方法传代培养至P3?MSC。细胞培养条件：含150 mL/L的FBS以及1&105 &/L青霉素、100 mg/L链霉素和0.25 mg/L两性霉素B的DMEM培养基，37 ℃，50 mL/L CO2饱和湿度。
　　1.2.3 MSC的鉴定:⑴成骨诱导:P3?MSC培养至90%融合后6孔板加入成骨诱导液(150 mL/L FBS?DMEM，含地塞米松4&10-6 g/L，&-磷酸甘油1 g/L，维生素C 0.5 g/L)，每72 h换液，诱导2周，Von Kossa&s染色鉴定矿化结节。
　　⑵成脂肪诱导：P3?MSC培养至90%融合后6孔板加入成脂肪诱导液(10 mg/L胰岛素)，每72 h换液,苏丹Ⅲ染色鉴定脂肪细胞。
　　⑶流式细胞术鉴定MSC表面标记特征：用1 mL注射器将MSC(密度为1&1010/L)吹打混匀后，取600 &L(至少含有2&106个细胞)，等分为4份，分别加入4个Eppendorf管中。a管为标准对照，加入4 &L大鼠IgG1?FITC及4 &L大鼠IgGl?PE mAB(荧光二抗);b管加入4 &L CD34?FITC和4 &L CD133?PE mAB(一抗);c管加入4 &L CD90 mAB(一抗);d管加入4 &L CD105 mAB(一抗)，4 ℃下避光孵育40 min，洗涤液1 000 r/min离心5 min，用PBS洗1～2次。在c，d管中加入8 &L大鼠IgG1?FITC(荧光二抗)，4 ℃下避光孵育20 min。洗涤液洗2次，加入固定液1 mL，上流式细胞仪(Beckman Coulter)检测表面标志，应用Cotfit软件分析结果。
　　⑷免疫组化鉴定MSC表面标记特征：于24孔板中培养P3?MSC至90%融合后，PBS洗3次，40 g/L多聚甲醛固定15 min，羊血清封闭2 h，加小鼠抗大鼠CD105，小鼠抗大鼠CD90和兔抗大鼠CXCR4等一抗4 ℃孵育过夜。PBS洗3次，分别加羊抗小鼠和羊抗兔FITC标记的二抗室温孵育2 h，PBS洗3次，PBS甘油(1∶1)封片，荧光显微镜下观察。
　　1.2.4 转染MSC：⑴单次转染法：待接种的P3代MSC生长至80%融合时，加入Ad?GFP，分设为对照组，5 MOI，10 MOI，20 MOI，40 MOI，80 MOI组，转染3 d后荧光镜下观察绿色荧光并收集细胞,用流式细胞仪检测转染效率。
　　⑵多次转染法：待接种的P3代MSC生长至80%融合时，加入Ad?GFP，分设为对照组，5 MOI，10 MOI，20 MOI，40 MOI，80 MOI组，每天换液并重新加入相应浓度的Ad?GFP，连续转染3 d后，荧光镜下观察绿色荧光并收集细胞用流式细胞仪检测转染效率。
　　1.2.5 PI单染色法测MSC转染Ad?GFP时凋亡和死亡细胞数目[7]：Ad?GFP转染MSC后，消化离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗细胞2次。加入预冷70%乙醇，4 ℃固定过夜。次日离心收集细胞，以1 mL的PBS洗细胞一次，加入500 &L PBS含50 mg/L碘化丙锭(PI)，100 mg/L RNase A，0.2%Triton X?100， 4 ℃避光孵育30 min。以标准程序用流式细胞仪检测，计数5万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
　　2 结果
　　2.1 重组质粒pAd?GFP的酶切鉴定结果
　　pAd?GFP质粒经Pac I酶切后获得了正确大小的两个片段即1个大于23 kb和1个4.5 kb的片段(图1)，说明穿梭质粒pRNAT?H1.1/Adeno已与腺病毒骨架质粒Adeasy?1成功地发生了同源重组，重组发生在复制起始位点与右臂之间。
　　图1 琼脂糖凝胶电泳鉴定pAd?GFP的酶切结果
　　1 &DNA/HindⅢ
　　2 pAd?GFP was digested with Pac I
　　2.2 重组腺病毒滴度测定结果
　　重组腺病毒经繁殖、扩增、纯化后经紫外分光光度计测定，病毒滴度为4.5&1012pfu/mL，OD260/OD280>1.3，说明病毒纯度和滴度均较高，可满足体内外实验需要。
　　2.3 MSC的培养
　　由于造血干细胞不贴壁生长，经过数次换液，悬浮的造血干细胞逐渐被清除，贴壁MSC呈均一梭形成纤维细胞样形态。呈集落生长，增殖迅速。原代MSC潜伏期约为2～4 d，对数生长期3～5 d，此后进入平台期。传代MSC潜伏期较短，约1～2 d，对数生长期3～4 d，可连续传4～6代。一般原代细胞4～5 d可传代，传代细胞2～3 d可再次传代。
　　2.4 MSC的鉴定
　　MSC具有成骨、成脂肪等多向分化潜能(图2A?B)。流式分析表明MSC低表达CD34(1.5%)及CD133(1.8%);高表达CD90(96.0%)和CD105(97.0%)。免疫组化分析结果显示，MSC可高表达CD90，CD105(图2C?D)。
　　2.5 Ad?GFP转染MSC的效果
　　Ad?GFP单次转染MSC，荧光显微镜下观察及流式细胞仪分析发现：随着Ad?GFP浓度的增加，转染上Ad?GFP并呈现为绿色的MSC数目越来越多，在80 MOI最多，而且MSC形态正常(图3A)。Ad?GFP多次转染MSC时，也表现出相似的特征，但是在20或40 MOI时，已经达到峰值。在80 MOI时，尽管转染效率为100%，但是MSC贴壁的细胞数目明显减少，形态出现异常,即：表现为圆形且悬浮状态的细胞，且数目很多(图3B)。经流式细胞仪分析其死亡细胞数目达到45%。图3B Ad?GFP转染MSC效率比较
　　3 讨论
　　体外经过基因修饰的干细胞用于治疗，可以避免转染载体进入人体产生的不良影响，而且基因修饰的干细胞可以在多个靶位发挥作用。因此，基因与干细胞治疗的联合是治疗人类疾病的一个重要策略。然而，靶基因有效地转移入目的细胞(如:干细胞)是基因治疗的一个非常重要的前提条件。因此建立有效的基因转移入干细胞的技术体系显得尤为重要。
　　有效的靶基因转导和转基因表达是决定基因治疗成功与否的关键，这在很大程度上取决于基因治疗载体的选择。腺病毒载体由于诸多优点,如：宿主范围广，不仅可感染复制分裂的细胞，也可感染静止期细胞;包装容量大，可以插入7.5 kb的外源性基因片段;不整合到宿主细胞的染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险;病毒经扩增、纯化，可达到很高滴度，且感染效率可达100%;性质较稳定，对人类相对安全等，使其在体内基因转移中具有较大优势[8]。因此本研究选用腺病毒载体。
　　MSC因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我更新等特点而日益受到人们的关注，并且作为理想的种子细胞已经用于衰老和病变引起组织器官损伤的修复。但是移植的干细胞如何转变命运进而改善衰老和病变组织的功能目前仍不十分清楚。为此需要建立简单、可靠、易行以及转染效率100%的标记技术。以往常用的报道基因如&-半乳糖苷酶基因(LacZ)、荧光素酶基因(Lux)等的基因产物本身不能产生可检测的信号，必须作用于底物，通过催化底物发生特定的化学反应才能产生可检测的生成物[9-12]。而GFP是一种稳定的、可溶性的蛋白，对光稳定，且不需加任何底物，荧光性质稳定，不易淬灭[10]，而且检测方便、迅速、重复性好，尤其是可以通过流式细胞仪进行定量分析。因此本实验利用腺病毒介导的GFP标记干细胞以便以后观察干细胞的命运转变。
　　本研究选择MSC作为探讨腺病毒介导的GFP转染效率的靶细胞。研究发现Ad?GFP转染MSC呈现出浓度依赖的模式，且加入方式(单次或多次)对Ad?GFP转染MSC的效率有显著的影响。发现多次转染MSC效果优于单次转染。我们推测与其腺病毒载体类型有关，5型重组腺病毒主要通过其柯萨奇-腺病毒受体高效转移外源基因入许多种类型的细胞。而研究发现MSC低表达柯萨奇-腺病毒受体，因此，5型重组腺病毒不能有效地转移外源基因入MSC[8]。可见多次转染是解决转染效率低的一种很好的策略。本研究发现，多次转染时所给予的浓度大小不仅直接影响转染的效率，而且还影响宿主细胞的活性。因此在实验中确定合适的浓度就尤为重要。本研究中，20 MOI三次转染MSC时，其转染效率达到90%;40 MOI三次转染MSC时，其转染效率达到100%;80 MOI三次转染MSC时，其转染效率为100%，但是凋亡或死亡的MSC接近50%。这与Cubitt[13]所报道的Ad?GFP在真核细胞中表达且对细胞无明显毒性作用不一致。我们推测这可能与所转染的细胞类型不同有关。
　　本研究较为系统地观察不同病毒滴度和不同转染方式对其转染效率和细胞损伤的影响，建立了稳定、高效表达Ad?GFP的MSC实验体系，为利用移植的MSC在体内实现其修复受损心脏的机制奠定了基础。
【参考文献】
& 　[1]Tang J,Xie Q,Pan G,et al.Mesenchymal stem cells participate in angiogenesis and improve heart function in rat model of myocardial ischemia with reperfusion[J].Eur J Cardiothorac Surg,):353-361.
　　[2]Iwase T,Nagaya N,Fujii T,parison of angiogenic potency between mesenchymal stem cells and mononuclear cells in a rat model of hindlimb ischemia[J].Cardiovasc Res,):543-551
　　.[3]McMahon JM,Conroy S,Lyons M,et al.Gene transfer into rat mesenchymal stem cells:a comparative study of viral and nonviral vectors[J].Stem Cells Dev,):87-96.
　　[4]Stiehler M,Duch M,Mygind T,et al.Optimizing viral and non?viral gene transfer methods for genetic modification of porcine mesenchymal stem cells[J].Adv Exp Med Biol,-48.
　　[5]Izadpanah R,Bunnell BA.Gene delivery to mesenchymal stem cells[J].Methods Mol Biol,-167.
　　[6]张 蕾,王家宁,郭凌郧,等.携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒的构建及其在人血管平滑肌细胞中的表达[J].郧阳医学院学报,):214-217.
　　[7]孙治坤,潘 静,杨红旗,等.PI3K/Akt途径在Aβ诱导细胞凋亡过程中的作用[J].中国病理生理杂志,):84-88.
　　[8]Kawabata K,Sakurai F,Koizumi N,et al.Adenovirus vector?mediated gene transfer into stem cells[J].Mol Pharm,):95-103
　　.[9]Tang J,Wang J,Yang J,et al.Mesenchymal stem cells over?expressing SDF?1 promote angiogenesis and improve heart function in experimental myocardial infarction in rats[J].Eur J Cardiothorac Surg，):644-650.
　　[10]黄 涛.绿色荧光蛋白——一种新的基因表达标记物[J].生命的化学,):38-39.
　　[11]王家宁,黄永章,孔 霞,等.细菌内同源重组快速构建和制备表达β?半乳糖苷酶的重组腺病毒[J].郧阳医学院学报,):1-5.
　　[12]胡敬志,何 艳,鲁心安,等.中华黄萤荧光素酶的性质[J].发光学报,):770-775.
　　[13]Cubitt AB,Heim R,Adams SR,et al.Understanding, improving and using green fluorescent proteins[J].Trends Biochem Sci,):448-455
&&订阅登记：
请您在下面输入常用的Email地址、职业以便我们定期通过邮箱发送给您最新的相关医学信息，感谢您浏览首席医学网！
耳鼻喉头颈外科
胸心血管外科
耳鼻喉头颈外科
胸心血管外科
副主任医师
副主任技师
副主任药师
副主任医师
副主任技师
副主任药师
论文写作技巧}