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如何计算吸光度？分光光度计检测中，吸光度是什么意思？
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如何计算吸光度？分光光度计检测中，吸光度是什么意思？
[ 本帖最后由 大漠孤烟儿~ 于
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吸光度的计算公式的原理是朗伯-比尔定律
A=lgI0/I=-lgT
其中A为吸光率
I0为入射光强
I为透过光强
& && &&&吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等
　　吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。
　　当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。
　　吸光度用A表示。
　　A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L
　　影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。
　　符号A，表示物质对光的吸收程度。 97801 式中I0是通过均匀的液体介质的一束平行光的入射光的强度；It是透射光强度；T是透射比。A值越大，表示物质对不的吸收越大。根据比尔定律，吸光度与吸光物质的量浓度c成正比，以A对c作图，可得到光度分析的校准曲线。在多组分体系中，如果各组分的吸光质点彼此不发生作用，那么吸光度便等于各组分吸光度之和，这一规律称吸光度的加和性。据此可以进行多组分同时测定及某些化学反应平衡常数的测定。在吸光度测定中，为抵消吸收池对入射光的吸收、反射以及溶剂、试剂等对入射光的吸收、散射等因素，可选用双光束分光光度计，并选光学性质相同、厚度相等的吸收池分别盛待测溶液和参比溶液。
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同意2楼的答案，但我认为对从事检验的人而言，这个好像不应作为问题提出？
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呵呵，我觉得谁都有刚上路的时候，有问题就提出，没啥子的
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同意2楼的意见，这些化学书上都有呀，
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平时多看点书了
还是要多学习哈
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楼上的几位别装，书上有的问题就不能问了？贬低别人不等于提高自己！
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紫外分光光度计测蛋白质浓度
我最近用BCA法测试了牛血清白蛋白的标准曲线，但是效果很不好，与原点偏差很大，截距有0.13了，用紫外分光光度计测得，以下是我的测试方法，但不知道错在哪了？？？？
&&我首先称取0.1g的BSA，用PBS（PH=7.2）溶液溶解，最后定容到500ml。即浓度为200微克每毫升，然后我用这个浓度依次稀释，配成以下浓度，40、20、10、5、2.5、1、0.5、0.这些都是定容到50ml的。最后我每个浓度取4ml样品于一个小瓶子里面，然后加入现配的BCA工作液2ml，进行混合，放在60℃的水浴中孵化1个小时。冷却后取这溶液进行测量，结果R2=0.95，而且曲线偏离原点有些远。为什么会出现这样的情况呢？？？我的参比液是加了BCA工作液的PBS溶液，但在562nm处吸光度值不为0，等于-0.016，另外我想问下，测试时是否需要测量一个样就点一下自动归零之后再点start??测试标准曲线和样品曲线是一样的吗？？？我是应该直接选择波长为562nm测点还是选择400--700nm测整条曲线呢？？？谁有更具体的测量方法啊？？？求助啊。上传的是我处理的数据图和原始数据。
等待各位大神的帮助，谢谢！ 浓度高了，一般做到10ug/ml的浓度就差不多了。吸光度过高时，其值与浓度不成线性关系的。 : Originally posted by Gentle_雄雄 at
浓度高了，一般做到10mg/ml的浓度就差不多了。吸光度过高时，其值与浓度不成线性关系的。 谢谢你。我是担心做蛋白质吸附时需要高浓度的蛋白质溶液，所以才把浓度设置到了40 : Originally posted by 快乐天使0516 at
谢谢你。我是担心做蛋白质吸附时需要高浓度的蛋白质溶液，所以才把浓度设置到了40... 没必要的，如果蛋白溶液浓度很高的话，可以先稀释，再去显色测试吸光度的，最后浓度还原就行了。&& 查看话题
用紫外可见分光光度计，图的纵坐标应该是吸光度A吧？
用紫外可见分光光度计，图的纵坐标应该是吸光度A吧？利用lgT=-A,得到T=10^(-A)计算得到透光率T。这样子计算对吗，如果对，得到的透光率T为什么超过1呢。。。。。求帮助:shuai::shuai::shuai::shuai::shuai:
请问你的A是多少？应该是计算错误吧。 我的仪器分析时，纵坐标是浓度，横坐标是吸光度。 : Originally posted by klicking at
请问你的A是多少？应该是计算错误吧。 吸光度 倒是常见。。很多类似玻璃一类表面做的材料都有这个可能，具体原因我也不明白 貌似应该属于样液浓度问题……太小了& & 如果不对，望指正…… : Originally posted by
貌似应该属于样液浓度问题……太小了& & 如果不对，望指正…… 我测的固体薄片，不知道什么原因 有没有计算错误，T=10^(-A)只有在-A&0时才会大于1，你的吸光度A小于0吧，吸光度有意义的范围是0到无穷大，出现负值可能是参比不合适或浓度太小仪器测量波动给出负值。 : Originally posted by 石墨烯G at
我测的固体薄片，不知道什么原因
... 这个我就不懂了……抱歉…… : Originally posted by lee10yie at
有没有计算错误，T=10^(-A)只有在-A&0时才会大于1，你的吸光度A小于0吧，吸光度有意义的范围是0到无穷大，出现负值可能是参比不合适或浓度太小仪器测量波动给出负值。 我用载波片夹着固体薄片。求分析...谢谢 A=-log(T/T0)=-log(T%) 看到了楼上的回答，纵坐标的算法是没问题的，出现负值的关键应该是你的载玻片，你在做参比的时候是不是也是扫了载玻片？ 玻璃对紫外有强吸收啊，而且它还存在反射和折射，最终结果很可能就会很凌乱，你不用载玻片试试。 : Originally posted by yq1271 at
看到了楼上的回答，纵坐标的算法是没问题的，出现负值的关键应该是你的载玻片，你在做参比的时候是不是也是扫了载玻片？ 玻璃对紫外有强吸收啊，而且它还存在反射和折射，最终结果很可能就会很凌乱，你不用载玻片试 ... 谢谢 我感觉一束光照在物体上，会反射、吸收、透过三种现象，而且反射率、吸收率、透射率都是大于0，小于1的，并且三者相加等于1。& & 横坐标表示波长，纵坐标是吸收度，应该在横坐标上面。 嗯，纵坐标经常是A值，但也不一定，A值可以当横坐标，看你具体用来做什么了。我们实验室测同一药物不同浓度的吸光度，横坐标为浓度，纵坐标为吸光度。至于你的T值大于1，我认为是两个石英比色皿是不一样的，比方说这两个比色皿都装上双蒸水，以一个为标准，测另一个，很可能测出来的A值不是零，而是负值，这个时候，你算出来的T值就是大于1的。所以，即使是同一溶液，因为两个比色皿的差异，测出的结果会异常。因此，建议先将两个比色皿装上同一溶液，以一个为参照，测另一个A值，如果A值是零最好，不是零的话，比如是0.002，那么当换了待测液体测出来的是0.106时，实际吸光度应该为0.106-0.002=0.104。当然，如果A值是是-0.002，那么当换了待测液体测出来的是0.106时，实际吸光度应该为0.106+0.002=0.108。不知道对不对，仅供参考。 : Originally posted by A at
嗯，纵坐标经常是A值，但也不一定，A值可以当横坐标，看你具体用来做什么了。我们实验室测同一药物不同浓度的吸光度，横坐标为浓度，纵坐标为吸光度。至于你的T值大于1，我认为是两个石英比色皿是不一样的，比方说这 ... 谢谢，我测的固体薄片，用载波片夹着的 : Originally posted by 石墨烯G at
我用载波片夹着固体薄片。求分析...谢谢
... 你是用载玻片的做参比吗？你的固体薄片是纯物质还是待测物与其他固体混合而成的？ : Originally posted by lee10yie at
你是用载玻片的做参比吗？你的固体薄片是纯物质还是待测物与其他固体混合而成的？... 本应是纯净物，但是，制备的过程可能有些杂质离子在里面 : Originally posted by keke520 at
我的仪器分析时，纵坐标是浓度，横坐标是吸光度。 我的也是，纵坐标时浓度，横坐标是A : Originally posted by 石墨烯G at
本应是纯净物，但是，制备的过程可能有些杂质离子在里面
... 用载玻片作为参比给仪器调零，测样品时用调零时的载玻片的同一侧对准入射光，看看结果怎么样。&& 查看话题
求助：吸光度是负值（透过率大于150%）是怎么回事？
求助：我用紫外分光光度计测了一个样，结果吸光度是负值（透过率大于150%）是怎么回事？请各位帮个忙！
我也遇到一个，不知道怎么回事, 参比的问题， 这主要是由于参比侧和测量侧放置的样本对紫外区域光反射不同（确切的说是测量侧的反射率低于参比测的反射率）引起的。
　　事实上，由紫外-可见分光光度计“测量”出的吸收指的是吸光度是一种根据相对（相对于参比侧）透射率的计算结果。如果吸光度出现了负值，说明测量侧的光透射强度高于参比侧光透射强度。通常情况下，我们是认为参比侧和测量侧具有相同的反射率（这也是吸光度概念提出的模型条件），这样当测量侧样本对光有吸收且吸收率高于参比侧的样本时，那么从测量侧透射出来的光强便会小于从参比侧透射出来的光强，从而得到低于100％的透射率，进而得到正值的吸光度。但特殊情况下，当测量侧的反射率低于或显著低于参比侧反射率时，尽管测量侧样本吸收率一般会高于参比侧的样本，也可能出现从测量侧透射出来的光强大于从参比侧透射出来的光强这种情况，此时将会得到高于100％的透射率，以此计算出来的吸光度必然是负值。
　　另外，测量之前（测量侧和参比侧均空白）应该先进行基线校准，以排除光路器件等对入射光光强同一性造成的影响，只不过这属于仪器操作规范问题，非物理问题。 实际上你制备的膜是增透膜,详细情况可参阅增透膜的相关文献.您的举报已经提交成功，我们将尽快处理，谢谢！
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